专利名称：一种用于诊断类风湿关节炎的诊断试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种诊断试剂盒。更具体地，本实用新型涉及包括至少两项检测试纸条的诊断试剂盒，所述至少两项试纸条分别包被有抗原，用于体外检测人血液中的RF-(IgM, IgA, IgG)，瓜氨酸化多肽CCP抗体瓜氨酸化蛋白CP抗体，辅助诊断类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)。
背景技术：
类风湿关节炎是一个累及周围关节为主的系统性炎症性自身免疫性疾病，其特征性病理改变是关节滑膜的慢性炎症，滑膜增生形成绒毛状突起，侵犯关节软骨、软骨下骨、韧带和肌腱等，造成关节软骨、骨和关节囊破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。在我国，RA患病率为0.32% 0.36%，患者率女性约3倍于男性，RA可发生于任何年龄，80%发病于35-55岁，其次60岁以上者发病率明显高于30岁以下者。目前的研究表明，在RA发病的2年内就有可能出现骨质破坏和关节间隙变窄，未经及时而正确治疗的患者大多数发展为关节畸形和关节功能障碍。所以早期诊断，早期给予有效的改善病情抗风湿药物治疗，控制病情进展，预防和减少骨关节破坏，对于改善类RA患者的预后显得尤为重要。迄今为止，自身免疫性疾病的诊断手段主要是在结合临床的基础上，依赖实验室检测到一种或多种高效价的自身抗体。在国际权威机构制定的某些自身免疫性疾病诊断标准中就包括了自身抗体，如类风湿关节炎。美国风湿病学学会(ACR)和欧洲风湿病防治联合会(EULAR) 2009年发表的类风湿关节炎分类标准中，血清学标准包括类风湿因子RF和抗瓜氨酸化蛋白/肽抗体ACPA。瓜氨酸化蛋白CP包括多种抗原，主要包括聚丝蛋白类抗原，纤维蛋白原蛋白，波形蛋白类抗原等。病理性RF的滴度/浓度高、亲和力高、特异性强，并具有3种RF(IgM-RF,IgG-RF和IgA-RF)。传统的血清学指标为IgM型类风湿因子(RF)，但其敏感性仅50% 70%，且该指标特异性差，不仅可以在RA以外的其它结缔组织病患者中出现，在一些非结缔组织病如感染、肿瘤等患者，甚至部分正常老年人中也可呈阳性。有文献报道，联合检测RF的不同类型，有助于提高检测的特异性。RF-1gM阳性多伴有骨质破坏以及多关节受累，RF-1gA显示RA伴有多关节受累，RF-1gG与关节外症状相关。近年来陆续有报道，除类风湿因子以外，类风湿关节炎患者血清中还存在多种类风湿关节炎自身抗体的检测及临床评价种自身抗体，如:抗核周因子抗体(APF)、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体(AFA)，抗突变的波形蛋白(MVC)抗体，抗CCP抗体，抗纤维蛋白原抗体等，可在类风湿关节炎的早期出现，对RA的诊断有一定意义。抗APF，AFA敏感性差，但是特异性高。抗MCV的特异性达到90%以上，敏感性也能达到70%，抗瓜氨酸纤维蛋白原抗体的敏感性稍低，只达到60%，抗CCP抗体的敏感性和特异性均较高，这些相关抗体联合检测RF因子有助于提高RA的诊断率。在临床诊断上，目前实验室常用的检测自身抗体的方法主要有酯联免疫吸附剂试验(enzyme linked immunosorbent assay.ELISA)、间接免疫突光法(indirectimmunoflurescence.1FF)、免疫印迹法(immunoblottin g test.1BT)、线性免疫分析法(Line immuno assay.LIA)等。免疫印迹法虽综合了 SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，且试剂具有较强的毒性和污染性，对自身抗体的检测局限于线性表位。间接免疫荧光法可作半定量测定，但需有荧光显微镜观察结果，结果判定的客观性不足，标准化困难，技术程序比较复杂，也不适合高通量标本的检测。线性免疫分析法主要用于疾病大类的筛查，针对性相对较差，同时也不适合高通量样本的检测。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也较高，目前被广泛认可，但操作比较繁琐，需多次加样和洗涤，且易受温度和孵育条件的影响，在专业实验室里进行操作，给实验带来诸多不便。目前还没有一种诊断装置，同时对RF以及CP，CCP进行方便、快捷和准确的筛查。而这几种指标的联合检测有助于提高RA诊断的敏感性和特异性以及早期诊断，对于后期的治疗有重大的意义。因此，本领域迫切需要提供一种在临床中能够快速准确地检测RA的诊断装置，以满足临床诊断的需要，实现即时检测、床边检测。

实用新型内容本实用新型所要解决的技术问题在于针对现有用于诊断类风湿关节炎的诊断方法所存在的问题而提供了一种用于诊断类风湿关节炎的诊断试剂盒。该诊断试剂盒包含有至少两项检测试纸条，分别包被有抗原，用于体外检测人血液中的RF-(IgM，IgA, IgG)，CCP抗体，CP抗体，辅助诊断类风湿关节炎。本实用新型所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现:一种用于诊断类风湿关节炎的诊断试剂盒，包括盒体，其特征在于，在所述盒体内放置有至少两条试纸条，每条试纸条均包括依次搭接在支撑底板上的样品垫、结合垫、检测膜和吸水垫；每一试纸条的所述结合垫上包被有可与人抗体结合的金属胶体标记的蛋白；每一试纸条的所述检测膜的检测区上包被有一种检测蛋白印迹；每一试纸条的所述检测膜的质控区上包被有一种质控蛋白印迹；每一试纸条的所述检测膜的检测区上的所述检测蛋白印迹与所述质控区上的质控蛋白印迹彼此分离，所述检测蛋白印迹相比于所述质控蛋白印迹更靠近于结合垫；其中至少有一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹与其它条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹不相同。在本实用新型的某些优选实施例中，所述样品垫是由玻璃纤维、酯聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成；所述结合垫是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成；所述检测膜是由硝酸纤维素膜制成；所述支撑底板由硬质地而不吸水的材料制成。所述支撑底板由PVC板制成。在本实用新型的某些优选实施例中，所述检测蛋白印迹为斑点状或条带状。在本实用新型的某些优选实施例中，所述质控蛋白印迹的形状为斑点状或条带状。在本实用新型的某些优选实施例中，所述检测蛋白印迹和所述质控蛋白印迹都为斑点状。[0021]在本实用新型的某些优选实施例中，所述检测蛋白印迹和所述质控蛋白印迹都为条带状。在本实用新型的某些优选实施例中，每条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹、CCP蛋白印迹或结合RF的变性IgG蛋白印迹。在本实用新型的某些优选实施例中，所述试纸条为两条，两条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹或CCP蛋白印迹，RF- (IgM, IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹，但两条试纸条上的的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹的物质不相同。在本实用新型的某些优选实施例中，所述试纸条为三条，三条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹或CCP蛋白印迹，RF- (IgM, IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹，但三条试纸条上的的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹的物质均不相同。在本实用新型的某些优选实施例中，所述试纸条为四条，其中一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹或CCP蛋白印迹，其余三条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为RF-(IgM, IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹。在本实用新型的某些优选实施例中，所述试纸条为五条，其中一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为CP蛋白印迹，一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为CCP蛋白印迹，其余三条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为RF-(IgM，IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹。在本实用新型的某些优选实施例中，所述质控蛋白印迹中的质控蛋白为与样品中抗体结合的抗体或蛋白，或者为与所述胶体金标记的蛋白结合的抗体或蛋白。在本实用新型的某些优选实施例中，所述试纸条的结合垫上还包被有第二种胶体金标记的蛋白，且所述质控蛋白印迹中的质控蛋白为能够结合所述第二种胶体金标记的蛋白。在本实用新型的某些优选实施例中，所述诊断试剂盒进一步包括放置在所述盒体内的至少一个固定底座，所述至少一个固定底座上固定有所述至少两条试纸条。在本实用新型的某些优选实施例中，所述至少一个固定底座上固定有两个到五个所述试纸条，且所述试纸条相互独立。在本实用新型的某些优选实施例中，所述固定底座的板面上设有突起，其中所述试纸条放置在由所述突起界定的、可容纳单条试纸条的容纳部内。在本实用新型的某些优选实施例中，所述容纳部为至少两个。在本实用新型的某些优选实施例中，所述固定底座为两个或两个以上，其中每个所述固定底座上分别固定有至少一个所述试纸条。在本实用新型的某些优选实施例中，所述诊断试剂盒还包括与所述固定底座和所述试纸条配套使用的上盖，每个所述上盖带有加样口和观察窗口，所述加样口位于所述试纸条的所述样品垫上方，所述观察窗口位于所述试纸条上的所述检测膜上方。在本实用新型的某些优选实施例中，所述至少两条试纸条相互平行放置。在本实用新型的某些优选实施例中，所述试纸条的检测膜上包被的检测蛋白印迹基本位于同一水平线上，所述试纸条的检测膜上包被的质控蛋白印迹基本位于同一水平线上。在本实用新型的某些优选实施例中，所述诊断试剂盒还包括一种或多种选自下组的组成部分:固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、样品稀释液。本实用新型在临床中能够快速准确地检测RA，以满足临床诊断的需要，实现即时检测、床边检测。

图1为单条试纸条的剖面示例图，其中I指示样品垫，2指示结合垫，3指示检测膜，4指示吸水垫，5指示检测区，6指示质控区，7指示支撑底板。图2为单条试纸条的分解示例图，其中1-7所表示的结构同图1。图3为可以设置单条试纸条的设有突起的固定底座的不例图,其中(a)为俯视图，(b)为(a)的A-A剖视图。其中8指示固定底座，9指示突起，20指示容纳部。图4为可与固定底座配合的上盖的示例俯视图，其中10指示上盖.11指示加样口，12指示观察窗口。图5为设有试纸条的固定底座和上盖配合时的结构示意图，其中(a)为俯视图，(b)为(a)的B-B剖视图，其中1-12所表示的结构同图1、图2和图4。图6为可以设置两条试纸条的设有突起的固定底座及可与之配合的上盖的示例图，其中(a)为固定底座的示例俯视图，(b)为图(a)的C-C剖视图。(C)为上盖的示例俯视图。其中8’指示固定底座,9’指示突起，10’指示上盖,11’指示加样口，12’指示观察窗口，20指示容纳部。图7为可以设置三条试纸条的设有突起的固定底座及可与之配合的上盖的示例图，其中(a)为固定底座的示例俯视图，(b)为固定底座的示例剖视图，(C)为上盖的示例俯视图。其中8〃指示固定底座，9〃指示突起，10〃指示上盖，11〃指示加样口，12〃指示观察窗口，20指示容纳部。
具体实施方式
本实用新型提供了用于诊断类风湿关节炎的含有试纸条的诊断试剂盒，所述试纸条能够用于进行样品的层析，并且能够检测样品中存在的被检物质。在某些实施方式中，所述样品可以是人体液样品，例如全血或血清，血浆样本，体液如关节液等。在某些实施方式中，所述样品中存在的被检物质是一种或多种人抗体，例如，抗CCP抗体抗瓜氨酸化蛋白抗体，RF-1gG, RF-1gM, RF-1gA,上述这些人抗体被证明与类风湿关节炎有关，通过检测样本中是否存在一种或多种这些抗体，可以辅助诊断类风湿关节炎。这些被检抗体能够特异性结合其对应的抗原，因此，将这些抗体的抗原包被在所述试纸条的检测区，可以检测与之对应的被检抗体。表I中列出了能够与抗CCP抗体，AFA, ACF, MCV, RF-1gG, RF-1gM, RF-1gA等特异性结合的抗原的示例。表I
权利要求1.一种用于诊断类风湿关节炎的诊断试剂盒，包括盒体，其特征在于，在所述盒体内放置有至少两条试纸条，每条试纸条均包括依次搭接在支撑底板上的样品垫、结合垫、检测膜和吸水垫； 每一试纸条的所述结合垫上包被有可与人抗体结合的金属胶体标记的蛋白； 每一试纸条的所述检测膜的检测区上包被有一种检测蛋白印迹； 每一试纸条的所述检测膜的质控区上包被有一种质控蛋白印迹； 每一试纸条的所述检测膜的检测区上的所述检测蛋白印迹与所述质控区上的质控蛋白印迹彼此分离； 其中至少有一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹与其它条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹不相同。
2.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述样品垫是由玻璃纤维、酯聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成；所述结合垫是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成；所述检测膜是由硝酸纤维素膜制成；所述支撑底板由硬质地而不吸水的材料制成。
3.如权利要求2所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述支撑底板由PVC板制成。
4.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述检测蛋白印迹为斑点状或条带状。
5.如权利要求1或4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述质控蛋白印迹的形状为斑点状或条带状。
6.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述检测蛋白印迹和所述质控蛋白印迹都为斑点状。
7.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述检测蛋白印迹和所述质控蛋白印迹都为条带状。
8.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，每条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹、CCP蛋白印迹或RF-(IgM, IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹。
9.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试纸条为两条，两条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹或CCP蛋白印迹，RF- (IgM, IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹，但两条试纸条上的的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹的物质不相同。
10.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试纸条为三条，三条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹或CCP蛋白印迹，RF- (IgM, IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹，但三条试纸条上的的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹的物质均不相同。
11.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试纸条为四条，其中一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为一种选自下组的物质:CP蛋白印迹或CCP蛋白印迹，其余三条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为RF-(IgM, IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹。
12.如权利要求1所述的诊断试剂盒 ，其特征在于，所述试纸条为五条，其中一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为CP蛋白印迹，一条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为CCP蛋白印迹，其余三条试纸条上的所述检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹为RF-(IgM，IgA, IgG)结合抗原变性IgG蛋白印迹。
13.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述质控蛋白印迹中的质控蛋白为与样品中抗体结合的抗体或蛋白，或者为与所述胶体金标记的蛋白结合的抗体或蛋白。
14.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试纸条的结合垫上还包被有第二种胶体金标记的蛋白，且所述质控蛋白印迹中的质控蛋白为能够结合所述第二种胶体金标记的蛋白。
15.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒进一步包括放置在所述盒体内的至少一个固定底座，所述至少一个固定底座上固定有所述至少两条试纸条。
16.如权利要求15所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述至少一个固定底座上固定有两个到五个所述试纸条，且所述试纸条相互独立。
17.如权利要求15所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述固定底座的板面上设有突起，其中所述试纸条放置在由所述突起界定的、可容纳单条试纸条的容纳部内。
18.如权利要求17所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述容纳部为至少两个。
19.如权利要求17所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述固定底座为两个或两个以上，其中每个所述固定底座上分别固定有至少一个所述试纸条。
20.如权利要求15所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒还包括与所述固定底座和所述试纸条配套使用的上盖，每个所述上盖带有加样口和观察窗口，所述加样口位于所述试纸条的所述样品垫上方，所述观察窗口位于所述试纸条上的所述检测膜上方。
21.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述至少两条试纸条相互平行放置。
22.如权利要求21所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述试纸条的检测膜上包被的检测蛋白印迹基本位于同一水平线上，所述试纸条的检测膜上包被的质控蛋白印迹基本位于同一水平线上。
23.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述诊断试剂盒还包括一种或多种选自下组的组成部分:固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、样品稀释液。
24.如权利要求1所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述检测蛋白印迹相比于所述质控蛋白印迹更靠近于结合垫。
专利摘要本实用新型公开的一种用于诊断类风湿关节炎的诊断试剂盒，包括盒体，其在盒体内放置有至少两条试纸条，每条试纸条均包括依次搭接在支撑底板上的样品垫、结合垫、检测膜和吸水垫；每一试纸条的结合垫上包被有可与人抗体结合的金属胶体标记的蛋白；检测膜的检测区上包被有一种检测蛋白印迹；检测膜的质控区上包被有一种质控蛋白印迹；检测膜的检测区上的所述检测蛋白印迹与所述质控区上的质控蛋白印迹彼此分离；其中至少有一条试纸条上的检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹与其它条试纸条上的检测膜的检测区上包被的检测蛋白印迹不相同。本实用新型在临床中能够快速准确地检测RA,以满足临床诊断的需要，实现即时检测、床边检测。
文档编号G01N33/566GK202994798SQ201220562010
公开日2013年6月12日 申请日期2012年10月29日 优先权日2012年10月29日
发明者包骏, 张玥 申请人:上海科新生物技术股份有限公司