专利名称：一种乌头类中成药的原位质量检测方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种乌头类中成药的原位质量检测方法。
背景技术：
乌头类药物能祛风除湿，温经止痛，用于风湿麻痹，关节疼痛，心腹冷痛，寒疝作痛，麻醉止痛等，被广泛应用于临床治疗中。乌头类中成药是以毛茛科植物川乌、附子、草乌等为原料，通过炮制、配伍而得到的一类中成药。由于该类中成药所含的活性成分乌头碱有一定毒性，临床上中毒反应时有报道。近代药理学研究证明，人口服乌头碱O. 2mg^l. Omg即可引起中毒，口服2mg 3mg或肌肉注射O. 2mg^0. 3mg即可引起死亡。故必须 严格控制乌头类中药的质量与用药剂量，使药物既达到治疗目的，又不致发生中毒。但目前，中药质量检测方法无法满足临床医学对乌头类中成药质量检测的要求。

发明内容
本发明为了解决现有中药质量检测方法无法满足临床医学对中药乌头饮片质量检测要求的问题，而提供了一种乌头类中成药的原位质量检测方法。该方法实现了对中药的原位快速鉴别，保证了质量检测的准确性，进而也保证了中医临床用药的安全性。为了解决上述问题，本发明提供的一种乌头类中成药的原位质量检测方法，其具体的技术方案如下一种乌头类中成药的原位质量检测方法，该方法的步骤和条件如下步骤(I):供试样品的制备，包括以下步骤①至⑤中的任意一个步骤，所述步骤①至⑤分别为步骤①乌头类中成药糖衣片类样品的制备取乌头类中成药糖衣片，去除外层糖衣；步骤②乌头类中成药胶囊类样品的制备取乌头类中成药胶囊内容物，加入0.5-1. 5mL溶剂，震动，离心，离心转数为10000转/分钟至14000转/分钟，离心时间为l_5min ;所述的溶剂为乙腈、甲醇、水或体积比为1:1的甲醇和水；步骤③乌头类中成药丸类样品的制备取乌头类中成药药丸，切成小块；步骤④乌头类中成药液体类样品的制备取液体乌头类中成药；步骤⑤乌头类中成药膏药类样品的制备取乌头类中成药药膏药的药物部分；得到供试样品；步骤(2):供试样品的质谱指纹图谱取步骤(I)中制备的供试样品做质谱分析；质谱实验条件如下正离子电离方式，设定离子源的放电针电压为3-6kV，格栅电压为+250-+400V，调节工作气体压力O.l-o. 8kPa，气体温度为150-500°c ;在正离子模式下，设定毛细管温度150-300°C，毛细管电压10-50V，透镜电压50-150V，扫描范围m/z质荷比为300 lOOODa，在m/z300 1000扫描范围内，存在 m/z 330、m/z 358、m/z408、m/z 454>m/z 556、m/z 572>m/z 586、m/z 590、m/z 604>m/z 616 离子。在上述技术方案中，所述步骤(2)中的工作气体为高纯氮气、高纯氦气或高纯氩气。所述的高纯气体是指利用现代提纯技术能达到的某个等级纯度的气体，例如对于氮，氩，氦而言，通常指纯度等于或高于99. 999%的为高纯气体。在上述技术方案中，所述步骤(2)中的格栅电压为25(T350V。
在上述技术方案中，所述步骤(2)中的气体压力为O. 5^0. SkPa0在上述技术方案中，所述步骤(2)中的气体温度为35(T500°C。本发明提供的乌头类中成药的原位质量检测方法的有益效果(I)本方法对乌头类中成药做质谱分析，根据得到的质谱指纹图谱中的特征指纹峰及其相对强度，对乌头类中成药的质量进行初步评价；(2)本方法整个过程在大气压条件下进行，对样品进行低损耗定性分析且无需复杂样品前处理过程，大大缩短了分析时间，可实现原位、快速、准确且高通量的检测；(3)图1、2、3、4分别为乌头类中成药糖衣片类、乌头类中成药胶囊类、乌头类中成药液体类、乌头类中成药膏药类样品的质谱指纹图谱，可以说明本发明的方法适用于多种药物剂型，并能够对乌头类中成药的质量进行快速、准确的评价，以满足临床医学对乌头类中成药质量检测要求。


图I是一种乌头类中成药糖衣片类供试样品I的质谱指纹图谱；图2是一种乌头类中成药胶囊类供试样品3的质谱指纹图谱；图3是一种乌头类中成药液体类供试样品4的质谱指纹图谱；图4是一种乌头类中成药膏药类供试样品5的质谱指纹图谱。
具体实施例方式实施例I步骤(I):供试样品的制备取风湿安泰片一粒，本品配方为生川乌、生草乌、马钱子(制)、羌活、乌梢蛇、红花、骨碎补(制)、乌梅、金银花、细辛、红参、鹿茸、黄柏、没药、广地龙、地枫皮、老贯草、五加皮、续断、麻黄、甘草、槲寄生、淫羊藿、牛膝、桂枝；小心除去糖衣，露出棕褐色药物部分，得到供试样品I ;步骤(2):供试样品的质谱指纹图谱取步骤(I)中制备的供试样品I做质谱分析；质谱实验条件如下正离子电离方式，设定离子源的放电针电压为3kV，格栅电压为+250V，工作气体为高纯氮气，调节气体压力O. 5kPa，气体温度为350°C;在正离子模式下，设定毛细管温度300°C，毛细管电压50V，透镜电压150V，扫描范围m/z质荷比为300 lOOODa。
图I是一种乌头类中成药糖衣片类供试样品I的质谱指纹图谱。图中，m/z438，m/z454,m/z 556,m/z 574,m/z 590,m/z 604分别代表尼奥灵，附子灵，次乌头碱碎片[M-60]+,苯甲酰次乌头原碱，苯甲酰中乌头原碱，苯甲酰乌头原碱；可以发现多为低毒性的醇胺型或单酯型乌头类生物碱，毒性成分双酯型生物碱含量较低，种类较少。该图说明了本药物中生川乌和生草乌用量较少，基本上观察不到双酯型乌头碱，安全性较高。实施例2步骤(I):供试样品的制备取附子理中丸一粒，本品配方为制附子、党参、炒白术、干姜、甘草、蜂蜜；切成小块，直接用镊子夹取除去糖衣的药片，得到供试样品2 ；步骤(2):供试样品的质谱指纹图谱
取步骤(I)中制备的供试样品2做质谱分析；质谱实验条件如下正离子电离方式，设定离子源的放电针电压为6kV，格栅电压为+250V，工作气体为高纯氦气，调节气体压力O. 8kPa，气体温度为150°C ;在正离子模式下，设定毛细管温度200°C，毛细管电压35V，透镜电压100V，扫描范围m/z质荷比为300 lOOODa，在m/z 300 1000扫描范围内存在m/z 408、m/z 424、m/z 438、m/z 454、m/z 540、m/z 556、m/z 572、m/z 574、m/z 586、m/z590、m/z 604、m/z 616、m/z 632离子。可以发现多为低毒性的醇胺型或单酯型乌头类生物碱，双酯型生物碱含量较低，安全性较高。实施例3步骤(I):供试样品的制备取麝香风湿胶囊一粒，本品配方为制川乌、全蝎、地龙(酒洗)、黑豆(炒)、蜂房(酒洗)、人工麝香、乌梢蛇(去头酒浸)；取胶囊内容物置于I. 5mL离心管中，加入I. 5mL体积比为I: I的甲醇和水，简单震动lmin，然后置于高速离心机中以10000转/分钟至14000转/分钟高速离心l_5min,得到到供试样品3 ；步骤(2):供试样品的质谱指纹图谱取步骤(I)中制备的供试样品3做质谱分析；质谱实验条件如下正离子电离方式，设定离子源的放电针电压为3kV，格栅电压为+400V，工作气体为高纯氩气，调节气体压力O. lkPa，气体温度为500°C;在正离子模式下，设定毛细管温度150°C，毛细管电压30V，透镜电压150V，扫描范围m/z质荷比为300 lOOODa。图2是一种乌头类中成药胶囊类供试样品3的质谱指纹图谱。图中，m/z 438，m/z 454, m/z 486, m/z 500, m/z 556, m/z 574, m/z 590, m/z 632 分别代表尼奥灵，附子灵，中乌头胺，乌头原碱，次乌头碱碎片[M-60]+，苯甲酰次乌头原碱，苯甲酰新乌头碱，中乌头碱。该图说明了本药物中制川乌用量较少，或为充分炮制的制川乌，有毒成分双酯型乌头碱相对含量较低，安全性较高。实施例4步骤(I):供试样品的制备跌打扭伤灵酊，其配方为破天菜、吹风散、五味藤、桂枝、两面针、生草乌、了歌王、九龙川、大风艾、薄荷油、冰片、樟脑；得到供试样品4 ；步骤(2):供试样品的质谱指纹图谱取步骤(I)中制备的供试样品4做质谱分析；质谱实验条件如下正离子电离方式，设定离子源的放电针电压为4kV，格栅电压为+350V，工作气体为高纯氮气，调节气体压力O. 6kPa，气体温度为300°C;在正离子模式下，设定毛细管温度200°C，毛细管电压10V，透镜电压110V，扫描范围m/z质荷比为300 lOOODa。图3是一种乌头类中成药液体类供试样品4的质谱指纹图谱。图中，m/z 438，m/z 454，m/z 556，m/z 572，m/z 586，m/z 590，m/z 604，m/z 616，m/z 632，m/z 646 分别代表，尼奥灵，附子灵，次乌头碱碎片[M-60]+，中乌头碱碎片[M-60]+，乌头碱碎片[M-60]+，苯甲酰中乌头原碱，苯甲酰次乌头原碱，次乌头碱，新乌头碱，乌头碱。该图说明了本品生草乌用量较大，多种双酯型生物碱也可观察到，并且相对含量较高，但是跌打扭伤灵酊为外用药物，安全性高，但禁止内服和应避免伤口使用。实施例5步骤(I):供试样品的制备取骨增生镇痛膏一张，其配方为红花、骨碎补、川芎、猪牙皂、当归尾、生川乌、细辛、生草乌、羌活、白芥子、独活、生天南星、桅子、生半夏、干姜、桉油、姜黄、樟脑、雄黄；将膏药剪成合适的小片，揭开膏药露出药物部分，直接用镊子夹取将药物部分露出，不经过其他·处理，得到到供试样品5;步骤(2):供试样品的质谱指纹图谱取步骤(I)中制备的供试样品5做质谱分析；质谱实验条件如下正离子电离方式，设定离子源的放电针电压为6kV，格栅电压为+250V，工作气体为高纯氩气，调节气体压力O. 5kPa，气体温度为400°C ;在正离子模式下，设定毛细管温度200°C，毛细管电压25V，透镜电压50V，扫描范围m/z质荷比为300 lOOODa。图4是一种乌头类中成药膏药类供试样品5的质谱指纹图谱。图中，m/z 438，m/z 454,m/z 556,m/z 572,m/z 586,m/z 590,m/z 604分别代表尼奥灵，附子灵，次乌头喊碎片[M-60]+，中乌头碱碎片[M-60]+，乌头碱碎片[M-60]+，苯甲酰中乌头原碱，苯甲酰乌头原碱。可以发现多为低毒性的醇胺型或单酯型乌头类生物碱，没有观察到双酯型生物碱。该图说明了本膏药中生川乌用量较少，基本上观察不到有毒成分双酯型乌头碱，安全性较高。
权利要求
1.一种乌头类中成药的原位质量检测方法，其特征在于，该方法的步骤和条件如下 步骤(I):供试样品的制备，包括以下步骤①至⑤中的任意一个步骤，所述步骤①至⑤分别为 步骤①乌头类中成药糖衣片类样品的制备 取乌头类中成药糖衣片，去除外层糖衣； 步骤②乌头类中成药胶囊类样品的制备 取乌头类中成药胶囊内容物，加入O. 5-1. 5mL溶剂，震动，离心， 离心转数为10000转/分钟至14000转/分钟，离心时间为l-5min ;所 述的溶剂为乙腈、甲醇、水或体积比为1:1的甲醇和水； 步骤③乌头类中成药丸类样品的制备 取乌头类中成药药丸，切成小块； 步骤④乌头类中成药液体类样品的制备 取液体乌头类中成药； 步骤⑤乌头类中成药膏药类样品的制备 取乌头类中成药药膏药的药物部分；得到供试样品； 步骤(2):供试样品的质谱指纹图谱 取步骤(I)中制备的供试样品做质谱分析；质谱实验条件如下 正离子电离方式，设定离子源的放电针电压为3-6kV，格栅电压为+250-+400V，调节工作气体压力O. 1-0. 8kPa，气体温度为150-500°C ;在正离子模式下，设定毛细管温度150-300°C，毛细管电压10-50V，透镜电压50-150V，扫描范围m/z质荷比为300 lOOODa，在 m/z300 1000 扫描范围内，存在 m/z 330、m/z 358、m/z 408、m/z 454、m/z 556、m/z572>m/z 586、m/z 590、m/z 604、m/z 616 离子。
2.如权利要求I所述的原位质量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的工作气体为高纯氮气、高纯氦气或高纯氩气。
3.如权利要求I所述的原位质量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的格栅电压为+250 +350V。
4.如权利要求I所述的原位质量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的气体压力为O. 5^0. 8kPa。
5.如权利要求I所述的原位质量检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中的气体温度为350^500 0C ο
全文摘要
本发明提供了一种乌头类中成药的原位质量检测方法。解决现有中药质量检测方法无法满足临床医学对中药乌头饮片质量检测要求的问题。该乌头类中成药的原位质量检测方法，首先采用不同的方法对不同药物剂型的样品进行简单的前处理，对处理好的样品进行质谱分析得到指纹图谱，根据得到的质谱指纹图谱中的特征指纹峰及其相对强度，对乌头类中成药的质量进行初步评价，实现了乌头类中成药的原位快速鉴别，并且该质量检测方法准确、快捷、方便、有效。
文档编号G01N30/06GK102798687SQ20121027712
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月6日 优先权日2012年8月6日
发明者宋凤瑞, 朱洪彬, 刘舒, 郑重, 刘志强, 刘淑莹 申请人:中国科学院长春应用化学研究所