专利名称：一种健脾养胃，补血生津中药组合物制剂和质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物制剂及质量控制方法，特别涉及一种健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂质量控制方法。

背景技术：
缺铁性贫血是小儿常见的营养缺乏病，多发于6个月至3岁的婴幼儿。婴幼儿期是小儿生长发育最快最旺盛的时期，血容量增加很快，铁质需要量相对较多，此外，婴儿通过排粪和出汗损失的铁也比成人多，因此小儿易患贫血。由于参与人体代谢的很多酶含有一定量的铁，所以当患缺铁性贫血时，人体内的铁缺乏，造成体内很多酶的活性降低，进而导致人体多种代谢紊乱，从而影响多个器官的功能，如影响消化和吸收功能、肌肉运动功能、智力发育障碍功能。另外，贫血还易引发免疫功能下降，婴儿体弱，极易患感染性疾病等病理现象。因此，贫血对健康的危害极大。
熟地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块根。秋季采挖，除去芦头、须根及泥沙，将其缓缓烘焙至约八成干，照酒炖法(中国药典2000年版一部附录II D)炖至酒吸尽，取出，晾晒至外皮黏液稍干时，切厚片或块，干燥，即得，每100kg生地黄，用黄酒30～50kg；或照蒸法(中国药典2000年版一部附录II D)蒸至黑润，取出，晒至约八成干时，切厚片或块，干燥，即得。符合《中国药典》2000年版一部94页熟地黄项下的有关规定。
山药为薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb.的干燥根茎。冬季茎叶枯萎后采挖，切去根头，洗净，除去外皮及须根，用硫黄熏后，干燥；也有选择肥大顺直的干燥山药，置清水中，浸至无干心，闷透，用硫黄熏后，切齐两端，用木板搓成圆柱状，晒干，打光，习称“光山药”。应符合《中国药典》2000年版一部22页山药项下的有关规定。
大枣本品为鼠李科植物枣ZizipHus jujuba Mill.的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采收，晒干。应符合《中国药典》2000年版一部17页大枣项下的有关规定。
硫酸亚铁本品含FeSO4.7H2O应为98.5％～104.0％。应符合《中国药典》2000年版二部861页硫酸亚铁项下的有关规定。
本发明提供一种健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂。


发明内容
本发明目的在于提供一种健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂；本发明的目的还在于提供该中药组合物制剂的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的 本发明公开一种健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂，该制剂的原料组成为 熟地黄160-240重量份、山药(炒)160-240重量份、大枣400-600重量份、硫酸亚铁9.6-14.4重量份。
所述一种健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂的原料组成优选为 熟地黄200重量份、山药(炒)200重量份、大枣500重量份、硫酸亚铁12重量份。
本发明所述一种健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂的制备方法为 取熟地黄、大枣加水煎煮3次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，加入常规辅料，加入硫酸亚铁细粉，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型，包括但不限于丸剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、片剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、口服液体制剂或外用制剂。
上述健脾养胃，补血生津的中药组合物糖浆剂的制备方法优选为取熟地黄、大枣加水煎煮三次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，备用；另取蔗糖550g与蜂蜜100g，加适量水制成糖浆，滤过，与上述滤液合并，加入苯甲酸1g(溶于适量乙醇中)，混匀，加热至沸，放至室温，加入硫酸亚铁细粉及香精0.3g，加水使成1000mL，搅匀，灌装，即得。
上述健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂的质量控制方法，该方法包括如下含量测定方法和/或鉴别方法中的一种或两、叁、肆、伍种 A、硫酸亚铁含量测定 显色剂的制备称约0.150-0.200g邻二氮菲，加乙醇20-30mL使溶解，用蒸馏水配成100mL溶液，即得。
对照品溶液的制备取FeSO4·7H2O约0.2-0.4g，精密称定，置于250mL容量瓶中，加蒸馏水约150mL，振摇使其溶解，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液20mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密量取本发明组合物糖浆剂2.5-7.5mL，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10mL，通过已处理好的D101大空树脂(内径2cm，柱高15cm)上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240mL，置250mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
样品测定方法 标准曲线的制备精密量取对照品溶液2mL、5mL、7mL、10mL、12mL、15mL，分别置100mL容量瓶中，各加入显色剂4-8mL及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15-30mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置20-60分钟后随行空白对照，510nm波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
精密量取供试品溶液25mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15-30mL和显色剂4-8mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，20-60分钟后510nm下随行空白对照测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中FeSO4·7H2O的浓度，计算含量，含硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)应为标示量的90.0％～110.0％。
B、熟地黄薄层鉴别 取本发明组合物糖浆剂20-40mL，加乙酸乙酯提取1-3次，每次20-50mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材3g，加水40-80mL煎煮1-3小时，滤过，滤液浓缩至20-50mL，放冷，加乙酸乙酯提取1-3次，每次20-50mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法，吸取供试品溶液2-10μL、对照药材溶液10-20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(1∶9)-(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、化学鉴别 取本发明组合物糖浆剂1mL，加水稀释至100mL，取稀释液10mL，加铁氰化钾试液1滴，摇匀，溶液呈蓝色，再加三氯化铁试液1滴，产生蓝色沉淀。
D、化学鉴别 取本发明组合物糖浆剂1mL，加水20mL，摇匀，加氯化钡试液2mL，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
E、化学鉴别 取本发明组合物糖浆剂15mL，加乙醚15mL，充分振摇1分钟，放置，取醚层浓缩至约1mL，取1滴点于滤纸上，晾干后，置紫外光灯(254nm)下观察，显暗黄绿色荧光；喷1％三氯化铝乙醇溶液，晾干，再置紫外光灯(254nm)下观察，显黄绿色至蓝绿色荧光，且荧光增强. 上述质量控制方法中优选包括如下含量测定、鉴别方法 A、硫酸亚铁含量测定 显色剂的制备称约0.150g邻二氮菲，加乙醇20mL使溶解，用蒸馏水配成100mL溶液，即得。
对照品溶液的制备取FeSO4·7H2O约0.2g，精密称定，置于250mL容量瓶中，加蒸馏水约150mL，振摇使其溶解，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液20mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密量取本发明组合物糖浆剂5mL，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10mL，通过已处理好的D101大空树脂(内径2cm，柱高15cm)上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240mL，置250mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
样品测定方法 标准曲线的制备精密量取对照品溶液2mL、5mL、7mL、10mL、12mL、15mL，分别置100mL容量瓶中，各加入显色剂4mL及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟后随行空白对照，510nm波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
精密量取供试品溶液25mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL和显色剂4mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，30分钟后510nm下随行空白对照测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中FeSO4·7H2O的浓度，计算含量。
B、熟地黄薄层鉴别 取本发明组合物糖浆剂30mL，加乙酸乙酯提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材3g，加水60mL箭煮1小时，滤过，滤液浓缩至30mL，放冷，加乙酸乙酯提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法，吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
C、化学鉴别 取本发明组合物糖浆剂1mL，加水稀释至100mL，取稀释液10mL，加铁氰化钾试液1滴，摇匀，溶液呈蓝色，再加三氯化铁试液1滴，产生蓝色沉淀。
D、化学鉴别 取本发明组合物糖浆剂1mL，加水20mL，摇匀，加氯化钡试液2mL，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
E、化学鉴别 取本发明组合物糖浆剂15mL，加乙醚15mL，充分振摇1分钟，放置，取醚层浓缩至约1mL，取1滴点于滤纸上，晾干后，置紫外光灯(254nm)下观察，显暗黄绿色荧光；喷1％三氯化铝乙醇溶液，晾干，再置紫外光灯(254nm)下观察，显黄绿色至蓝绿色荧光，且荧光增强。
本发明组合物具有健脾养胃，补血生津的作用，用于小儿缺铁性贫血及营养不良性贫血；本发明组合物糖浆剂通过提高机体的抗氧化酶活力，减少脂质过氧化物产生，保护红细胞膜。
下面实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
本发明所有实验例所选用的制剂均为根据本发明实施例1制得的本发明糖浆剂，但是并不作为本发明保护范围的限制。
实验例1药效学实验 本发明组合物糖浆剂对S180移植瘤小鼠抗氧化作用 1材料与方法 材料本发明组合物糖浆剂、种鼠S180肉瘤种鼠。
实验动物及分组60只健康昆明种断乳小鼠，体重25～45g。本实验室动物房分笼适应性喂养1周后，随机分成5组。A、B、C组为本发明组合物糖浆剂低、中、高剂量组，分别连续灌胃给药5、10、15mL·kg-1的本发明组合物糖浆剂，D组为环磷酰胺阳性对照组，E组为肿瘤阴性对照组。每组12只，雌雄各半，饲喂基础饲料。各组小鼠平均初始体重差异无统计学意义(F＝0.747，P＞0.05)。
(4)其他试剂磷酰胺(上海华联制药有限公司)；正常熔点琼脂糖(MP)、低熔点脂糖(LMP)、细胞培养液RPM-1640(美国Gibco BRL公司)；小牛血清(杭州四季青公司)；淋巴细胞分离液(上海恒信化学试剂有限公司)；荧光剂4，6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI，美国Boehringer Mannheim公司)；三羟甲基氨基甲烷(Tris，美国Amresco公司)；1，6-Diphenyl-1，3，5-hexariene(DPH，美国Sigma公司)；乙二胺四乙酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氢氧化钠等为国产AR级试剂(青岛爱普生物制剂公司)；超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒和考马斯亮兰贮备液以及蛋白标准(南京建成生物工程研究所)。
2实验方法 2.1动物肿瘤模型的建立 选择腹腔接种S180移植瘤9d后的小鼠，抽取腹腔积液，经生理盐水稀释、计数(台盼蓝检查细胞活性大于95％)后于小鼠左前肢腋窝皮下接种S180细胞悬液0.2mL(细胞浓度为1.0×107/mL)，24h后，阳性对照组小鼠腹腔注射环磷酰胺20mg/kg)。第8d小鼠称重后， 眼眶取血待用，剥离肿瘤组织并剖取肝、脾、胸腺称重。
2.2血浆、肝组织抗氧化物酶类活力及MDA的测定 2.2.1肝匀浆的制备取新鲜肝组织称重后加入适量冰冷生理盐水，在冰浴中制备10％的匀浆。
2.2.2检测方法 肝蛋白质的测定采用考马斯亮蓝法。
血浆和肝匀浆总SOD活性测定用黄嘌呤氧化酶法；MDA含量测定用硫代巴比妥酸比色法；GSH-Px活力测定用二硫代二硝基苯甲酸DTNB比色法；均按试剂盒说明书操作。
2.2.3红细胞溶血度的测定 取新鲜抗凝全血80μL，经生理盐水洗涤，离心3次，每次3000r/min离心5min，最后1次10min。去血浆及白细胞层，制成压积红细胞，加生理盐水配制成体积分数为10％的红细胞悬液。将每个样本的红细胞悬液分为A、B两管，每管210mL。A管加210mLH2O2(终浓度为100mmol/L)混匀。B管加2.0mL蒸馏水混匀，上述2管各于37℃水浴箱水浴0.5h。离心3000r/min，5min，取上清液在540nm测吸光度值。溶血度(％)＝(A管吸光度值/B管吸光度值)×100。
2.2.4DNA氧化损伤的检测 DNA损伤检测采用单细胞琼脂电泳(SCGE)方法。取新鲜抗凝血酶35μL加入盛有基础培养基(RPMI-1640)和体积分数0.1小牛血清的离心管中，0℃培养30min，取淋巴细胞分离液100μL加到该离心管的底部，4℃、200g离心3min，取粉红色淋巴细胞层移入盛有1000μL磷酸缓冲液的离心管中，分别加入0，5，10，25μmol/L的H2O2处理5min，离心12154r/min，3min，去上清，放入冰水浴中备用。取1％熔化的标准琼脂糖85μL滴于载玻片上，迅速盖上盖玻片，4℃冰箱放置15min。取1％熔化的低熔点琼脂糖85μL和上述淋巴细胞液混匀，取85μL的混悬液滴在第一层琼脂薄板上，迅速盖上盖玻片，4℃冰箱放置15min。然后放入溶解液中处理60min(4℃环境)，放入电泳液内处理40min(4℃环境)，电泳30min，用中和液中和3次，荧光剂(DAPI)染色，荧光显微镜下观察。每组观察100个细胞，计算其损伤单位。
3实验结果 采用SPSS 12.0软件进行统计分析，计量数据分析采用

用单因素方差分析进行显著性检验并进行两两比较。所有假设检验均以α＝0.05为检验水准。
3.1血浆、肝组织抗氧化物酶类活力及MDA含量(表1，2) 本发明组合物糖浆剂各剂量组和阳性对照组的血浆、肝脏SOD活力与阴性对照组比较有所升高，除肝脏的本发明组合物糖浆剂高剂量组和阳性对照组外，其他各组的SOD活力与阴性对照组比较，差异有统计学意义(血浆F＝3.722，P＜0.01；肝组织F＝2.856，P＜0.05)。本发明组合物糖浆剂各剂量组和阳性对照组的血浆、肝脏GSH-Px活力与阴性对照组相比升高，且血浆、肝中的本发明组合物糖浆剂中剂量组和阳性对照组以及血浆的本发明组合物糖浆剂高剂量组与阴性对照组比较，差异有统计学意义(血浆F＝3.563，P＜0.05；肝组织F＝4.455，P＜0.01)；本发明组合物糖浆剂各剂量组和阳性对照组的血浆、肝脏MDA含量较阴性对照组低，其中本发明组合物糖浆剂各剂量组和阳性对照组与阴性对照组的差异有统计学意义，肝组织中的各组差异无统计学意义(血浆F＝9.854，P＜0.01)。
3.2红细胞溶血度 本发明组合物糖浆剂(高、中、低)各剂量组和阳性、阴性对照组的溶血度分别为(25.78±9.63)，(26.73±8148)，(25.28±5.13)，(23.16±7.11)，(32.48±4.97)。由此可见，本发明组合物糖浆剂各剂量组和阳性对照组的溶血度均低于阴性对照组，其中低剂量组、高剂量组和阳性对照组与阴性照组比较，差异有统计学意义(F＝2.631，P＜0.05)。
表1各组小鼠血浆抗氧化指标比较

注与E组比较，a P＜0.05，b P＜0.01；与D组比较，c P＜0.05。
表2各组小鼠肝组织抗氧化指标比较


注与E组比较，a P＜0.05，b P＜0.01； 3.3DNA氧化损伤结果(表3) 本发明组合物糖浆剂各剂量组的血淋巴细胞自发性损伤比阴性对照组低，但差异无统计学意义(F＝1.830，P＞0.05)。在血淋巴细胞用5，10和25μmol/LH2O2处理后，观察本发明组合物糖浆剂各剂量组的DNA损伤较阴性、阳性对照组低；其中用10μmol/L H2O2处理的本发明组合物糖浆剂中、高剂量组和25μmol/L H2O2处理的本发明组合物糖浆剂高剂量组的DNA损伤与阴性对照组比较差异有统计学意义(F＝3.513，P＜0.05；F＝5.366，P＜0.01)。
表3各组小鼠H2O2诱导的NDA氧化损化结果

注与E组比较，a P＜0.05；与D组比较，b P＜0.01。
本实验发现，本发明组合物糖浆剂可明显提高荷瘤鼠血浆、肝中的总SOD和GSH-Px的含量，明显降低血浆MDA水平，提示本发明组合物糖浆剂能够提高机体抗氧化酶的活力，加强自由基的清除，减少脂质过氧化物MDA产生。通过H2O2诱导的氧化溶血实验发现，本发明组合物糖浆剂各剂量组的红细胞溶血度均下降，表明本发明组合物糖浆剂有稳定红细胞膜、抵抗氧化损伤的作用。
用5，10和25μmol/L H2O2处理血淋巴细胞后，本发明组合物糖浆剂各剂量组和阳性对照组的DNA损伤均较阴性对照组低，且中、高剂量的作用更为显著，提示本发明组合物糖浆剂有抗DNA氧化损伤的作用。
综上所述，本发明组合物糖浆剂通过提高机体的抗氧化酶活力，减少脂质过氧化物产生，保护红细胞膜，拮抗DNA氧化损伤机制来实现其对S180移植瘤的抗氧化作用。
实验例2熟地黄薄层色谱法实验 1、薄层色谱方法的选择 常见的薄层色谱有硅胶薄层层析、纸层析、聚酰胺薄层层析等。纸层析适用于大极性成分如多糖类成分，聚酰胺层析适用于含有羟基较多的成分，而硅胶适合于低极性和中等极性化合物，适合于熟地黄中化合物的分离，故选择硅胶层析进行实验。
2、供试品的制备 对照品溶液的制备取熟地黄对照药材3g，加水60mL煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30mL，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液。
吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液。
2.1提取溶剂的选择 2.1.1供试品提取溶剂的选择 以氯仿、乙酸乙酯作为提取溶剂，通过实验比较、优选供试品最优的提取溶剂，实验方法见表4 表4供试品提取溶剂选择的实验方法
供试品1点样非常困难，在熟地黄对照药材相对应的位置未观察到相应斑点。供试品2、3色谱中，在熟地黄对照药材相对应的位置上均显斑点，没有干扰。但氯仿毒性较大，因此，选择醋酸乙酯为最佳提取溶剂。
2.1.2提取次数的选择，实验方法见表5 表5提取次数的选择实验方法

供试品1、2、3在熟地黄对照药材相对应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，供试品2、3斑点的荧光较供试品1更强烈、更清晰，但供试品2、3的荧光斑点的荧光基本相似，无差别，表明提取2次基本可将制剂中的熟地黄成分基本提取完全。因此，确定提取的最佳次数为2次。
2.1.3供试品的点样量 供试品制备方法取本发明组合物糖浆剂30mL，加醋酸乙酯提取2次，每次30mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至2mL，作为供试品溶液。
分别吸取供试品溶液2μL、5μL、10μL，对照药材溶液15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液。
实验结果见表6 表6不同供试品的点样量点样结果
因此，确定供试品的最佳点样量为5μL。
3对照药材溶液的制备 3.1熟地黄对照药材溶液提取溶剂、提取方法的考察 本发明组合物糖浆剂的制备方法为加水煎煮，所以熟地黄对照药材的制备方法也为水煎煮，后乙酸乙酯萃取。
3.2熟地黄对照药材溶液提取液浓缩体积、萃取溶剂、溶剂量、萃取次数的考察 提取液浓缩体积、萃取溶剂、溶剂量、萃取次数四个因素相互之间又存在相互关联，因此，采用L934正交实验设计对对这四个因素进行考察，以点样后斑点清晰、圆整及薄层板的情况评分作为考察指标，见表7。
表7L934正交实验因素水平表
上述实验方案通过9次实验完成。结果表明，用正丁醇做溶剂萃取的对照品溶液黏度都非常大，影响点样，且正丁醇沸点较高不易回收。经正交实验分析，结果显示提取液浓缩体积、萃取溶剂、溶剂量、萃取次数分别为浓缩原提取液体积的1/2，用醋酸乙酯萃取2次，每次30mL，效果最佳。最终，确定熟地黄对照药材溶液制备方法为取熟地黄对照药材3g，加水60mL煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30mL，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液。
3.3熟地黄对照药材点样量的确定 取熟地黄对照药材3g，加水60mL煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30mL，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液。
实验结果见表8 表8供试品的点样量结果
因此，确定熟地黄对照药材溶液的最佳点样量为15μL。
4展开剂溶剂的选择 薄层层析展开剂溶剂的选择，应根据化合物的性质及“相似相溶”的原则选择合适的展开溶剂。熟地黄成分偏中高极性，而且提取时选择醋酸乙酯为提取溶剂，因此选择一种低极性溶剂调节溶剂，并调节适当比例，使得到最佳分离。尝试苯-醋酸乙酯(1∶1)、苯-醋酸乙酯(1∶9)、甲苯-醋酸乙酯(1∶9)、石油醚-醋酸乙酯(1∶9)展开，结果分析见表9 表9不同展开剂溶剂的结果

因此，确定熟地黄硅胶薄层最佳的展开剂为甲苯-醋酸乙酯(1∶9)。
5显色条件的选择 熟地黄中的萜类成分，日光下没有颜色和紫外下也没有荧光，所以薄层层析后不能直接观察，但需要利用显色剂显色后观察。常用的通用型显色剂为10％的硫酸乙醇溶液、碘蒸气及醛酮类特征显色剂2，4-二硝基苯肼乙醇试液。
取3块硅胶G薄层板，每块薄层均点样供试品5ul、熟地黄对照药材溶液各15μL，以甲苯-醋酸乙酯(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干。
方法一薄层1喷以10％的硫酸乙醇溶液，105℃烘烤10分钟； 方法二薄层3置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘。
方法三2，4-二硝基苯肼乙醇试液。
方法一薄层在日光下观察，供试品色谱中在与熟地黄对照药材相对应的位置上有观察到明显颜色的斑点，但斑点颜色黑紫、不清晰，主斑点后有干扰。方法二薄层在日光下观察，供试品中斑点较多，在与熟地黄对照药材相对应的位置上斑点多重叠。方法三薄层在日光下，供试品色谱中，在与熟地黄对照药材相对应的位置上，显颜色的斑点。
因此，可以确定熟地黄薄层层析的显色条件为喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液。
综上试验最后确定本发明组合物糖浆剂中熟地黄的薄层色谱鉴别条件为取本发明组合物30mL，加醋酸乙酯提取2次，每次30mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至2mL，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材3g，加水60mL煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30mL，放冷，加醋酸乙酯提取2次，每次30mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液。吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实验例3硫酸亚铁含量测定方法实验 本发明组合物糖浆剂是由熟地黄、山药、大枣三味中药和硫酸亚铁组成的复方制剂。硫酸亚铁中的亚铁离子为补血的有效成分。因此在含量测定时首选硫酸亚铁。
本专利利用Fe2+与邻二氮菲生成红色络合物的原理，用比色法对硫酸亚铁中的亚铁离子本发明组合物糖浆剂中的硫酸亚铁的含量进行测定，实验操作简单，方法准确，能够客观地控制本发明组合物的含量。
1、最大吸收波长 取FeSO4·7H2O对照品适量，用水作溶剂制成每mL含1mg的溶液，精密量取标准品溶液10mL，置于100mL容量瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL、显色剂4mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。取另一个100mL容量瓶，不加入标准品溶液，同法制得空白对照溶液。用可见紫外分光光度计在300～700nm波长范围内扫描，结果表明在510nm处有最大吸收。
2、实验pH值的选择 取FeSO4·7H2O对照品适量，用水作溶媒制成每mL含1mg的溶液，精密量取对照品溶液10mL、置100mL容量瓶中，各加入显色剂4mL及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)不同体积，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟后测定。取另容量瓶，不加入标准品溶液，同法制得空白对照溶液。在510nm处测定样品溶液吸收度。结果见表10。
表10缓冲液(pH4.5)用量结果
由实验结果可以看出，100mL溶液中加入15mL醋酸-醋酸钠缓冲液，样品显色后吸收度即可达到最大，再增加缓冲液的量，吸收度变化不明显。
3、显色剂用量 精密量取标准品5份，每份10mL，分别置于100mL容量瓶中，分别加入不同量显色剂溶液。取另容量瓶，不加入标准品溶液，同法制得空白对照溶液。在510nm处测定样品溶液吸收度。结果见表11。
表11显色剂用量结果

由实验结果可以看出，100mL溶液中加入4mL显色剂量，样品显色后吸收度即可达到最大，再增加显色剂的量，吸收度变化不明显。
4、显色时间考察 取FeSO4·7H2O对照品适量，用水作溶媒制成每mL含1mg的溶液，精密量取对照品溶液10mL、置100mL容量瓶中，各加入显色剂4mL及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。同法制得空白对照溶液。照紫外-可见分光光度法，于0、10、20、30、60、90、120、180、240min在510nm波长处测定样品溶液吸收度。结果见表12。
表12显色时间结果
由实验结果可以看出，样品显色后在30分钟后，吸收度基本没有变化，故测定时需放置30分钟后，再测定样品吸收度。
5、样品处理方法考察 本发明制剂为中药复方，成份复杂，样品需处理、纯化后测定硫酸亚铁的含量。
比较样品纯化前和纯化后的测定结果。
方法一精密量取本发明组合物5mL，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10mL，置250mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液25mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15mL和显色剂4mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，30分钟后，随行空白对照测定。
方法二精密量取本发明组合物5mL，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10mL，通过已处理好的D101大空树脂(内径2cm，柱高15cm)上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240mL，置250mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液25mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL和显色剂4mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，30分钟后随行空白对照测定。结果见表13。
表13供试品纯化结果
由实验结果可以看出，样品必须纯化后才可测定。
实验例4硫酸亚铁含量测定方法验证实验 显色剂的制备称约0.150g邻二氮菲，加乙醇20mL使溶解，用蒸馏水配成100mL溶液，即得。
对照品溶液的制备取FeSO4·7H2O约0.2g，精密称定，置于250mL容量瓶中，加蒸馏水约150mL，振摇使其溶解，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液20mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密量取本发明组合物5mL，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10mL，通过已处理好的D101大空树脂(内径2cm，柱高15cm)上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240mL，置250mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
样品测定方法 标准曲线的制备精密量取对照品溶液2mL、5mL、7mL、10mL、12mL、15mL，分别置100mL容量瓶中，各加入显色剂4mL及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟后随行空白对照，510nm波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
精密量取供试品溶液25mL，置100mL容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL和显色剂4mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，30分钟后510nm下随行空白对照测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中FeSO4·7H2O的浓度，计算含量。
1、空白对照试验 以处方中药味比例和制备工艺制成不含硫酸亚铁的阴性样品，再按供试品的测定方法测定其吸光度值，结果为A＝0.009，为含量测定值的1.83％。因限量标准为标示量的90.0％～110.0％，因此对质量控制无显著影响，故认为空白无干扰。
2、标准曲线与线性范围 精密量取对照品溶液2mL、5mL、7mL、10mL、12mL、15mL，分别置100mL容量瓶中，各加入显色剂4mL及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟后测定；另取显色剂4mL及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15mL置100mL容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为空白对照液。照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在510nm波长处分别测定吸光度，经回归得到如下方程A＝0.0409c-0.0059(r＝0.999)，A为吸光度值，c为比色液中硫酸亚铁浓度(μg/mL)。试验结果表明硫酸亚铁浓度在3.2μg/mL-24.0μg/mL范围内线性良好。结果见表14。
表14标准曲线结果
3、精密度试验 精密量取标准品溶液5份，每份10mL，分别置于100mL容量瓶中。依法测定其吸光度值，结果见表15 表15精密度试验结果
结果表明，本实验方法精密度良好。
4、重复性试验 精密量取本发明组合物(批号05031501)5份，依供试品制备方法制取样品，依法测定硫酸亚铁含量，结果见表16 表16重复性试验结果

结果表明，本方法重复性良好。
5、回收率试验 采取加样回收法，取一定量已知含量的样品(批号05031501，C＝12.1614mg/mL)，加适量对照品，依法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率，结果见表17 表17回收率试验结果
结果表明，本方法回收率良好。
6、样品测定 取本发明组合物三批按供试品制备方法制备的样品，照质量标准含量测定项下的方法测定硫酸亚铁含量，结果见表18 表18样品测定结果
经过三批样品的测定结果，考虑到熟地黄和大枣含有少量Fe2+及其它影响因素，暂定本发明组合物含硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)为标示量的90.0％～110.0％。

具体实施例方式 实施例1 处方熟地黄200g山药(炒)200g大枣500g 硫酸亚铁12g 制法以上四味，取熟地黄、大枣加水煎煮三次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，备用；另取蔗糖550g与蜂蜜100g，加适量水制成糖浆，滤过，与上述滤液合并，加入苯甲酸1g(溶于适量乙醇中)，混匀，加热至沸，放至室温，加入硫酸亚铁细粉及香精0.3g，加水使成1000ml，搅匀，灌装，即得。每支装10ml。
鉴别
(1)取本品1ml，加水稀释至100ml，取稀释液10ml，加铁氰化钾试液1滴，摇匀，溶液呈蓝色，再加三氯化铁试液1滴，产生蓝色沉淀。
(2)取本品1ml，加水20ml，摇匀，加氯化钡试液2ml，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
(3)取本品15ml，加乙醚15ml，充分振摇1分钟，放置，取醚层浓缩至约1ml，取1滴点于滤纸上，晾干后，置紫外光灯(254nm)下观察，显暗黄绿色荧光；喷1％三氯化铝乙醇溶液，晾干，再置紫外光灯(254nm)下观察，显黄绿色至蓝绿色荧光，且荧光增强. (4)取本品30ml，加乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，浓缩至2ml，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材3g，加水60ml箭煮1小时，滤过，滤液浓缩至30ml，放冷，加乙酸乙酯提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，浓缩至2ml，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液5μl、对照药材溶液15μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(1∶9)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
含量测定
显色剂的制备称约0.150g邻二氮菲，加乙醇20ml使溶解，用蒸馏水配成100ml溶液，即得。
对照品溶液的制备取FeSO4·7H2O约0.2g，精密称定，置于250ml容量瓶中，加蒸馏水约150ml，振摇使其溶解，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液20ml，置100ml容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液2ml、5ml、7ml、10ml、12ml、15ml，分别置100ml容量瓶中，各加入显色剂4ml及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15ml，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟后测定；另取显色剂4ml及醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml置100ml容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为空白对照液。照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在510nm波长处分别测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法精密量取本品5ml，置于50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10ml，通过已处理好的D101大空树脂(内径2cm，柱高15cm)上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240ml，置250ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液25ml，置100ml容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml和显色剂4ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，30分钟后测定；另取4ml显色剂和醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml置100ml容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为空白对照液。照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在510nm波长处测定吸光度，依据吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中FeSO4·7H2O的浓度，计算，即得。本品含硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)应为标示量的90.0％～110.0％。
功能与主治健脾养胃，补血生津。用于小儿缺铁性贫血及营养不良性贫血。
用法与用量口服，一至三岁小儿一次10ml，三至五岁一次15ml，一日2次。
实施例2 熟地黄200g山药(炒)200g大枣500g硫酸亚铁12g 以上四味，取熟地黄、大枣加水煎煮三次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，备用；另取蔗糖550g与蜂蜜100g，加适量水制成糖浆，滤过，与上述滤液合并，加入苯甲酸1g(溶于适量乙醇中)，混匀，加热至沸，放至室温，加入硫酸亚铁细粉及香精0.3g，加水使成1000ml，搅匀，灌装，即得。每支装10ml。
含量测定
显色剂的制备称约0.150g邻二氮菲，加乙醇20ml使溶解，用蒸馏水配成100ml溶液，即得。
对照品溶液的制备取FeSO4·7H2O约0.2g，精密称定，置于250ml容量瓶中，加蒸馏水约150ml，振摇使其溶解，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液20ml，置100ml容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液2ml、5ml、7ml、10ml、12ml、15ml，分别置100ml容量瓶中，各加入显色剂4ml及醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5)15ml，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟后测定；另取显色剂4ml及醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml置100ml容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为空白对照液。照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在510nm波长处分别测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
测定法精密量取本品5ml，置于50ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10ml，通过已处理好的D101大空树脂(内径2cm，柱高15cm)上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240ml，置250ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液25ml，置100ml容量瓶中，加入醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml和显色剂4ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，30分钟后测定；另取4ml显色剂和醋酸-醋酸钠缓冲液(PH4.5)15ml置100ml容量瓶，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为空白对照液。照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在510nm波长处测定吸光度，依据吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中FeSO4·7H2O的浓度，计算，即得。本品含硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)应为标示量的90.0％～110.0％。
实施例3 熟地黄220g山药(炒)220g大枣500g硫酸亚铁12g 以上四味，取熟地黄、大枣加水煎煮三次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，备用；另取蔗糖550g与蜂蜜100g，加适量水制成糖浆，滤过，与上述滤液合并，加入苯甲酸1g(溶于适量乙醇中)，混匀，加热至沸，放至室温，加入硫酸亚铁细粉及香精0.3g，加水使成1000ml，搅匀，灌装，即得。每支装10ml。
实施例4 熟地黄220g山药(炒)220g大枣500g硫酸亚铁20g 以上四味，取熟地黄、大枣加水煎煮三次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，备用；另取蔗糖550g与蜂蜜100g，加适量水制成糖浆，滤过，与上述滤液合并，加入苯甲酸1g(溶于适量乙醇中)，混匀，加热至沸，放至室温，加入硫酸亚铁细粉及香精0.3g，加水使成1000ml，搅匀，灌装，即得。每支装10ml。
权利要求
1.一种健脾养胃，补血生津的中药组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为
熟地黄160-240重量份、山药(炒)160-240重量份、大枣400-600重量份、硫酸亚铁9.6-14.4重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为
熟地黄200重量份、山药(炒)200重量份、大枣500重量份、硫酸亚铁12重量份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为
取熟地黄、大枣加水煎煮三次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，备用；另取蔗糖550g与蜂蜜100g，加适量水制成糖浆，滤过，与上述滤液合并，加入溶于适量乙醇中苯甲酸1g，混匀，加热至沸，放至室温，加入硫酸亚铁细粉及香精0.3g，加水使成1000mL，搅匀，灌装，即得。
4.如权利要求1或2所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定方法和/或鉴别方法中的一种或几种
A、硫酸亚铁含量测定
显色剂的制备称约0.150-0.200g邻二氮菲，加乙醇20-30mL使溶解，用蒸馏水配成100mL溶液，即得；
对照品溶液的制备取FeSO4·7H2O约0.2-0.4g，精密称定，置于250mL容量瓶中，加蒸馏水约150mL，振摇使其溶解，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液20mL，置100mL容量瓶中，加入pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液15mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备精密量取本发明组合物糖浆剂2.5-7.5mL，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10mL，通过已处理好的D101大空树脂，内径2cm，柱高15cm上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240mL，置250mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；
样品测定方法
标准曲线的制备精密量取对照品溶液2mL、5mL、7mL、10mL、12mL、15mL，分别置100mL容量瓶中，各加入显色剂4-8mL及pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液15-30mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置20-60分钟后随行空白对照，510nm波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
精密量取供试品溶液25mL，置100mL容量瓶中，加入pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液15-30mL和显色剂4-8mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，20-60分钟后510nm下随行空白对照测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中FeSO4·7H2O的浓度，计算含量，含硫酸亚铁应为标示量的90.0％～110.0％；；
B、熟地黄薄层鉴别
取本发明组合物糖浆剂20-40mL，加乙酸乙酯提取1-3次，每次20-50mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材3g，加水40-80mL煎煮1-3小时，滤过，滤液浓缩至20-50mL，放冷，加乙酸乙酯提取1-3次，每次20-50mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液；照薄层色谱法，吸取供试品溶液2-10μL、对照药材溶液10-20μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯(1∶9)-(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
C、化学鉴别
取本发明组合物糖浆剂1mL，加水稀释至100mL，取稀释液10mL，加铁氰化钾试液1滴，摇匀，溶液呈蓝色，再加三氯化铁试液1滴，产生蓝色沉淀；
D、化学鉴别
取本发明组合物糖浆剂1mL，加水20mL，摇匀，加氯化钡试液2mL，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解；
E、化学鉴别
取本发明组合物糖浆剂15mL，加乙醚15mL，充分振摇1分钟，放置，取醚层浓缩至约1mL，取1滴点于滤纸上，晾干后，置254nm紫外光灯下观察，显暗黄绿色荧光；喷1％三氯化铝乙醇溶液，晾干，再置254nm紫外光灯下观察，显黄绿色至蓝绿色荧光，且荧光增强。5、如权利要求4所述的药物组合物制剂的质量检测方法，该方法包括如下含量测定方法和/或鉴别方法中的一种或几种
A、硫酸亚铁含量测定
显色剂的制备称约0.150g邻二氮菲，加乙醇20mL使溶解，用蒸馏水配成100mL溶液，即得；
对照品溶液的制备取FeSO4·7H2O约0.2g，精密称定，置于250mL容量瓶中，加蒸馏水约150mL，振摇使其溶解，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液20mL，置100mL容量瓶中，加入pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液15mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得；
供试品溶液的制备精密量取本发明组合物糖浆剂5mL，置于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液10mL，通过已处理好的内径2cm，柱高15cm D101大空树脂上，用蒸馏水洗脱，收集洗脱液240mL，置250mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀；
样品测定方法
标准曲线的制备精密量取对照品溶液2mL、5mL、7mL、10mL、12mL、15mL，分别置100mL容量瓶中，各加入显色剂4mL及pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液15mL，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置30分钟后随行空白对照，510nm波长处测定吸光度，以吸光度值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；
精密量取供试品溶液25mL，置100mL容量瓶中，加入pH4.5醋酸-醋酸钠缓冲液15mL和显色剂4mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，30分钟后510nm下随行空白对照测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中FeSO4·7H2O的浓度，计算含量；
B、熟地黄薄层鉴别
取本发明组合物糖浆剂30mL，加乙酸乙酯提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为供试品溶液；另取熟地黄对照药材3g，加水60mL箭煮1小时，滤过，滤液浓缩至30mL，放冷，加乙酸乙酯提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至2mL，作为对照药材溶液；照薄层色谱法，吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1∶9甲苯-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
C、化学鉴别
取本发明组合物糖浆剂1mL，加水稀释至100mL，取稀释液10mL，加铁氰化钾试液1滴，摇匀，溶液呈蓝色，再加三氯化铁试液1滴，产生蓝色沉淀；
D、化学鉴别
取本发明组合物糖浆剂1mL，加水20mL，摇匀，加氯化钡试液2mL，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解；
E、化学鉴别
取本发明组合物糖浆剂15mL，加乙醚15mL，充分振摇1分钟，放置，取醚层浓缩至约1mL，取1滴点于滤纸上，晾干后，置254nm紫外光灯下观察，显暗黄绿色荧光；喷1％三氯化铝乙醇溶液，晾干，再置254nm紫外光灯下观察，显黄绿色至蓝绿色荧光，且荧光增强。
全文摘要
本发明公开了一种健脾养胃，补血生津的中药组合物制剂，该组合物由熟地黄、山药(炒)、大枣、硫酸亚铁等原料药制成，该组合物的制备方法为取熟地黄、大枣加水煎煮3次，每次3小时，煮第三次时加入山药共煎。合并煎液，滤过，加入常规辅料，加入硫酸亚铁细粉，按照常规工艺，制成临床或药学上可接受的剂型制剂。本发明组合物具有健脾养胃，补血生津的作用，用于小儿缺铁性贫血及营养不良性贫血；本发明组合物糖浆剂通过提高机体的抗氧化酶活力，减少脂质过氧化物产生，保护红细胞膜。
文档编号G01N31/02GK101829258SQ200910079398
公开日2010年9月15日 申请日期2009年3月10日 优先权日2009年3月10日
发明者付立家, 付建家 申请人:北京亚东生物制药有限公司