专利名称：一种β2-微球蛋白检测试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人￠2-微球蛋白的检测试剂盒。
背景技术：
￠2-微球蛋白是由100个氨基酸残基组成的单链多肽低分子蛋白。电泳在￠2区，故称￠2-微球蛋白。起源于人体间质，上皮细胞和造血系统的正常细胞以及恶性肿瘤细胞均能合成P 2-微球蛋白。P 2—微球蛋白相对分子量小，可自由通过肾小球滤过，并仅由肾脏排泄且体内产 生速率恒定，不受年龄、性别、机体肌肉组织多少的影响，因此血清P 2—微球蛋白是肾损害的早期指标。血清￠2—微球蛋白的升高可反映肾小球滤过功能受损或滤过负荷是否增加的情况，而尿液中排出￠2—微球蛋白增高，则提示肾小管损害或滤过负荷增加。血￠2—微球蛋白升高而尿￠2 —微球蛋白正常，主要由于肾小球滤过功能下降，常见于急、慢性肾炎，肾功能衰竭等。血清0 2—微球蛋白增高，除因肾小球滤过率降低外，另一个原因是合成增加，见于恶性增生性病变及结缔组织病变，在肿瘤方面，播散性病变较局限的病变中，更易产生血清￠2—微球蛋白升高。某些恶性肿瘤(如原发性肝癌、肺癌、骨髓瘤等)，自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、溶血性贫血)时，血、尿P 2 一微球蛋白均升高。因此，^ 2 一微球蛋白测定在评价肾脏功能、协助诊断和鉴别诊断恶性肿瘤方面有显著作用。目前已知的测定P2—微球蛋白的方法有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫法、酶联免疫法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。

发明内容
本发明的目的是提供一种￠2-微球蛋白的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为
试剂Rl :缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；
试剂R2 :缓冲液、结合有￠2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下
(a)按下列比例配制好试剂
试剂Rl
Tris 缓冲液 200-220mmol/L聚乙二醇5-10 mmol/L
叠氮钠1-5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200-220mmol/L
结合有P 2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3. 5-5% (v/v)
吐温-20l-5mmol/L 叠氮钠0. 5-3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l_5mmol/L。(b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；
(C)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；
Cd)根据吸光度变化值计算出样本中P 2-微球蛋白的浓度。
具体实施例方式下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。实施例I :
本发明的试剂盒举例是双试剂，其中
试剂Rl
Tris 缓冲液 200mmol/L 聚乙二醇8 mmol /I,
叠氮钠5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200mmol/L
结合有P 2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v)
吐温 _20Smmol /I,
叠氮钠3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L。实施例2 :试剂盒使用方法
I.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中
试剂Rl
Tris 缓冲液 200mmol/L 聚乙二醇8 mmol /I,
叠氮钠5 mmol/L
乙二胺四乙酸钠5mmol/L牛血清白蛋白 5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200mmol/L
结合有P 2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v)
吐温 _20Smmol /I,
叠氮钠3 mmol/L
乙二胺四乙酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L。2.全自动生化仪参数设置
(a)检测温度37°C
(b)检测波长主波长为550nm;副波长为700 nm ；
(c)反应时间8分钟，其中，温育时间5分钟，反应时间0.5分钟，检测时间2. 5分钟。3.检测步骤(全部在全自动生化分析仪中完成)
(a)取240 ii L试剂I和3 ii L血清样本混匀。(b)将混匀后的溶液在37°C温育5分钟。(c)添加60 ii L试剂2，反应0. 5分钟后，在550nm条件下检测2. 5分钟的吸光度变化。4.通过吸光度变化的计算出￠2-微球蛋白的浓度。本发明具有的优点
该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器(生化分析仪)在各大医院和检测中心普遍使用。
权利要求
1.一种￠2-微球蛋白检测试剂盒，其组成为试剂R1、试剂R2，其中 a、试剂Rl 包括200-220mmol/L Tris 缓冲液、5-10 mmol/L 聚乙二醇、1_5 mmol/L 叠氮钠、l-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、l_5mmol/L牛血清白蛋白； b、试剂R2200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有P 2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、l_5mmol/L 吐温-20、0. 5-3 mmol/L叠氮钠、l_5mmol/L 乙二胺四乙酸钠、l_5mmol/L牛血清白蛋白。
2.权利要求I的试剂盒，其特征在于试剂R2中的￠2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为10. 5mg/ml的P 2-微球蛋白单克隆抗体与10%的乳胶颗粒(直径50-100nm)，加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至0. 5%,并加入0. 1-0. 3 mmol/L叠氮钠。
3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为 (a)按下列比例配制好试剂 试剂Rl Tris 缓冲液 200-220mmol/L 聚乙二醇5-10 mmol /I, 叠氮钠1-5 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; 试剂R2 Tris 缓冲液 200-220mmol/L 结合有P 2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3. 5-5% (v/v) 吐温-20l-5mmol/L 叠氮钠0. 5-3 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l_5mmol/L (b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应； (c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值； Cd)根据吸光度变化值计算出样本中P 2-微球蛋白的浓度。
4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在I:90到I :110之间。
5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37(±1) °C。
6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为8-10分钟。
7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的主波长为550nm，副波长为700 nm。
全文摘要
一种β2-微球蛋白的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括试剂R1缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2缓冲液、结合有β2-微球蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长550nm处吸光度变化的速度，从而测算出β2-微球蛋白的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
文档编号G01N33/68GK102749457SQ201210261840
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月27日 优先权日2012年7月27日
发明者张雷 申请人:北京恩济和生物科技有限公司