专利名称：参龙养血膏质量标准的检测方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域。具体涉及参龙养血膏质量标准的检测方法。

发明内容
参龙养血膏是由人参、黄芪、党参、白术、黄精(制)、仙鹤草、龙眼肉、熟地黄、制何首乌、丹参、白芍、枸杞子、麦冬、石斛、菟丝子、锁阳、淫羊藿、桑枝、刘寄奴、山楂、茯苓、橘子油等二十二味药组成，具有益气温阳，滋阴养血的功效。用于气血阴阳不足引起的神疲乏力，头晕眼花，腰膝酸软等症。方中以制何首乌为臣药，具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨的功效。
原质量标准中只对其中丹参、黄芪、人参、淫羊藿四味药进行了定性鉴别，但没有反映药物内在质量的指标成分的含量测定项，无法在生产中有效的保证产品的内在质量，因而药品疗效得不到保证。
本发明所要解决的技术问题在于改进原有质量标准，增加其中制何首乌、山楂、白芍等三味药的定性鉴别，建产了制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。
本发明提供了参龙养血膏质量标准的检测方法，该方法包括对其中制何首乌、山楂和白芍的定性鉴别及制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。
1、制何首乌的薄层鉴别制何首乌含有大黄素，因此采用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取，经试验，能得到清晰的薄层色谱图。取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺制何首乌的“参龙养血膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(25～10∶9～3∶0.2～2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，阴性无干扰。
2、山楂的薄层鉴别取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺山楂的“参龙养血膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(35～10∶9～3∶0.1～2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰。阴性样品无干扰。
3、白芍的薄层鉴别取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，弃去溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液用水饱和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗涤二次，每次50ml，弃去溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，加在中性氧化铝柱(3g，100-200目)上，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺白芍的“参龙养血膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和阴性样品各10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(55～30∶9～3∶15～5∶0.1～0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。
4、制何首乌含量测定(1)仪器与试药仪器Agilent——1100液相色谱仪；对照品来源于中国药品生物制品检定所(批号0844-200003，供含量测定用)；样品批号(1)030901 (2)030902 (3)030903试剂甲醇为色谱醇。
(2)色谱条件经过摸索，采用检测波长320nm，流速2.5～0.5ml/min，经试验，确定采用流动相乙腈-水(1～35∶99～65)。色谱柱C18(15cm×5μm)，柱温45～20℃。
(3)供试品制备方法取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
④提取时间的选择取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，分别(a)振摇、(b)提取(超声处理或热回流或冷浸)5分钟、(c)提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟、(d)提取(超声处理或热回流或冷浸)15分钟、(f)提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液测定，结果见下表选择提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟可将所测成分完全提出。
提取时间

(5)标准曲线取不同浓度的2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液分别进样，以峰面积为纵坐标Y，进样量为横坐标X，做回归得标准曲线，结果表明2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量18.3～915.0ng范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系，结果见下表。
标准曲线

(6)精密度试验精密量取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，进样分析，重复测定5次，记录峰面积，结果见下表。
精密度试验

(7)稳定性试验取同一供试品溶液分别在制备好后0小时、4小时、8小时、12小时、16小时注入液相色谱仪，进样测定结果，其峰面积均未见明显变化，说明供试品溶液较稳定，结果见下表。
稳定性试验

(8)重复性试验取样品(批号030901)25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，分别测定，结果见下表。
重每性试验

(9)加样回收率测定取样品(批号030901)12.5g，置烧杯中，精密称定，精密加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品一定量，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，分别测定，结果见下表。
加样回收率

(10)样品测定取样品(批号(1)030901 (2)030902 (3)030903)25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，分别测定，结果见下表样品测定

(11)阴性样品测定取不含制何首乌的样品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，进样10μl进行分析。结果对样品测定无干扰。(见图5、6、7)为了考察《参龙养血膏》的稳定性情况，进行了长期稳定性试验，情况如下1、试验条件将市售包装《参龙养血膏》置于室温条件下(25℃±2℃)，相对湿度60％±10％，放置一定时间后进行观察，取样检测，重点考察性状，鉴别，含量，检查，卫生学检查项目。
2、测试结论《参龙养血膏》经一年多来产品稳定性试验表明，产品的理化性质和卫生学检查等重点考察项目均符合《参龙养血膏》质量标准要求，产品质量较为稳定。
长期稳定性试验批号030101 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)

长期稳定性试验批号030102 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)

长期稳定性试验批号030201 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)



图1 制何首乌薄层色谱图(日光下)1、阴性样品 2、样品 3、大黄素对照品图2 制何首乌薄层气色谱图(氨蒸气熏)1、阴性样品 2、样品 3、大黄素对照品图3 山楂薄层色谱图1、阴性样品 2、样品 3、熊果酸对照品图4 白芍薄层色谱图1、阴性样品 2、样品 3、芍药苷对照品图5 制何乌首含量测定对照品色谱6 制何乌首含量测定样品色谱7 制何乌首含量测定阴性样品色谱图
具体实施例方式三批样品检验实例一 批号030901(1)制何首乌薄层鉴别取100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液另有备用，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸(25～10∶9～3∶0.2～2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。
(2)山楂薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液，另取熊果酸对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(35～10∶9～3∶0.1～2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(3)芍药薄层鉴别取鉴别(1)项下的备用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，用水饱和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗涤二次，每次50ml，弃去溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，加在中性氧化铝柱3g，100-200目上，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸(55～30∶9～3∶15～5∶0.1～0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(4)制何首乌含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用乙腈-水(1～35∶99～65)为流动相；检测波长为320nm，理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于6500～2000。
对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品96.2609μg，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)定容至10ml，制成浓度为9.6261μg/ml的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
结果 每g含制何首乌(以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计)37μg。
实例二 批号030902按030901批检测，检测结果(1)三项鉴别均呈阳性，(2)每g含制何首乌(以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计)36.25μg。
实例三 批号030903按030901批检测，检测结果(1)三项鉴别均呈阳性，(2)每g含制何首乌(以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计)37.01μg。
权利要求
1.一种参龙养血膏质量标准的检测方法，其特征在于该检测方法增加了其中制何首乌、山楂和白芍三味药的定性鉴别，建立了制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。
2.根据权利要求1所述一种参龙养血膏质量标准的检测方法，其特征在于其中所述的制何首乌、山楂和白芍三味药的定性鉴别包括下列步骤(1)制何首乌薄层取参龙养血膏100g，置锥形瓶中，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿80ml使溶解，用溶剂醋酸乙酯、氯仿或乙醚提取二次，每次50ml，合并溶剂醋酸乙酯、氯仿或乙醚液，溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液另有备用，用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿50ml洗涤，溶剂醋酸乙酯、氯仿或乙醚液蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄素对照品，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸25～10∶9～3∶0.2～2.5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(2)山楂薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液，另取熊果酸对照品，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸35～10∶9～3∶0.1～2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)白芍薄层鉴别取鉴别(1)项下的备用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液，用水饱和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿洗涤二次，每次50ml，弃去溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，加在中性氧化铝柱3g，100-200目上，用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸55～30∶9～3∶15～5∶0.1～0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述一种参龙养血膏质量标准的检测方法，其特征在于其中所述的制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定包括下列步骤照高效液相色谱法测定(1)色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用乙腈-水1～35∶99～65为流动相；检测波长为320nm，理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于6500～2000；(2)对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含10μg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同-量瓶中，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿4ml，摇匀，提取超声处理或热回流或冷浸10分钟，放冷后，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，本品每g含制何首乌以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷C20H22O9计，不得少于28μg。
全文摘要
本发明属于中药技术领域。本发明公开了参龙养血膏中的制何首乌、山楂、白芍等三味药的定性鉴别，建立了制何首乌中2、3、5、4’－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的含量测定。通过本发明增加的质量检测，使产品的稳定性有较大的提高，有利于工业化生产的质量控制。
文档编号G01N30/94GK1737568SQ20041008932
公开日2006年2月22日 申请日期2004年12月9日 优先权日2004年12月9日
发明者徐福莺, 邵宝平, 谢松, 沈绣红 申请人:上海雷允上药业有限公司