专利名称：血管紧张素转换酶活力测定方法及试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属生物化学检测领域，特别是一种血管紧张素转换酶活力测定方法及试剂盒。
血管紧张素转换酶(ACE)是肾素—血管紧张素系统的关键酶、催化血管紧张素II的生成。ACE的活性与体内血管紧张素II的水平成正比，因此，测定ACE的活力可以了解血管紧张素II的水平，监测血管紧张素抑制剂(ACEI)的治疗效果。1985年至今，国外Buttery等对ACE的活性自动化测定方法进行了广泛地研究，其中较简便、灵敏的方法已被Slgma发展为商品试剂盒。在这个方法中，人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸(FAPGG)经ACE水解造成340nm吸光度下降，通过检测340nm吸光度变化度量ACE的活性。
然而，Slgma商品试剂盒的灵敏度较低，不能满足临床诊断的需要。这也是在此以前ACE测定未被广泛应用于临床的原因。国内关于ACE测定方面的研究尚是空白。
本发明的目的在于提供一种血管紧张素转换酶(ACE)活力测定方法及试剂盒。
本发明采用如下所述的技术解决方案血管紧张素转换酶(ACE)活力测定方法首先把人工合成底物FAPGG经ACE水解生成的FAP与显色染料反应得到一黄色化合物；然后再测得所述的黄色化合物在400-410nm处的吸光度增加率ΔA，最后根据公式
计算出血管紧张素转换酶(ACE)活力。
式中 TV—反应总体积SV—样本体积ε—黄色化合物摩尔吸光系数d—光径(cm)血管紧张素转换酶(ACE)活力测定试剂盒所述试剂盒由显色染料、FAPGG，Boric acid、Cholic acid组成，其中显色染料1mmol/L，FAPGG≥1.5mmol/L，Boric acid 80mmol/L，Cholic acid 8mmol/L。
本发明的优点在于1、由于使用了显色染料，使测定波长由340nm移到400-410nm；2、FAPGG的浓度大于或等于1.5mmol/L；3、测定方法为动力法；4、不测定底物(FAPGG)的减少，而是测定产物(黄色化合物)的增多，避免了分析仪器对底物浓度的限制(Slgma的方法中，FAPGG浓度必须小于1.5mmol/L)，使底物浓度充分提高，反应速度得以接近最大反应速度。因而极度大地提高了试验的灵敏度(Slgma的灵敏度为0.01A/U.L，本发明的灵敏度为0.1A/U.L)，拓宽了反应线性范围(Slgma的线性反应范围为150U/L，本发明的线性反应范围为300U/L)；5、简便易行、易于推广。
下面结合实施例对本发明做进一步描述实施例一血管紧张素转换酶(ACE)活力测定试剂盒由显色染料(1-[2-chloroethyl]benzyl-4-oitroallide)、FAPGG、Boric acid、cholic acid组成，其中，显色染料2mmol/L，FAPGG 1.6mmol/L，Boric acid 85mmol/L，Cbolic acid 9mmol/L。
血管紧张素转换酶(ACE)活力测定方法首先把人工合成底物FAPGG经ACE水解生成的FAP与前述的显色染料反应得到黄色化合物(FAP-benzyl-4-nitroallide)，然后再测得所述黄色化合物在408nm处的吸光度增加率ΔA，再根据公式
计算出血管紧张素转换酶(ACE)活力。(公式中TV为反应总体积，SV为样本体积，ε为黄色化合物摩尔吸光系数，d为光径(cm))。
权利要求
1.一种血管紧张素转换酶活力测定方法，其特征在于先把人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸经血管紧张素转换酶水解生成的n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酸与显色染料反应得到一黄色化合物，再测得所述的黄色化合物在400-410nm处的吸光度增加率ΔA，再根据公式ACE(U/L)=ΔA×TV×106SV×ϵ×d]]>计算出血管紧张素转换酶活力。其中TV——反应总体积SV——样本体积ε——黄色化合物摩尔吸光系数d——光径(cm)
2.一种血管紧张素转换酶活力测定试剂盒，其特征在于所述的试剂盒由显色染料、人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸、硼酸、胆酸组成，其中显色染料1-5mmol/L，人工合成底物n-(3-(2-呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸≥1.5mmol/L，硼酸80-100mmol/L，胆酸8-16mmol/L。
全文摘要
本发明涉及一种血管紧张素转换酶活力测定方法及试剂盒。其测定方法是先把人工合成底物n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸经血管紧张素转换酶水解生成的n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酸与显色染料反应得到一黄色化合物,再测得所述的黄色化合物在400—410nm处的吸光度增加率,再根据公式计算出血管紧张素转换酶活力。试剂盒由显色染料、人工合成底物n－(3－(2－呋喃基)丙烯酰)苯丙氨酰甘氨酰甘氨酸、硼酸、胆酸组成。本发明简便易行、易于推广、灵敏度高。
文档编号G01N21/25GK1258004SQ9812172
公开日2000年6月28日 申请日期1998年12月21日 优先权日1998年12月21日
发明者王太重 申请人:王太重