专利名称：鱼类受精卵定向包埋技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及定向包埋技术。
背景技术：
由于鱼类卵黄丰富在常规光镜切片时不能切制，再一个受光显微镜和电镜的局限性及切片厚度的影响，在选择鱼受精部分时容易将需要部分(通常指受精部分)丢失。直接制成的光镜或电镜样本，由于切片面积小，修块不准等多种原因，又容易将需要的部分修丢，造成不完整现象，直接影响观察，这样必需做大量样本才能观察到所需要的部分。

发明内容
本发明提供了鱼类受精卵定向包埋技术，目的是为了解决现有制片中受精部分易丢失及切制质量差的问题。鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块， 然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成Imm小块， 经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本发明的鱼类受精卵定向包埋技术，制成的光镜或电镜的样本，可保证鱼卵能够切制完整，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容，切制质量好，图像清晰，观察效果良好，使微观与宏观的结构有一个统一认识；同时减少了大量烦索的工作量，提高效率。


图I为实施例I中所得完整的鲫鱼受精卵光镜片子的显微图；图2为实施例I中所得鲫鱼受精卵动物极光镜片子的显微图；图3为实施例2中所得鲫鱼受精卵极体电镜片子的显微图；图4为实施例2中所得鲫鱼受精卵两性核电镜片子的显微图。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、 透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块， 然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本实施方式步骤一中鱼卵为所有鱼类的鱼卵。本实施方式步骤一中脱水处理为依次采用体积浓度为70%的乙醇、体积浓度为 85%的乙醇、体积浓度为75%的乙醇和体积浓度为100%的乙醇进行处理。本实施方式步骤一中透明处理为采用体积浓度为100%的乙醇二甲苯=I I 进行处理，然后用二甲苯进行处理。本实施方式步骤一中透蜡处理为采用二甲苯石蜡=I I进行处理，然后用石蜡进行处理。本实施方式步骤二中反光定位法，是将包埋块固定住放于立体显微镜下，然后调节光源，使包埋块的卵子的切面与水平面间成28 32度，使切面出现反光，观察其结构选取受精部分，然后用锋利刀片进行定位修块。本实施方式步骤三中热刀片是指用酒精灯烧热的刀片。
具体实施方式
二 本实施方式鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成Imm小块， 经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本实施方式步骤一中鱼卵为所有鱼类的鱼卵。本实施方式步骤一中脱水处理为依次采用体积浓度为70%的乙醇、体积浓度为 85%的乙醇、体积浓度为75%的乙醇和体积浓度为100%的乙醇进行处理。本实施方式步骤一中透明处理为采用体积浓度为100%的乙醇二甲苯=I I 进行处理，然后用二甲苯进行处理。
本实施方式步骤一中透蜡处理为采用二甲苯石蜡=I I进行处理，然后用石蜡进行处理。本实施方式步骤二中反光定位法，是将包埋块固定住放于立体显微镜下，然后调节光源，使包埋块的卵子的切面与水平面间成28 32度，使切面出现反光，观察其结构选取受精部分，然后用锋利刀片进行定位修块。本实施方式步骤三中热刀片是指用酒精灯烧热的刀片。本实施方式步骤三中锇酸的配制方法4% K2CrO7重铬酸钾(PH7. 2)5ml+2% OsO4 四氧化锇水溶液10ml+3. 4% NaCl氯化钠水溶液5ml进行混合得固定液，使固定液中含I % 重铬酸钾、I %四氧化锇和0.85%氯化钠，最终PH = 7. 2。本实施方式步骤三中磷酸缓冲液的配制方法①取11. 876g的Na2HPO4定溶于 IOOOml蒸溜水中，获得溶液A ;②取4. 531g的KH2PO4磷酸二氢钾定溶于500ml蒸溜水中，获得溶液B 将溶液A和溶液B混合即得。本实施方式步骤三中各级丙酮进行脱水处理是依次采用体积浓度为50%的丙酮、 体积浓度为70%的丙酮、体积浓度为95%的丙酮和体积浓度为100%的丙酮进行脱水处理。实施例I鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、 透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块， 然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。本实施例步骤一中鱼卵采用鲫鱼的鱼卵。本实施例中所得光镜片子，经光镜观察，如图I和2所示，鱼卵能够切制完整且图像清晰、轮廓分明，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容。实施例2鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、 透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成Imm小块， 经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。
本实施例步骤一中鱼卵采用鲫鱼的鱼卵。本实施例中所得电镜片子，经电镜观察，如图3和4所示，鱼卵能够切制完整且图像清晰、轮廓分明，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容。
权利要求
1.鱼类受精卵定向包埋技术，其特征在于鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行 一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成2mm小块，然后采用二次定向包埋制成常规的光镜包埋块；四、光镜包埋块采用常规切片技术进行切片，制成常规光镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。
2.鱼类受精卵定向包埋技术，其特征在于鱼类受精卵定向包埋技术按以下步骤进行 一、将鱼卵放入质量浓度为10%的甲醛中固定，然后依次进行包埋前的脱水处理、透明处理和透蜡处理；二、鱼卵经步骤一处理后进行包埋，包埋块经粗修块后依反光定位法进行定位修块；三、经定位修块的鱼卵用热刀片划痕标记受精部分并切取，将卵子制成Imm小块，经脱腊脱苯处理后采用锇酸进行二次固定，然后用磷酸缓冲液冲洗，再用各级丙酮进行脱水处理，然后用环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；四、电镜包埋块采用电镜切片技术进行切片，制成常规电镜片子，即完成鱼类受精卵定向包埋。
全文摘要
鱼类受精卵定向包埋技术，它涉及定向包埋技术。它解决了现有制片中受精部分易丢失及切制质量差的问题。方法1鱼卵固定后进行脱水、透明和透蜡处理；包埋后进行定位修块；标记受精部分并切取，二次定向包埋制成光镜包埋块；制成常规光镜片子即完成。方法2鱼卵固定后进行脱水、透明和透蜡处理；包埋后进行定位修块；标记受精部分并切取，二次固定，后冲洗、脱水处理，环氧树脂#618进行定向包埋和聚合，获得电镜包埋块；制成常规电镜片子即完成。本发明制成的光镜或电镜的样本，可保证鱼卵能够切制完整，鱼卵的受精部分可以精确的观察到所需要的内容，切制质量好，图像清晰，观察效果良好；同时减少了大量烦索的工作量，提高效率。
文档编号G01N1/36GK102607930SQ20121006511
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月13日 优先权日2012年3月13日
发明者关海红, 尹家胜 申请人:中国水产科学研究院黑龙江水产研究所