专利名称：酸性磷酸酶活性测定试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及酸性磷酸酶活性测定试剂盒技术领域。
背景技术：
前列腺癌是主要危及老年男性的恶性肿瘤，在欧美国家其发病率居男性恶性肿瘤第一位，死亡率仅次于肺癌，占第二位。我国居民前列腺癌的患病率低于国外，但随着我国人口的老龄化及居民生活水平的提高，发病率也呈增长趋势 。在美国，平均每六个老年人中就有一个人患前列腺癌。前列腺酸性磷酸酶是男性血清酸性磷酸酶(ACP)的主要来源，是只由前列腺上皮细胞溶酶体产生的一种同工酶，是一种糖蛋白，有两个亚基构成，相对分子量约为1，000, 000，主要分布在精液和尿中，血清中含量较低，具有组织特异性，一度被认为是前列腺癌特异性最敏感的肿瘤标志物，广泛用于前列腺诊断和治疗监控。近来的研究表明，它并不是绝对的组织特异性标志物。在临床上，前列腺炎在恶性和良性病变之间重叠较大，不宜单独作为前列腺癌早期诊断的有效筛选指标。但将其用以联检，结合前列腺特异抗原密度测量、直肠指诊和直肠超等手段，能明显提高前列腺癌筛查的灵敏度。目前实验室多采用以磷酸萘酚为底物，经ACP(酸性磷酸酶)水解后释放萘酚，再与固红TR盐发生偶氮化反应，通过在405nm处监测偶氮化合物生成的速率进行ACP动力学法测定，由于胆红素等在400nm处有吸收，因此对检测会产生严重干扰。

发明内容
本发明针对现有技术不足，提供一种准确度、精密度较好，稳定性好，抗胆红素干扰能力强，能满足临床检验要求的酸性磷酸酶活性测定试剂盒。为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为酸性磷酸酶活性测定试剂，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分
缓冲液 CpH 4.0-5.0)0.05-0.5 M (moI/L)
鱗酸萘■1-100 mM (mmol/L)
_红丁11 (4_氯邻甲苯胺盐酸盐)1-100 mM 去干扰剂1~100 mM
稳定剂0.1-10 g/L
激活剂0.1 10 g/L
防腐剂0.1 10 g/L。本发明试剂盒可以是单试剂试剂盒，做成单试剂，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分
缓冲液(pH4.0~5.0)0.05-0.5 M
磷酸萘酚I-IOOmM
N 红 TRIMOOmM
去千扰剂1-100 mM
稳定剂0.1-10 g/L
激活剂0.1 10g/L
防腐剂0.1 10g/L;上述单试剂的试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用。发明试剂盒还可以配成双试剂试剂盒，更有利于消除胆红素干扰，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分试剂I :
缓冲液 CpH 4.0-5.0)0.05-0.5 M
去干扰剂I-IOOmM
稳定剂0.1~10g/L
防腐剂0.1 10g/L;试剂2:
磷酸萘酚I-IOOmM
㈣红 TRI-IOOmM
激活剂0.1-10 g/L
防腐剂0.1 10 g/L。双试剂的 配方不仅限于上述配方，其中试剂2的成分磷酸萘酚，固红TR，激活剂中的一种或者两种可以放在试剂I ;试剂I中的成分去干扰剂，稳定剂中的一种也可以放在试剂2，如此可形成多种配方，不在此一一详述。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用。发明试剂盒还可以配成如下三试剂的试剂盒，不但更有利于消除胆红素干扰，还更利于试剂的稳定，该试剂盒包括如下浓度范围的各组分试剂I :缓冲液(pH 4.0-5.0)0.05-0.5 M
去千扰剂I-IOOmM
稳定剂0.1 10 g/L
防腐剂0.1 10 g/L;试剂2:磷酸萘酚I-IOOmM防腐剂0. I 10g/L ；试剂3 固红TRI-IOOmM激活剂0. I 10g/L防腐剂0. I 10g/L。上述三试剂的配方不仅限于上述配方，其中试剂I的成分去干扰剂、稳定剂可以放在试剂2或试剂3中；试剂2的成分磷酸萘酚可以放在试剂I或试剂3中；试剂3的成分固红TR、激活剂可以放在试剂I或试剂2中；如此可形成多种配方，不在此一一详述。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液体试剂，直接使用。本发明上述的各种试剂盒配置，即采用常规的将各组分与水混合均匀，形成上述试剂配方的试剂盒。本发明上述各种试剂盒中的缓冲液的pH值可以是4.(T5.0，可以是甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液等中的一种，优选2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液。本发明中的激活剂为曲拉通100 (曲拉通X-100)、l，5-戊二醇、1，10-癸二醇等中的一种或几种。本发明中的稳定剂为吐温20、吐温80、布里杰-35 (Brij-35)(非离子表面活性剂)、甘油、乙二醇、BSA等中的一种或几种。本发明中的去干扰剂为钒酸盐(钒酸钠、钒酸钾等)、亚硝酸盐(如钾、钠盐)、亚铁氰化钾、高铁氰化钾等中的一种或几种。本发明中的磷酸萘酚包括萘酚AS-BI磷酸二钠、萘酚AS-MX磷酸二钠、磷酸萘酚AS-E、磷酸萘酚AS-BS、萘酚AS-TR磷酸盐等中的一种或几种。本发明的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂(如Proclin300)等。本发明的优点和有益效果本发明的试剂盒采用在酸性条件下，通过去干扰剂的氧化作用将样本中存在的胆红素氧化成胆绿素，从而消除了其在405nm检测波长处的干扰。
具体实施例方式以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案作进一步描述，但本发明并不限于这些实施例。本发明试剂盒均采用行业常规方法配置，具体过程不再详述。本发明的检测原理如下a-磷酸萘酚经ACP水解后释放出a-萘酚和磷酸，a-萘酚再与固红TR盐发生偶氮化反应生成重氮化合物，重氮化合物在405nm处有特异吸收，通过测定在405nm处吸光度的变化速率来计算ACP的活性。实施例I (单试剂)
权利要求
1.一种酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于该试剂盒包括如下浓度范围的各组分缓冲液(pH4.0-5.0)0.05-0.5 M磷酸萘酚I IOOmMj丨1丨UI TR卜 I OOmM去千扰剂I-IOOmM稳定剂0.1 10g/L激活剂0.1~10g/L防腐剂0.1 10g/L。
2.—种权利要求I所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于该试剂盒为单试剂试剂盒，该单试剂试剂盒包括如下浓度范围的各组分缓冲液(pH4.0....5.0)0.05-0.5 Vl磷酸萘酚I IOOmM!丨丨丨I红TR! -100 mM去干扰剂I-IOOmM稳定剂0.1~10g/L激活剂0.1 10g/L防腐剂0.1 10g/L。
3.—种权利要求I所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于该试剂盒为双试剂试剂盒，该双试剂试剂盒包括如下浓度范围的各组分 试剂I :缓冲液(pH 4.0-5.0；0.05-0.5 M去干扰剂I-IOOmM稳定剂0.1 10g/L防腐剂0.1 10g/L; 试剂2 磷酸萘酚I-IOOmMj丨丨丨I红TRI-IOOmM激活剂0.1 10g/L防腐剂0.1-10 g/Lo
4.一种权利要求I所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于该试剂盒为三试剂试剂盒，该三试剂试剂盒包括如下浓度范围的各组分 试剂I :缓冲液(pH 4.0-5.0)0.05-0.5 M去千扰剂I-IOOmM稳定剂0.1~10g/L防腐剂0.1 10g/L; 试剂2 磷酸萘酚I-IOOmM 防腐剂0. I 10g/L ； 试剂3 固红 TRI-IOOmM 激活剂0. I 10g/L 防腐剂0. I 10g/L。
5.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于所述的缓冲液为甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液中的一种。
6.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于所述的激活剂为曲拉通100、I，5-戊二醇、1，10-癸二醇中的一种或几种。
7.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于所述的稳定剂为吐温20、吐温80、布里杰-35、甘油、乙二醇、BSA中的一种或几种。
8.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于所述的去干扰剂为钒酸盐、亚硝酸盐、亚铁氰化钾、高铁氰化钾中的一种或几种。
9.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于所述的磷酸萘酚包括萘酚AS-BI磷酸二钠、萘酚AS-MX磷酸二钠、磷酸萘酚AS-E、磷酸萘酚AS-BS、萘酚AS-TR磷酸盐中的一种或几种。
10.根据权利要求1-4任一权利要求所述的酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于所述的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂。
全文摘要
本发明公开一种酸性磷酸酶活性测定试剂，其特征在于该试剂盒包括如下浓度范围的各组分缓冲液(pH4.0-5.0)0.05~0.5M，磷酸萘酚1~100mm，固红TR 1~100mm，去干扰剂1~100mm，稳定剂0.1~10g/L，激活剂0.1~10g/L，防腐剂0.1~10g/L。本发明的试剂盒具有准确度、精密度较好，稳定性好，抗胆红素干扰能力强，能满足临床检验要求的优点。
文档编号G01N21/75GK102706861SQ20121016972
公开日2012年10月3日 申请日期2012年5月24日 优先权日2012年5月24日
发明者沃燕波, 臧海燕, 邹炳德, 邹继华 申请人:宁波美康生物科技股份有限公司