专利名称：甲型h1n1流感免疫荧光检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及荧光测试物的使用，具体是一种甲型Hmi流感免疫荧光检测试 剂盒。
背景技术：
甲型Hmi流感为急性呼吸道传染病，其病原体是一种新型的甲型Hmi流感病毒， 在人群中传播。甲型Hmi流感病毒属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，甲型流感病毒属 (Influenza virus A)。典型病毒颗粒呈球状，直径为80nm-120nm，有囊膜。囊膜上有许多放 射状排列的突起糖蛋白，分别是红细胞血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)和基质蛋白M2。病毒 颗粒内为核衣壳，呈螺旋状对称，直径为10nm。为单股负链RNA病毒，基因组约为13. 6kb，由 大小不等的8个独立片段组成。与以往或目前的季节性流感病毒不同，该病毒毒株包含有 猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片段。人群对甲型Hmi流感病毒普遍易感， 并可以人传染人，人感染甲流后的早期症状与普通流感相似，包括发热、咳嗽、喉痛、身体疼 痛、头痛、发冷和疲劳等，有些还会出现腹泻或呕吐、肌肉痛或疲倦、眼睛发红等。卫生颁布 的《甲型Hmi流感诊疗方案(2010年版)》的诊断标准是以病毒核酸检测以RT-PCR法检 测呼吸道标本(咽拭子、鼻拭子、鼻咽或气管抽取物、痰)中的甲型Hmi流感病毒核酸，结 果可呈阳性。但此方法实验条件高、成本高，间接免疫荧光法需培养病毒感染细胞，实验室 尚未达到培养条件。
发明内容本实用新型就是为了解决检测甲型Hmi型流感病毒方法简便、快速，而提供一种 甲型Hmi流感免疫荧光检测试剂盒。所用的检测方法是应用链霉亲和素-生物素偶联FITC法检测甲型Hmi型流感病
O本实用新型是按以下技术方案实现的。一种甲型Hmi流感免疫荧光检测试剂盒，它包括盒体与盒盖，而在盒体一侧长边 内形成有插孔的试剂架上，分别容纳抗甲型Hmi流感抗体试剂瓶，甲型Hmi流感生物素化 二抗试剂瓶，异硫氰酸荧光素的链霉亲和素试剂瓶，正常兔血清封闭液试剂瓶和封片剂瓶， 试剂架一端还形成有容纳盖玻片的盖玻片槽，盒体内的纵向分隔板一侧形成收容缓冲液瓶 的空间，而分隔板另一侧形成存储载玻片的空间，所述载玻片面上按一定间距形成有反应 凹槽。这样设计的本实用新型具有的优点是所用检测时使用的试剂、盖玻片等均集中 在一起，便于检测，操作简单，节省人力和时间，检测时间约为2小时，提供了工作效率。

图1本实用新型立体结构示意图；[0009]图2本实用新型中载玻片结构示意图图中1·盒体2.盒盖3.插孔4.试剂架5. 一抗试剂瓶6. 二抗试剂瓶7.链霉亲和素试剂瓶8.封闭液试剂瓶9.封片剂瓶10.盖玻片11.盖玻片槽12.分隔板13.缓冲液瓶14.载玻片15a. 15b.凹槽
具体实施方式
以下结合附图及实施例对本实用新型进行详细的说明。一种甲型Hmi流感免疫荧光检测试剂盒，包括盒体1与盒盖2，而在盒体1 一侧长 边内形成有插孔3的试剂架4上，分别容纳抗甲型Hmi流感抗体(一抗)试剂瓶5，甲型 Hmi流感生物素化二抗试剂瓶6，异硫氰酸荧光素的链霉亲和素试剂瓶7，正常兔血清封闭 液试剂瓶8和封片剂瓶9试剂架4 一端还形成有容纳盖玻片10的盖玻片槽11，盒体1内的 纵向分隔板12 —侧形成收容缓冲液瓶13的空间，而分隔板12另一侧形成存储载玻片14 的空间，所述载玻片14面上按一定间距形成有反应凹槽15a、15b。所述的甲型Hmi流感检测试剂盒，其按一定间距形成的凹槽15a、15b，分别是2个 方形凹槽15a和1个圆形凹槽15b，方形凹槽15a的规格是3 X 3 X 1mm，其圆形凹槽的规格 为<i)3Xlmm。并对应标示有阳性细胞、阴性细胞和待检细胞的文字标记。所述的甲型Hmi流感检测试剂盒，其盒体1、盒盖2的材料为纸质或硬质塑料。为了减振保护瓶体，盒体1底部内衬瓦楞纸或泡沫塑料(未图示)。按照上述结构设计的本实用新型，试剂瓶5内分别预装ΙΟΟΟμ 1抗甲型Hmi型流 感抗体一抗lgM，试剂瓶6内预装1000 μ 1甲型Hmi流感生物素化二抗IgM，试剂瓶7内预 装1000 μ 1标记异硫氰酸荧光素的链霉亲和素(SABC-FITC)，试剂瓶8内预装1000 μ 1正常 兔血清封闭液，试剂瓶9内预装封片剂；缓冲液瓶13 内预装 50ml 含 0. 5% (V/V)TritonX-100,0. Olmol/LPBS 缓冲液。应用本实用新型进行甲型Hmi流感免疫荧光检测步骤如下，1.生物玻片的制作应用咽拭子擦拭疑似甲型Hmi型流感患者咽部上皮细胞，应 用生理盐水洗涤，留取上皮细胞，然后放入IOml pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)中，挤出海绵 吸附的细胞，悬液800g离心5min，弃去上清液，再洗一次，继续用IOml PBS-T缓冲液0. 5% (V/V) TritonX-IOOPBS 混悬，静置 lOmin，800g 离心 5min，用 PBS 调整细胞数至 100 个 / μ 1。 点片到含有多聚赖氨酸载玻片10上，56°C烘干杀死病毒并固定，密封，-70°C低温保存。 2.免疫荧光检测法生物玻片放置室温后，滴加O.Olmol/L PBSl 10稀释的正常 兔血清封闭液，室温20min。甩去多余的液体不洗。滴加O.Olmol/L PBS适当稀释的抗甲型 Hmi 型流感抗体(IgM，一抗)，20 37°C 1 2h 或 4°C过夜，0. 01mol/L PBS 洗 2min 3 次； 滴加0. Olmol/LPBSl 100稀释的甲型Hmi流感生物素化二抗(IgM)，20 37°C 1 2h， O.Olmol/L PBS 洗 2min 3 次；滴加 0. 01mol/L PBSl 100 稀释的 SABC-FITC，2 037°C 1 2h，0. Olmol/L PBS洗2min 4次；磷酸甘油封片剂封片，荧光显微镜10x40倍视野下观察； FITC在490 495nm激发，在520 530nm发射荧光，呈黄绿色。当阳性对照为阳性，阴性 对照为 阴性时，待测细胞通过与阳性对照和阴性对照比较即可判断患者是否感染甲型Hmi
型流感病毒。
权利要求1. 一种甲型Hmi流感免疫荧光检测试剂盒，它包括盒体(ι)与盒盖O)，其特征在于 盒体⑴一侧长边内形成有插孔(3)的试剂架⑷上，分别容纳抗甲型Hmi流感抗体试剂 瓶(5)，甲型Hmi流感生物素化二抗瓶试剂(6)，异硫氰酸荧光素的链霉亲和素试剂瓶(7)， 正常兔血清封闭液试剂瓶(8)和封片剂瓶(9)试剂架(4) 一端还形成有容纳盖玻片(10) 的盖玻片槽(11)，盒体⑴内的纵向分隔板(12) —侧形成收容缓冲液瓶(13)的空间，而分 隔板(1 另一侧形成存储载玻片(14)的空间，所述载玻片(14)面上按一定间距形成有反 应凹槽(15a), (15b) ο
2.根据权利要求1所述的甲型Hmi流感检测试剂盒，其特征在于按一定间距形成的 凹槽(1 )、(15b)分别是2个方形凹槽(15a)和1个圆形凹槽(1 )，并对应标示有阳性 细胞、阴性细胞和待检细胞的文字标记。
3.根据权利要求1所述的甲型Hmi流感检测试剂盒，其特征在于所述的盒体(1)、盒 盖O)的材料为纸质或硬质塑料。
专利摘要本实用新型公开了一种甲型H1N1流感免疫荧光检测试剂盒，属于荧光测试物的使用。本实用新型在盒体一侧长边内形成有插孔的试剂架上，分别容纳抗甲型H1N1流感抗体试剂瓶，甲型H1N1流感生物素化二抗试剂瓶，异硫氰酸荧光素的链霉亲和素试剂瓶，正常兔血清封闭液试剂瓶和封片剂瓶，试剂架一端还形成有容纳盖玻片的盖玻片槽，盒体内的纵向分隔板一侧收容缓冲液瓶，而分隔板另一侧形成存储载玻片的空间，所述载玻片面上按一定间距形成有反应凹槽。应用链霉亲和素-生物素偶联FITC法检测甲型H1N1型流感病毒。本实用新型将所用检测时使用的试剂、盖玻片等均集中在一起，便于检测，操作简单，节省人力和时间，提高了工作效率。
文档编号G01N33/569GK201892679SQ20102054004
公开日2011年7月6日 申请日期2010年9月25日 优先权日2010年9月25日
发明者徐向英, 李立和 申请人:天津市宝坻区人民医院