专利名称：用于亲和分离的微泡的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于亲和分离、亲和纯化和亲和分析的基于亲和分子包衣微泡的方法、组合物及试剂盒。
背景技术：
细胞、病毒、细菌和水溶性分子的分离领域已使用了各种微粒作为固相来吸附或结合所关注的目标物质。例如，配体(如抗体)包衣的磁性微粒可以结合到靶细胞或水溶性蛋白质上。目标物质通过结合到磁性微粒上，实现了其与他类细胞或蛋白质的分离。目前对该原创性工作已有各种改进，且多年前就出现有商业化产品。其他研究者曾经使用过橡胶颗粒、脂质体、乳脂球和塑料颗粒(如聚苯こ烯、聚こ烯、聚丙烯、尼龙等)。作为捕获载体，这些物质都具有其各自的特性和问题。对非目标细胞或蛋白质的非特异性吸附是这些方法中最常见的问题，从而导致分离不良。此外，大多数方法在结合步骤以后都需要至少ー个附加步骤以实现未结合样品和微粒结合物之间的分离，如磁性微粒需要施加磁场；有时需要通过离心或过滤将微粒从溶液中分离。微粒结合目标细胞或蛋白质所需的时间通常与其表面积和单位体积溶液中的微粒数相关。颗粒越小，表面积越大，从而结合越快。然而，大的表面积通常会増加非特异性
彡ロロ。分离方法可能会 根据其本身的性质或原理共同分离不同的微粒。这在基于重力离心法(gravity centrifugation)的分离中尤为明显,在此过程中微粒、细胞或其它物质可能会共同形成丸状(co-pellet)。此外，某些细胞类型如巨噬细胞和单核细胞，它们本身可以非特异性吞噬这些微粒，从而和目标细胞一起被分离。尽管通过一定的步骤或预防措施可以将以往技术中的个别问题最小化或避免，但某些局限性是内在的且是不可能彻底克服的。目前不同的方法获得了不同程度的成功，这表明需要寻找ー个更好的解决该问题的办法。最理想的分离制剂应该具有无穷大的表面积而完全没有非特异性相互作用，从而保证结合过程可以快速进行，并将其与非目标细胞或水溶性分子的结合降至最低。理想的分离剂应当在不捕获非目标细胞或分子的前提下达到其和细胞悬液或可溶性分子溶液间的分离。

发明内容
本发明提供了用于亲和分离或亲和分析的组合物，其包括亲和分子共价包衣的微泡。本发明的一个实施方式中，所述微泡为蛋白质微泡，如白蛋白微泡。通过向蛋白质溶液中引入气体，如采用超声处理，可以制得蛋白质微泡。作为本发明的ー个方面，通过包括加热蛋白质溶液的方法可以向其中引入气体。在另ー实施方式中，通过蛋白质变性或以Cr+++处理，可以稳定蛋白质微泡。本发明的另ー实施方式中,所述微泡为玻璃微泡。作为本发明的ー个方面，所述玻璃微泡的密度约为0.6g/cc，平均直径为30 ii m左右。本发明中的亲和分子可以是受体、配体或抗体。或者，该亲和分子也可以是生物素、抗生物素蛋白或链亲和素。可通过例如使用异双功能试剂，如4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺基琥珀酰亚胺酷，将亲和分子直接连接到微泡上。在本发明另ー实施方式中，亲和分子通过例如和至少另ー个分子相互作用，间接连接到微泡上。作为本发明的一方面，微泡直接连接到链亲和素上，而亲和分子是生物素化的，通过链亲和素和生物素的相互作用将亲和分子连接到微泡上。在本发明的一个实施方式中，亲和分子可以通过微泡上的环氧包衣连接到微泡上。在另ー实施方式中，亲和分子通过微泡上的胺基官能团连接到微泡上。作为本发明的一方面，玻璃微泡经处理产生具有反应活性的表面残基，该残基和3_氨丙基三こ氧基硅烷反应，产生胺。另ー方面，玻璃微泡具有顺式-ニ醇包衣，通过该顺式-ニ醇(cis-diol)包衣，亲和分子可以直接连接到玻璃上。可例如如下产生顺式-ニ醇包衣:处理玻璃微泡以产生具有反应活性的表面羟基残基，使该残基与3-环氧丙氧基三甲氧基硅烷反应产生环氧官能团，用酸处理该环氧官能团，使该环氧官能团转化为顺式-ニ醇官能团。本发明也提供了一种产生用于亲和分离或亲和分析的蛋白质微泡的方法。一方面，该方法包括加热蛋白质溶液。在该方法的另一方面，通过超声处理蛋白质溶液，向其中引入气体，从而制得蛋白质微泡。在该方法的另一方面，在一种气体或混合气体的存在下对蛋白质溶液进行机械处理。作为本发明的另ー个方面，所述气体为空气，所述蛋白质为白蛋白。通过例如Cr+++处理可以稳定蛋白质微泡。本发明还提供了一种产生用于亲和分离或亲和分析的微泡的方法，所述方法包括提供微泡；和对微泡进行亲和分子包衣。在本发明的另ー实施方式中，提供了特定样品(species)的亲和分离或亲和分析的方法。根据这些实施方式，该方法包括以下步骤:提供亲和分子包衣的微泡的溶液，样品与亲和分子在溶液中的相互作用使微泡与在溶液中与亲和分子相互作用的样品接触，从而产生样品包衣的微泡；通过使微泡漂浮到溶液表面而达到样品与溶液分离的目的。作为该实施方式的一方面，样品可以是受体、配体或抗原。在一个实施方式中，样品为分析物。而在其它实施方式中，样品为病毒或细胞。作为本发明的另一方面，蛋白质微泡，尤其是白蛋白微泡，可以在去垢剂、压カ或真空的作用下释放样品。
具体实施例方式应理解前述的总体描述和随后的详细描述仅用作范例和阐述，而并不用于限定本发明。如本文所用，如非特别指出，単数形式包含了复数形式。如本文所用，如非特别指出，“或”表示“和/或”的意思。此外，术语“包括(including)”及其其它形式，如“包括(includes) ”或“包括(included) ”的使用，是非限制性的。如本文所用，如非特别指出，“可以”表示“可能”。每部分的标题仅用于全文的结构布局，而并不影响主题的描述。本申请引用的所有文件或文件的部分，包括但不限于:专利、专利申请、文献、书藉、手册 或论文，为了任何目的以其全文作为參考纳入本文。定义 在进ー步描述本发明的具体实施方式
以前，将对一系列术语进行详尽的定义和阐述。除非提供特定的定义，本发明中使用的术语，试验过程、技术和方法均是其所属技术领域中已知。标准化学符号与縮写可互換使用，该化学符号可以代表其全名。因此，例如，“碳”和“ C”被认为具有相同的含义。化学合成、化学修饰、化学分析、药物的配制、制齐IJ、递送和患者的治疗可依据标准技术进行。重组DNA方法、寡聚核苷酸合成、组织培养等可依据标准技术进行。反应和纯化技术可如本领域普遍所接受地进行操作或根据本文描述进行操作例如根据厂商的说明书使用试剂盒。前述的技术和步骤基本可以依据各种概括性或详细的參考文献所报道的常规方法进行，这些方法在本文通篇中有引用和讨论。例如，參见 Sambrook 等，Molecular Cloning:A laboratory Manual (2d ed.，Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989))(分子克隆:实验手册' (第二版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1989)) ；Harlow&Lane, Antibodies:A LaboratoryManual (Cola Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, N.Y.(1988))(抗体:实验手册(冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，1988))，为了任何目的以其全文作为參考纳入本文。如本文所用，所述的“气泡”，是指ー种小的、空心的、轻质小球，尤指包裹在薄膜中的具有小球体积的气体。气泡内部可以含有任何气体，包括但不限于:氧气、氮气、ニ氧化碳、氦气、碳氟化合物气体和它们的各种混合气体，如空气。薄膜可以是任何能够包裹少量体积气体的物质，如:不溶的蛋白质或脂质；聚合物或非聚合物材料；固体，如金属；固体玻璃、陶瓷或类似材料；或者是塑料，如聚苯こ烯、聚こ烯、聚丙烯、尼龙等。作为优选的实施方式，该薄膜为白蛋白。作为另ー优选的实施方式，所述薄膜为硼硅酸盐玻璃。在某一实施方式中，薄膜对其所处的环境和溶液稳定。在另ー实施方式中，薄膜可以选择性的爆裂、压碎或溶解。“微泡”是小的气泡，其直径通常在0.1 ii m到100 y m的范围内，典型地在I ii m到50 u m的范围内，常常为2 u m至Ij 20 u m或2 u m至Ij 30 u m的范围内。如本文所用，术语“分析物”是指分析中的待检测且可能存在于样品中的任何物质。分析物可以是任何物质，对此并无限制。在本发明的优选实施方式中，分析物包括具有天然抗体的物质或可制备得到抗体的物质。分析物可以是例如:蛋白质、多肽、半抗原、碳水化合物、脂质、药物、细胞、细胞亚组分或细胞器(如溶酶体、线粒体)，或任意一种其它生物或非生物分子、复合物或它们的组合。在另ー实施方式中，分析物为ー种抗体。而在另ー实施方式中，分析物为核酸(DNA、RNA、PNA、以及它们的混合物或包括核苷衍生物或类似物的核酸)。
可利用本发明中的组合物、方法或试剂盒检测的多价配体分析物通常为聚氨基酸，即多肽、蛋白质、多糖、核酸以及它们的组合。这种组合包括细胞组分、组织、细菌、病毒、细胞壁、细胞膜、细胞器、染色体、基因、线粒体、细胞核等等。根据本发明的一方面，特定的分析物不包含核酸。利用本发明中的方法可以有利地检测各种蛋白质分析物。这些蛋白质可以根据其家族(每个家族中的蛋白质具有相似的结构特性)、生物学功能、以及与特定微生物的关系(尤其是致病微生物)等等进行分类。本发明尤为关注的蛋白质家族包括例如:免疫球蛋白、细胞因子、酶、激素、癌抗原、营养标记物(nutritional marker)、组织特异性抗原以及生物战剂。这些蛋白质分析物可能存在于血液、血清、血浆、脊髓液、滑液、唾液、尿液、精液、修复液(prosthetic fluid)、细胞或组织中。以下列出了用本发明的组合物、方法及试剂盒可以检测的在结构上相关的蛋白质分析物种类的例子:鱼精蛋白(protamines)组蛋白(histories)白蛋白(albumins)球蛋白(globulins)硬蛋白(scleroproteins)憐蛋白(phosphoproteins)粘蛋白(mucoproteins)以下列出的存在于人血浆中的，具有重要临床意义的蛋白质的例子，可以用本发明中的组合物、方法及试剂盒对其进行检测:a 脂蛋白(a:-Lipoprotein)a 1-抗膜蛋白酶(a 1-Antitrypsin)皮质激素传递蛋白(Transcortin)4.6S-后白蛋白(4.6S_Postalbumin)色氨酸缺陷蛋白(Tryptophan-poor)a 糖蛋白(a:-Glycoprotein)a lx-糖蛋白(a lx-Glycoprotein)甲状腺素结合球蛋白(Thyroxin-bindingglobulin)ct-间膜蛋白酶抑制剂(Inter-a-trypsin-1nhibitor)Ge-球蛋白(Gc-globulin)(Ge 1-1)(Ge 2-1)(Ge 2-2)结合珠蛋白(Haptoglobin)(Hp 1-1)(Hp 2-1)(Hp 2-2)血衆铜蓝蛋白(Ceruloplasmin)
乙酰胆碱酯酶(Cholinesterase)a2-脂蛋白(a2-Lipoprotein(s))肌红蛋白(Myoglobin)C-反应蛋白(C-Reactive Protein)a 2-巨球蛋白(a 2-Macroglobulin)Ct2-HS-糖蛋白(a 2-HS_glycoprotein)Zn-a2-糖蛋白(Zn-a 2-glycoprotein)Ct2-神经胺酸糖蛋白(a 2-Neuramino_glycoprotein)促红细胞生成素(Erythropoietin)￠-脂蛋白(0-lipoprotein)转铁蛋白(Transferrin)血液结合素(Hemopexin)纤维蛋白原(Fibrinogen)血纤维蛋白溶酶原(Plasminogen)P2-糖蛋白 I ( P 2-glycoprotein I )P2-糖蛋白II ( & 2-glycoprotein II)免疫球蛋白G(Immunoglobulin G)(IgG)或 Y G-球蛋白(IgG or Y G-globulin)分子式:Y 2k2或Y 2入2免疫球蛋白A(IgA)或 Y A 球蛋白(IgA or Y A-globulin)分子式:(a2ic2)n_(a2ic2)n免疫球蛋白M(IgM)或 Y M 球蛋白(IgM or Y M-globulin)分子式:(u2 K 2)5 或(u 2 入 2) 5免疫球蛋白D(IgD)或 YD 球蛋白(YD) (IgD or Y D-globulin)分子式:( S 2 K 2)或( S 2 入 2)免疫球蛋白E(IgE)或 YE 球蛋白(yE) (IgE or Y E-globulin)分子式:(e2 K 2)或(e 2 入 2)游离的K 和 X 轻链(Free k and A light chains)补体因子:(Complementfactors)
C' ICf IqC1 IrCf IsC' 2C' 3^1Aa 2DC, 4Cr 5
C' 6C' 7C' 8C' 9用本发明的组合物、方法及试剂盒可以检测的重要凝血因子包括下表中列出的例
子:
权利要求
1.一种组合物，其用于亲和分离或亲和分析，且包含未通过固定来稳定的加热变性、血清白蛋白微泡，其特征在于，所述微泡通过去污剂或表面活性剂可溶，且所述微泡以蛋白质、多肽或者肽亲和分子包衣。
2.按权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述蛋白质微泡是通过向蛋白质溶液中导入气体而形成的。
3.按权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述导入包括超声。
4.按权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述导入包括加热所述蛋白质溶液。
5.按权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子选自:受体、蛋白质、多肽或肽配体、和抗体。
6.按权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子为生物素。
7.按权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子为抗生物素蛋白或链亲和素。
8.按权利要求5-7中任一项所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子直接连接到所述蛋白质上。
9.按权利要求8所述的组合物，其特征在干，所述亲和分子通过使用异双功能试剂直接连接到所述蛋白质上。
10.按权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述异双功能试剂为4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺基琥珀酰亚胺酷。
11.按权利要求5-7中任一项所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子间接连接到所述血清白蛋白上。
12.按权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子通过和至少ー种其它分子相互作用而间接连接到所述血清白蛋白上。
13.按权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述血清白蛋白直接连接到链亲和素上，所述亲和分子是生物素化的，其中通过所述链亲和素和生物素的相互作用，将所述亲和分子间接连接到所述血清白蛋白上。
14.一种组合物，其用于亲和分离或亲和分析，且包含玻璃微泡，其特征在于，所述玻璃微泡以亲和分子包衣。
15.按权利要求14所述的组合物，其特征在于，所述玻璃微泡的密度约为0.6g/cc，平均直径约为30iim。
16.按权利要求14所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子选自:受体、配体、核酸、和抗体。
17.按权利要求14所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子为生物素。
18.按权利要求14所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子为抗生物素蛋白或链亲和素。
19.按权利要求16-18中任一项所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子直接连接到所述玻璃微泡上。
20.按权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述玻璃微泡以环氧化物包衣，其所述亲和分子通过所述环氧化物包衣直接连接到玻璃上。
21.按权利要求20所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子通过包括对所述玻璃微泡进行胺官能团包衣的步骤的过程直接连接到玻璃上。
22.按权利要求21所述的组合物，其特征在于，所述包衣步骤包括处理所述玻璃微泡以产生具有反应活性的表面残基，并使所述表面残基与3-氨丙基三こ氧基硅烷反应。
23.按权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述玻璃微泡以顺式-ニ醇包衣，且所述亲和分子通过该顺式-ニ醇包衣直接连接到玻璃上。
24.按权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述的包衣步骤包括: 处理所述玻璃微泡以产生具有反应活性的表面羟基残基； 使所述羟基残基与3-缩水甘油氧基丙基三甲氧基硅烷反应，以产生环氧官能团；和 用酸处理所述环氧官能团，使其转化为顺式-ニ醇官能团。
25.按权利要求23所述的组合物，其特征在干，所述亲和分子通过异双功能试剂直接连接到玻璃上。
26.按权利要求25所述的组合物，其特征在于，所述异双功能试剂为4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺基琥珀酰亚胺酷。
27.按权利要求16-18中任一项所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子通过和至少一种其它分子的相互作用间接连接到所述蛋白质上。
28.按权利要求 12所述的组合物，其特征在于，所述玻璃直接连接到链亲和素上，且所述亲和分子是生物素化的，其中通过所述链亲和素与生物素的相互作用，将所述亲和分子间接连接到所述玻璃微泡上。
29.一种产生用于亲和分离或亲和分析的蛋白质微泡的方法，其特征在于，所述方法包括: (a)加热蛋白质溶液；和 (b)超声该溶液，向其中导入气体，从而产生用于亲和分离或亲和分析的蛋白质微泡。
30.按权利要求29所述的方法，其特征在于，所述气体为空气，所述蛋白质为白蛋白。
31.按权利要求29所述的方法，其特征在于，所述方法进ー步包括了用Cr+++稳定所述蛋白质微泡。
32.一种产生用于亲和分离或亲和分析的亲和修饰的蛋白质微泡的方法，其特征在干，所述方法包括: (a)提供蛋白质，其中所述蛋白质连接于亲和分子； (b)加热蛋白质溶液；和 (C)超声该溶液，向其中导入气体，从而产生亲和修饰的蛋白质微泡。
33.一种产生用于亲和分离或亲和分析的微泡的方法，其特征在于，所述方法包括: 提供微泡；和 对该微泡进行亲和分子包衣。
34.按权利要求33所述的方法，其特征在于，所述微泡为蛋白质微泡。
35.按权利要求33所述的方法，其特征在于，所述微泡为玻璃微泡。
36.按权利要求33所述的方法，其特征在于，所述亲和分子选自:受体、配体、核酸、和抗体。
37.按权利要求33所述的方法，其特征在于，所述亲和分子为生物素。
38.按权利要求33所述的方法，其特征在于，所述亲和分子为抗生物素蛋白或链亲和素。
39.按权利要求33所述的方法，其特征在干，所述包衣步骤包括将所述亲和分子共价结合到所述微泡上的胺官能团上。
40.按权利要求33所述的微泡的制备方法，其特征在于，所述包衣步骤包括将所述亲和分子共价结合到所述微泡上的环氧基团上。
41.按权利要求33所述的方法，其特征在于，所述包衣步骤包括使用异双功能试剂，将所述亲和分子连接到所述微泡上。
42.一种亲和分离或亲和分析样品的方法，其特征在于，所述方法包括: (a)提供亲和分子包衣的微泡的溶液； (b)使所述微泡与样品接触，所述样品在溶液中与所述亲和分子相互作用，从而产生样品包衣的微泡；和 (c)使所述样品包衣的微泡漂浮至液面上，从而将所述样品包衣的微泡与游离的样品和溶液分开。
43.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述微泡为玻璃微泡。
44.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述微泡为蛋白质微泡。
45.按权利要求44所述的方法，其特征在于，所述蛋白质为白蛋白。
46.按权利要求42所述的方法，其 特征在于，所述亲和分子选自:受体、配体、和抗体。
47.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述亲和分子为生物素。
48.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述亲和分子为抗生物素蛋白或链亲和素。
49.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述样品为受体、配体或抗原。
50.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述样品为分析物。
51.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述样品为病毒、细胞或它们的亚组分。
52.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述样品以生物素、抗生物素蛋白或链亲和素修饰。
53.按权利要求42所述的方法，其特征在干，所述方法进ー步包括离心所述微泡和溶液，其中所述样品在重力作用下形成丸状，从而有助于所述样品包衣的微泡与游离样品和溶液的分离。
54.按权利要求42所述的方法，其特征在于，所述方法进ー步向所述样品包衣的微泡施加压カ或真空，从而使所述微泡破裂。
55.按权利要求42所述的方法，其特征在干，所述方法进ー步包括以去污剂处理所述样品包衣的微泡，从而使所述微泡破裂。
56.按权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述亲和分子直接连接到链亲和素修饰上，且所述血清白蛋白是生物素化的，其中通过所述链亲和素与生物素的相互作用，将所述蛋白质亲和分子间接连接到所述血清白蛋白上。
57.按权利要求4所述的组合物，其特征在于，所述导入包括将血清白蛋白溶液加热到73 °C的エ艺温度。
58.一种组合物，其用于亲和分离或亲和分析，且包含空气填充的血清白蛋白微泡，其特征在于，所述微泡以蛋白质亲和分子包衣，所述微泡加热变性，且没有通过固定来稳定。
59.按权利要求58所述的组合物，其特征在于，所述微泡没有通过用醛交联所述血清白蛋白或者用Cr+++处理来固定。
60.按权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述气体是空气。
61.一种产生用于亲和分离或亲和分析的包衣的、空气填充的白蛋白微泡的方法，其特征在于，所述方法包括: (a)加热白蛋白溶液； (b)超声该溶液，向其中导入空气，从而产生没有通过固定来稳定的蛋白质微泡； (C)悬浮所述没有通过固定来稳定的微泡；和 (d)用亲和分子将所述微泡包衣。
62.一种产生用于亲和分离或亲和分析的亲和修饰的蛋白质微泡的方法，其特征在干，所述方法包括: (a)提供蛋白质，其中所述蛋白质连接于亲和分子； (b)加热蛋白质溶液；和 (C)超声该溶液，向其中导入气体空气，从而产生亲和修饰的蛋白质微泡，其中，所述微泡没有通过固定来稳定。
63.一种产生用于亲和分离或亲和分析的包衣的、空气填充的白蛋白微泡的方法，其特征在于，所述方法包括: (a)加热白蛋白溶液； (b)超声该溶液，向其中导入空气，其中，所述微泡没有通过固定来稳定； (C)提供没有通过固定来稳定的微泡；和 (d)用亲和分子将所述微泡包衣。
64.按权利要求61、62或63任一项所述的方法,其特征在于,所述亲和分子选自:受体、配体、核酸和抗体。
65.按权利要求63所述的方法，其特征在于，所述亲和分子为生物素。
66.按权利要求63所述的方法，其特征在于，所述亲和分子为抗生物素蛋白或链亲和素。
67.按权利要求61、62或63任一项所述的方法，其特征在于，所述包衣步骤包括将所述亲和分子共价结合到所述微泡上的胺官能团上。
68.按权利要求63所述的方法，其特征在于，所述包衣步骤包括将所述亲和分子共价结合到所述微泡上的环氧基团上。
69.按权利要求63所述的方法，其特征在于，所述包衣步骤包括使用异双功能试剂，将所述亲和分子连接到所述微泡上。
70.按权利要求69所述的方法，其特征在于，所述方法还包括用异双功能试剂4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺基琥珀酰亚胺酷(s-SMCC)处理微泡，形成s-SMCC微泡。
71.按权利要求70所述的方法，其特征在于，所述方法还包括用S-こ酸硫代こ酸正琥珀酰亚胺酯(SATA)处理亲和分子，并在和s-SMCC微泡反应之前马上除去こ酰基。
72.按权利要求61或63所述的方法，其特征在于，在步骤(c)中的微泡悬浮在聚こ烯醇/磷酸盐缓冲盐水的溶液中。
73.一种减少物质溶液的方法，所述方法包括以下步骤:a.在溶液中提供用亲和分子包衣的蛋白质微泡，所述亲和分子特异性结合所述物质； b.在溶液中使所述微泡和所述物质接触，所述物质和微泡上的亲和分子相互作用，由此形成由所述物质包衣的微泡； c.从溶液中分离由所述物质包衣的微泡，由此减少所述物质的溶液；和 d.通过用去污剂或表面活性剂处理由所述物质包衣的微泡来破坏所述微泡；和 e.检测在溶液中是否残留所述物质。
74.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述亲和分子选自受体、配体、抗体、激素、DNA、RNA、PNA或核苷酸衍生物或类似物；或者所述亲和分子是生物素，或者所述亲和分子是抗生物素蛋白或链亲和素。
75.按权利要求73所述的方法，其特征在于，所述物质是受体、配体或抗原。
76.按权利要求73所述的方法，其特征在于，所述物质用生物素、抗生物素蛋白或链亲和素进行修饰。
77.按权利要求73所述的方法，其特征在干，所述方法还包括:离心所述微泡和溶液，其中所述溶液中物质在重力作用下形成丸状，从而有助于所述样品包衣的微泡与游离样品和溶液的分离。
78.按权利要求73所述的方法，其特征在于，所述物质存在于血液、血清、血浆、脊髄液、滑液、唾液、尿液、精液、修复液(prosthetic fluid)、细胞或组织中。
79.按权利要求73所述的方法，其特征在于，所述微泡是白蛋白微泡。
80.按权利要求73所述的方法，其特征在于，所述物质是细菌。
81.按权利要求80所述的方法，其特征在于，所述方法对所述溶液杀菌。
82.一种亲和浓缩物质的方法，所述方法包括以下步骤: a.在溶液中提供用亲和分子包衣的蛋白质微泡，所述亲和分子特异性结合所述物质； b.在溶液中使所述微泡和所述物质接触，所述物质和微泡上的亲和分子相互作用，由此形成由所述物质包衣的微泡； c.从溶液中分离由所述物质包衣的微泡，由此浓缩所述物质；和 d.通过用去污剂或表面活性剂处理由所述物质包衣的微泡来破坏所述微泡。
83.按权利要求82所述的方法，其特征在于，所述亲和分子选自受体、配体、抗体、激素、DNA、RNA、PNA或核苷酸衍生物或类似物；或者所述亲和分子是生物素，或者所述亲和分子是抗生物素蛋白或链亲和素。
84.按权利要求82所述的方法，其特征在于，所述物质是受体、配体或抗原。
85.按权利要求82所述的方法，其特征在于，所述物质用生物素、抗生物素蛋白或链亲和素进行修饰。
86.按权利要求82所述的方法，其特征在于，所述分析物是病毒或细胞的组分，或者所述分析物是细菌细胞。
全文摘要
本发明涉及用于亲和分离、亲和纯化和亲和分析的基于亲和分子包衣微泡的方法、组合物及试剂盒。具体而言，本发明提供了亲和分子包衣的蛋白质微泡。此外，本发明还提供了亲和分子包衣的玻璃微泡。本发明特别提供了应用本发明微泡对分析物和细胞进行分离的方法。
文档编号G01N33/543GK103091485SQ20121037840
公开日2013年5月8日 申请日期2005年11月3日 优先权日2004年11月3日
发明者T·亚当斯, E·雅布隆斯基 申请人:艾瑞斯国际有限公司