专利名称：用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法
技术领域：
本发明涉及一种生物工程技术领域的检测方法，具体是一种用胶体金免疫 层析试验检测氯丙嗪的方法。
背景技术：
氯丙嗪(CPZ， N， N-二甲基-2-氯-10H-吩噻嗪-10-丙胺盐酸盐)是一种良好 的镇静剂，对中枢神经机能有良好的抑制作用。在动物的词料中适量添加可以 显著提高日增重，减少饲料消耗，并能作为抗应激药，预防应激综合症和减少 运输途中的死亡率。CPZ主要在肝脏代谢，大部分随尿排出，排法缓慢，易产生 药物残留。CPZ对人体的神经系统、呼吸系统和循环系统都具有抑制作用，并且 可以通过胎盘屏障进入胎血循环。轻微中毒者表现出头晕，嗜睡，乏力，语言 不清，视力模糊及轻微呕吐等食物中毒症状。急性中毒者则表现为昏迷、共济 失调、呼吸浅漫、昏迷、休克，最后窒息死亡。胎儿、婴儿与老年人对CPZ的 代谢明显降低。加入WT0之后，畜禽产品的国际贸易量日益增加，随之对进出 口产品的生物安全性的要求也越来越高，为了保证畜禽产品顺利上市和食用者 的健康，出入境检疫、海关、生产企业、监督部门等部门迫切需要一种特异、 快速、简便的CPZ检测方法。
经对现有技术的文献检索发现，人类临床医学上检测CPZ血药浓度的主要 方法为高效液相色谱法。2005年，范盛先在中国兽医学报第25巻第4期名为《猪 肾脏中氯丙嗪和异丙嗪残留检测方法的建立》的论文中提出可以采用高效液相 色谱法检测猪肾脏中的氯丙嗪，检测过程需提取猪肾中的氯丙嗪，提取出的氯 丙嗪经净化和氮气吹干后，用高效液相色谱系统，HypersilCw柱，UV检测器测 定，最低检测限为10ug/kg。 2007年陈国征在中国卫生检验杂志第17巻第11 期中发表文章《气相色谱法测定尿液中盐酸氯丙嗪》，建立了气象色谱法检测中 毒病人尿液中氯丙嗪的方法，最低检测限为0. 05ug/ml。 2006年路平和2008年 许世富分别在中国动物检疫第23巻第7期和现代农业科技第14期中报道了采用气相色谱质谱法测定猪肝、猪肉中的氯丙嗪。但是，上述两种氯丙嗪检测方 法不仅需要对检测样品进行一系列严格的预处理，还需要高效液相色谱仪或气 相色谱仪等贵重仪器，同时要求有专业的操作人员，不利于现场常规检测使用。 目前，国外已有商品化CPZ酶联免疫检测试剂盒，但价格昂贵，大大增加了检 测成本，而且操作繁琐，耗时较长。免疫胶体金直接利用特异性抗体检测CPZ， 检测对象单一，针对性强，准确率高，检测速度快，只需5 — 10分钟，操作人 员不需经过特殊培训，不仅可以满足检验部门快速、正确地检测CPZ体内残留 的要求，而且便于基层推广和运用。胶体金试纸条的监测样品可以以血液或尿 液为检测样品，从而保证了在屠宰前对动物体内药物残留检测的需求，能有效 避免因宰后肉品检测不合格造成的经济损失。目前国内外均无检测CPZ残留的 胶体金快速试纸条出售。

发明内容
本发明的目的在于克服现有方法的不足，提供一种用胶体金免疫层析试验 检测氯丙嗪的方法，该方法以与氯丙嗪的多克隆抗体结合的胶体金作为示踪标 记物，通过竞争法的胶体金免疫层析方法进行检测，可直接检测样品中的氯丙 嗪小分子。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明先将氯丙嗪(CPZ)半抗原通过 重氮化反应与对氨苯甲酸连接，再借助苯环上的羧基分别与钥孔血蓝蛋白(KLH) 和牛血清白蛋白(BSA)的氨基形成肽键，从而连接形成CPZ偶联物CPZ -KLH 和CPZ -BSA。抗原CPZ -KLH用于制备多克隆抗体，抗原CPZ - BSA用于间接酶 联免疫吸附实验检测多克隆抗体效价。用胶体金标记多克隆抗体，将其作为示 踪标记物。在膜上的检测线(T)上固定抗原CPZ-BSA、质控线上固定抗兔的多 克隆抗体，金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据 检测线、质控线显色与否来判定阴阳性结果。
本发明方法包括如下步骤
① 将CPZ半抗原通过重氮化反应与对氨苯甲酸连接，通过CPZ重氮化合物中 苯环上的羧基与KLH和BSA的氨基形成肽键，将CPZ分别连接到KLH和BSA，从 而合成CPZ的偶联物CPZ-KLH和CPZ-BSA;
② 用步骤①合成的CPZ-KLH完全抗原与等量的弗氏完全佐剂首次免疫新西 兰大白兔，采用背部皮下多点免疫法，再用完全抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化加强免疫新西兰大白兔三次，每次免疫前耳静脉采血，以CPZ-BSA为包被抗
原，用间接酶链免疫吸附试验测抗体效价，效价达到l: 10000以上时采血；先
后采用硫酸铵沉淀法和亲和层析法纯化血清中的抗体IgG，获得抗CPZ的多克隆 抗体；
③ 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；
④ 用制备好的胶体金来标记经过透析除盐处理的多克隆抗体蛋白；
⑤ 将标记好的多克隆抗体蛋白喷涂到金标垫上，CPZ偶联物CPZ-BSA喷涂到 T线，羊抗兔的多克隆抗体喷涂到C线，然后组装成试纸条；
⑥ 把试纸条的测试端插入待检的液体样品中(不能超过Max线)，由于毛细 效应，液体的层析方向向前，与固定在T线、C线上的物质发生结合被截留而 显色，根据T线、C线的显色情况判定阴阳性结果。
胶体金标记技术是以胶体金作为示踪标志物，应用抗原抗体反应的一种免 疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、单宁酸/柠檬酸钠和 柠檬酸三钠等作用下(本发明用的是柠檬酸三钠作为还原剂)，聚合成特定大小 的金颗粒，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称为胶体金。胶体金标 记，实质上是蛋白质高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理是 胶体金颗粒表面的负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团因静电作用而形成牢固 结合。这种球型的胶体金颗粒具有高电子密度，能够对多种生物高分子物质如 葡萄球菌、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、BSA多肽等非共价 结合，形成可见的紫红色，使其成为免疫反应的优良标记物，因此广泛应用于 各种物质的检测。
酶联免疫吸附试验由于液相中的抗原(或抗体)需经扩散才能与固相上的 抗原或抗体反应，需较长时间，各个步骤需彻底地洗涤，并且需要特定的酶和 底物显色，因此耗时长，程序繁琐；高效液相色谱法和气相色谱法因其对检测 样品、仪器及操作人员的要求，不利于基层常规检测使用。放射免疫法虽然灵 敏但因同位素污染环境危害很大，无法推广。胶体金免疫层析法能克服上述方 法的不足，胶体金免疫层析试验法利用抗原抗体反应原理，胶体金标记示踪物 与固定在膜上的抗原或抗体形成复合物被截留而显色，不需要特定的酶和底物 显色，也不需要抗原抗体之间的较长时间的物理吸附，而根据显色与否判定阴 阳性结果，安全有效，简单方便。本发明步骤③中，所述用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，具体为先将100ml 的0. 005。/。HAuCl4溶液加热至沸腾，迅速加入0. 5 lml的1%柠檬酸三钠水溶液， 加热，煮沸7 10min出现透明的酒红色，最后加三蒸水至100ml，制备得到40nm 的胶体金溶液。
本发明步骤④中，所述用制备好的胶体金来标记多克隆抗体蛋白，具体为 向搅拌中的胶体金溶液里迅速加入抗体蛋白使其终浓度达到42ug/mL，室温下孵 育5min，用0. lmol/L 1 :03调节金溶液的pH为9. 0，然后加入10%BSA至终浓度 0. 1%来稳定胶体金溶液，10000rpm离心20min，弃上清，再用0. OlmM Tris (pH=9.0)的缓冲液恢复，重复1次，以除去未与金颗粒结合的抗体，最后一 次离心后将沉淀重悬于原体积的1/10的O.OlmM Tris (pH=9.0)缓冲液中，最 后加入10%BSA至终浓度0. 1% ， 4'C储存备用。
本发明步骤⑤中，组装成的试纸条在37'C烘箱干燥，在4'C保存备用。
本发明步骤⑥中，待检的液体样品是指动物的尿液或组织匀浆，经12000 转/分钟离心5分，取上清。
本发明步骤(D中，若待测液中含CPZ，当待测液进入测试端时，由于毛细效 应往前移动，金标垫上的金标多克隆抗体(Au-Ab)形成Au-Ab-CPZ 二联复合 物，复合物在NC膜上继续层析泳动，不能与检测线上(T线)的CPZ-BSA结合 而被固定在T线位置的CPZ-BSA截留下来，从而不能形成可见的棕红色条带； Au-Ab-CPZ复合物由于层析作用，继续迁移向前，与固定在质控线(C线)上的 羊抗兔多克隆抗体结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带，即阳性结果是 仅在C线上呈现棕红色条带。
本发明步骤⑥中，若待测液不含CPZ毒素，固定于金标垫上的金标多克隆抗 体因毛细效应随待测液体向前移动，与固定在检测线上(T线)的CPZ-BSA结合， 因而被金标兔抗多克隆抗体截留下来，形成可见的棕红色条带；过量的金标多 克隆抗体继续层析向前，与固定在质控线(C线)上的羊抗兔多克隆抗体结合形 成二联复合物而被截留下来，形成可见的棕红色条带，即阴性结果在T线、C线 上均形成棕红色条带。
胶体金免疫层析试验的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的胶体金 标记。固定在NC膜上的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，胶体金标记的抗原或 抗体既保留其免疫学活性，又有示踪的功能。在测定时，受检样品(测定其中的抗体或抗原)通过毛细作用向前移行与金标垫上的抗原或抗体起反应。继续 向前移行，与固定在T线抗原或抗体结合形成免疫复合物被截留而显色，约为 一条宽为l丽的棕红色条带，多余的金标抗体继续向前移动，与固定在C线的 羊抗兔多克隆抗体结合被截留而显色，约为一条宽为l醒的棕红色条带。此时T 线形成金标复合物与标本中受检物质的量呈一定的比例，故可根据T线呈现的 颜色深浅进行定性或半定量分析。本发明采用的是胶体金免疫层析试验竞争结 合法，是以CPZ的偶联物CPZ- BSA (抗原)固定T线，胶体金标记抗CPZ的多 克隆抗体附着于金标垫，羊抗兔的多克隆抗体固定C线，将样品垫插入装有样 品液的样品缸里，根据T线的显色与否来判定结果，C线的显色与否来判定试纸 条的本身质量。
本发明是鉴于待测样品若有CPZ药物，由于毛细效应向前层析移动，样品液 中的CPZ与金标多克隆抗体形成的复合物，竞争了 T线上抗原与金标多克隆抗 体结合的机会，所以胶体金不能或仅少量能被T线上的抗原截流而沉积，故而 以T线不显色或显色很浅来判定样品中有CPZ;相应地待测样品若没有CPZ， T 线则显色，呈现出清晰的红色条带，由此判定食品等检测样品中CPZ的含量。
本发明检测对象单一且针对性强，准确率高。检测速度快，所需时间短， 只需5 — 10分钟、不需经培训的专业人员就可使用本发明方法来检测，满足屠 宰场、出入境、海关等检验部门快速、正确地诊断该镇定药物CPZ药物残留的 要求，并且便于基层推广和运用。


图1为本发明实施例试纸条的结构图 图2为本发明实施例试纸条的阳性结果图 图3为本发明实施例试纸条的阴性结果图
具体实施例方式
下面结合附图对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方 案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的 保护范围不限于下述的实施例。
下面实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如朱 立平、陈学清在《免疫学常用试验方法》中所述的条件，或按照制造厂商所建 议的条件。本实例首先将CPZ连接到BSA或KLH上获得具有免疫原性的完全抗原，并 通过超滤离心纯度该抗原；将该KLH与CPZ偶联的抗原CPZ-KLH作为免疫原免 疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，并用BSA与CPZ偶联的抗原CPZ-BSA作为包 被抗原采用间接酶链免疫吸附试验测定抗CPZ抗体效价；纯化多克隆抗体；用l ^的柠檬酸三钠还原法制备40nm的胶体金，并标记纯化的多克隆抗体蛋白；按 金标多克隆抗体、CPZ-BSA偶联抗原、羊抗兔多克隆抗体喷涂金标垫、检测线(T 线)、质控线(C线)，然后组装成试纸条，置37'C烘箱烘干，存放-2(TC冰箱保 存备用；检测时，待试纸条于密封包装中恢复至室温后，将测试端插入样品液 中，5 — 10分钟观察结果。
实施例
1、偶联物CPZ-KLH和CPZ-BSA的制备
①免疫抗原的制备0.350g对氨苯甲酸溶于3ml水和0.7ml浓盐酸中；以 含有2. 5ramo1的亚硝酸钠(的lml水)逐滴加入，并搅拌30min;逐滴加入0. 15ml 1M硫酸铵，并不断搅拌10rain以便除去过量的亚硝酸；将2. 5 mmolCPZ溶于蒸 馏水，逐渐加入对氨苯甲酸的重氮盐并不断搅动；加入lml2mM的醋酸钠；6小 时后再加2mmo1的醋酸钠，用pH值试纸调溶液的pH为1. 5; 4'C搅动过夜；用 0. 5N NaOH调到pH到5. 6，再用30ml 二氯甲烷萃取；并用蒸馏水洗有机层两次， 抽真空干燥有机相，得到粉红色的干燥物。
用层析液甲醇-氯仿-NH4 OH (20:80:5)溶解一定量的浅粉色的干燥物，用 毛细玻璃管在TLC板上点样，晾干后进行薄层层析鉴定是否获得重氮化的CPZ。 在TLC板(Silica Gel GF, 250 micron)上，重氮化的CPZ的Rf value为0. 27, 而CPZ的Rf值为0. 95。 8"C下将23mg (0. 05 mmol)纯化过的CPZ半抗原溶于 2ml 二氧杂环已烷(dioxane)，再加0. 05 mmol三乙胺0. 05 mmol氯甲酸异丁酯， 反应成为混合酸酐。为了消除二氧杂环己烷过氧化物，二氧杂环已垸用碱性氧 化铝处理。
取一定量5m沐LH溶于10ml水，将8ml 二氧杂环己垸慢慢加入KLH溶液中， 并用0. IN NaOH维持溶液pH在9. 0左右。将混合酸酐逐滴加入到KLH溶液中， 8。C不断搅拌30min保持ph在9.0左右；溶液4。C保存过夜；用分子量为10000 的超滤离心管离心，并用水与二氧杂环己垸比例为1:1的溶液洗2次，除去未 偶联上的CPZ化合物；再用蒸馏水洗2次除去二氧杂环己烷，最后冻干保存于-80°C。
②包被抗原的制备CPZ偶联的载体蛋白为BSA，用量为30mg，制备步骤同 免疫抗原。
2、 多克隆抗体的制备
将CPZ-KLH完全抗原冻干粉溶解于PBS中，测定完全抗原中载体蛋白的浓 度。按照载体蛋白约3mg/只的完全抗原与等量的弗氏完全佐剂乳化完全，新西 兰大白兔背部皮内多点注射，进行初次免疫。按照载体蛋白约5mg/只的完全抗 原与等量的弗氏完全佐剂乳化完全，新西兰大白兔背部皮内多点注射，加强免 疫3次。每次免疫间隔2周，免疫前耳沿静脉采血。以CPZ-BSA为包被抗原， 用间接酶联免疫反应测定血清中抗CPZ抗体的效价，效价达到1:10000后，收 集血清。采用硫酸铵分级沉淀和亲和层析法纯化采集的血清。
3、 胶体金的制备
先将100ml的0. 005% HAuCl4溶液加热至沸腾，迅速加入0. 5 lml的1%柠 檬酸三钠水溶液，开始有些蓝色，然后浅蓝、蓝色，再加热出现红色，煮沸7 10min出现透明的酒红色，最后加三蒸水至100ml，就这样制备了 40nm的胶体 金溶液。然后用电镜镜检，确保制备的金颗粒尽量使其大小一致，均匀，颗粒 直径在40nm左右，否则重新制备。
4、 多克隆抗体的标记
待标记的抗体蛋白用0.005mol/L的氯化钠溶液透析48小时除盐，然后用 制备好的40nm的胶体金来标记多克隆抗体蛋白。具体步骤为①向搅拌中的胶 体金溶液里迅速加入抗体蛋白使其终浓度达到42ug/mL，室温下孵育5min;② 用0. lmol/L K2C03调节金溶液的pH为9. 0，然后加入10%BSA至终浓度0. 1%来 稳定胶体金溶液，反应5min;③10000rpm离心20min，弃上清，再用0. OlmMTris (pH=9.0)的缓冲液恢复，重复1次，以除去未与金颗粒结合的抗体； 最后 一次离心后将沉淀重悬于原体积的1/10的O.OlmM Tris (pH=9.0)缓冲液中， 最后加入BSA至终浓度为0. 1 % ， NaN3至终浓度0. 02%, 4'C储存备用。
以上操作中应注意， 一切溶液中不应含杂质微粒，可用高速离心或微孔滤 膜预处理。
5、 胶体金试纸条的组装
将标记好的多克隆抗体蛋白喷涂到金标垫上，喷涂CPZ-BSA偶联抗原到T烘箱干燥，置4'C冰箱保存备用。 试纸条的组装顺序如附图1，由下到上的顺序为1为塑料底衬、2为黏合剂、3 为硝酸纤维素膜、5为对照线、4为检测线、6为样品垫、7为金标垫、8为吸 水垫、9为保护膜。
6、胶体金试纸条的使用及结果判定
检测前，先进行待检样品的处理，即动物的尿液或组织匀浆经12000转/分 钟离心5分，其上清转移到5ml的离心管中备用。
然后把试纸条的测试端插入待检液体中(不能超过Max线)，由于毛细效应， 液体的层析方向向上，若待检液中含CPZ，当待测液进入测试端时，由于毛细效 应往前移动，CPZ与金标垫上的金标多克隆抗体(Au-Ab)形成Au-Ab-CPZ 二联 复合物，复合物在NC膜上继续层析泳动，无法与检测线(T线)上的CPZ-BSA 偶联抗原结合而不能被固定在T线抗原截留下来，无法形成可见的棕红色条带； Au-Ab-CPZ复合物由于层析作用，继续迁移向前，与固定在质控线(C线)上的 羊抗兔多克隆抗体结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带，进行定性判定； 根据检测线显色深浅程度来大概判定检测到的CPZ含量，属于半定量，然后再 结合酶联免疫试验进行定量。如附图2。
若待测液不含CPZ，金标垫的金标兔抗多克隆抗体继续向前移动，则与检 测线(T线)的CPZ-BSA结合，形成Au-Ab-CPZ-BSA而被截留，形成可见的棕 红色条带，多余的金标多克隆体继续层析向上，与固定在质控线(C线)上的 二抗结合形成二联复合物而被截留下来，形成可见的棕红色条带，如附图3。 实施例可直接检测样品中的CPZ，使用方法不需要专业培训，操作方便、快 速，5 10分钟即可获得结果，可达到快速、简便、及时地检测CPZ药物残留的 目的。
权利要求
1、一种用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特征在于，包括如下步骤①将CPZ半抗原通过重氮化反应与对氨苯甲酸连接，通过CPZ重氮化合物中苯环上的羧基与KLH和BSA的氨基形成肽键，将CPZ分别连接到KLH和BSA，从而合成CPZ的偶联物CPZ-KLH和CPZ-BSA；②用步骤①合成的CPZ-KLH完全抗原与等量的弗氏完全佐剂首次免疫新西兰大白兔，采用背部皮下多点免疫法，再用完全抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化加强免疫新西兰大白兔三次，每次免疫前耳静脉采血，以CPZ-BSA为包被抗原，用间接酶链免疫吸附试验测抗体效价，效价达到1∶10000以上时采血；先后采用硫酸铵沉淀法和亲和层析法纯化血清中的抗体IgG，获得抗CPZ的多克隆抗体；③用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；④用制备好的胶体金来标记经过透析除盐处理的多克隆抗体蛋白；⑤将标记好的多克隆抗体蛋白喷涂到金标垫上，CPZ偶联物CPZ-BSA喷涂到T线，羊抗兔的多克隆抗体喷涂到C线，然后组装成试纸条；⑥把试纸条的测试端插入待检的液体样品中，不能超过Max线，由于毛细效应，液体的层析方向向前，与固定在T线、C线上的物质发生结合被截留而显色，根据T线、C线的显色情况判定阴阳性结果。
2、 根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特 征是，步骤③中，所述用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，具体为先将100ml 的0. 005。/。HAuCl4溶液加热至沸腾，迅速加入0. 5 lml的1%柠檬酸三钠水溶液， 加热，煮沸7 10min出现透明的酒红色，最后加三蒸水至100ml，制备得到40nm 的胶体金溶液。
3、 根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特 征是，步骤④中，所述用制备好的胶体金来标记多克隆抗体蛋白，具体为向 搅拌中的胶体金溶液里迅速加入抗体蛋白使其终浓度达到42ug/mL，室温下孵育 5min，用0. lmol/L 1 :03调节金溶液的pH为9. 0，然后加入10%BSA至终浓度0. 1%来稳定胶体金溶液，10000rpm离心20min，弃上清，再用pH=9. 0的0. OlmM Tris 的缓冲液恢复，重复1次，以除去未与金颗粒结合的抗体，最后一次离心后将 沉淀重悬于原体积的1/10的pH=9. 0的0. OlmMTris缓冲液中，最后加入10%BSA 至终浓度O. 1%， 4'C储存备用。
4、 根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特 征是，步骤⑤中，组装成的试纸条在37'C烘箱干燥，在4'C保存备用。
5、 根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特 征是，步骤⑥中，待检的液体样品是指动物的尿液或组织匀浆，经12000转/分 钟离心5分，取上清。
6、 根据权利要求l所述的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特 征是，步骤⑥中，若待测液中含CPZ,当待测液进入测试端时，由于毛细效应往 前移动，金标垫上的金标多克隆抗体Au-Ab形成Au-Ab-CPZ 二联复合物，复合 物在NC膜上继续层析泳动，不能与检测线T线上的CPZ-BSA结合而被固定在T 线位置的CPZ-BSA截留下来，从而不能形成可见的棕红色条带；Au-Ab-CPZ复合 物由于层析作用，继续迁移向前，与固定在质控线C线上的羊抗兔多克隆抗体 结合而被截留下来，形成可见的棕红色条带，即阳性结果是仅在C线上呈现棕 红色条带。
7、 根据权利要求1所述的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特 征是，步骤⑥中，若待测液不含CPZ毒素，固定于金标垫上的金标多克隆抗体 因毛细效应随待测液体向前移动，与固定在检测线T线上的CPZ-BSA结合，因 而被金标兔抗多克隆抗体截留下来，形成可见的棕红色条带；过量的金标多克 隆抗体继续层析向前，与固定在质控线C线上的羊抗兔多克隆抗体结合形成二 联复合物而被截留下来，形成可见的棕红色条带，即阴性结果在T线、C线上均 形成棕红色条带。
全文摘要
本发明涉及一种生物工程技术领域的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，将CPZ半抗原通过重氮化反应与对氨苯甲酸连接，再借助苯环上的羧基分别与KLH和BSA的氨基形成肽键，形成CPZ偶联物CPZ-KLH和CPZ-BSA。抗原CPZ-KLH用于制备多克隆抗体，抗原CPZ-BSA用于间接酶联免疫吸附实验检测多克隆抗体效价，用胶体金标记多克隆抗体，将其作为示踪标记物，在膜上的检测线上固定抗原CPZ-BSA、质控线上固定抗兔的多克隆抗体，金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据检测线、质控线显色与否来判定阴阳性结果。本发明可直接检测样品中的氯丙嗪小分子，检测速度快，所需时间短。
文档编号G01N33/558GK101424688SQ200810203009
公开日2009年5月6日 申请日期2008年11月20日 优先权日2008年11月20日
发明者严亚贤, 史一博, 孙建和 申请人:上海交通大学