专利名称：：利用低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶a2测脑中风的制作方法利用低密度fl旨蜜白连接的碟紫酯麻A^，脑中风本发明涉及利用测量的水平来预测脑中风的发病率。脑中风是脑血管损伤引起的一种疾病，但是却可以转变为危险因素，进而发展为更严重的脑中风。，通常伴随着动脉粥样硬化和高血压。脑中风是仅次于心脏疾病和癌症的第三大致死病因，但是其致残率却位居第一。脑中风可以分为两类缺血性脑中风和出血性脑中风。此外，病人可以经历短暂的脑缺血缺血性的脑中风的发生经常很突然，并且在24-48小时病情恶化。在病情恶化的过程中，中风导致的症状包括单恻的神经功能失调。出血性的脑中风是由于脑出血或者蛛网膜下腔出血造成的，这构成了出血性脑中风的两种亚型。脑出血通常是由于慢性高血压和动脉粥样硬化引起的。出血性脑中风的发病也非常突然，伴随着头疼，恶心，呕吐，惊厥和意识丧失。及时的诊断和治疗脑中风是非常关键的。迄今为止，在临床上应用的药物只有组织融酶原激活剂(tPA)b由于组织融酶原激活剂必须在脑中风发病3小时之内应用，以及它所引起的直接的神经毒性和出血倾向，所以只有少于5%的脑中风患者应用组织融酶原激活剂来治疗脑中风。但是目前还没有任何一种检测方法来预测脑中风的发生，因而也极大的延迟了脑中风的治疗。所以发现一种快速，灵敏和特异的检测方法来预测脑中风将会极大地坩加得到及时预防和治疗的患者的数目，减少脑中风引起的危書。尽管研究发现低密度脂蛋白和脑中风的发病有密切的关系，但是有许多低密度脂蛋白正常的患者仍然发生脑中风。这表明了还有其他的一些因素和脑中风的发生紧密相关。其中致炎因子和动脉粥样硬化有关联，而动脉粥样硬化是脑中风的发病机理之一，因而利用致炎因子来预测脑中风也得到了极大的关注。研究表明低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2是一种非常重要的致炎因子并且和脑中风的发病紧密相关。低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2是一个50kD的钙离子非依赖性活性酶，属于磷酸酯酶A2家族。低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2主要由巨噬细胞表达，在动脉粥样硬化斑块的表达堦高。低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2主要和低密度脂蛋白链接连接，并且和低密度脂蛋白一起纯化。位于动脉管壁内皮细胞间的低密度脂蛋白的氧化是动脉粥样硬化形成的关键步骤。和低密度脂蛋白不同，氧化性的低密度脂蛋白是一种促炎和动脉粥样硬化形成的主要因子，它可以最终导致动脉粥样硬化斑块的形成。基础研究表明动脉粥样硬化是一种炎症反映，不仅仅是一种脂类在血管壁的简单的堆积。动脉粥样硬化损伤的最早的表现是由充满脂类的巨噬细斷泡沫细胞)的堆积。随后引起的炎症反应进一步刺激了平滑肌细胞和单核细胞的迁移和增生，造成了中度损伤。随着巨噬细胞和平滑肌细胞的集聚形成了由细胞碎片，脂肪，胆固醇，钙盐，胶原和糖蛋白组成的纤维化斑块。逐渐增生的损伤斑块最终延伸到血管腔内，进而阻塞了血液流动。进一步的动脉粥样硬化的发展可以导致斑块的破裂和随后的血栓的形成，引起脑中风或心肌梗塞。低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2可以通过水解氧化性低密度脂蛋白的sn-2脂肪酸形成磷脂胆碱和氧化自由脂肪酸。这两种氧化磷脂产物通过吸引单核细胞和形成泡沫细胞对动脉粥样硬化的形成起到了至关重要的作用。低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2已经被报道为一种脑中风的危险因子。血浆中的低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的水平在一个大型的临床试验中被证明和脑中风的发病率密切相关。用低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2来预测脑中风和其他的一些治病因子例如低密度脂蛋白没有关联o下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实例1在临床实验中，16000名45-64岁的个体参与了实验研究。15792名个体实际参加了实验。在实验开始时，每一个参与者都接受了广泛的临床检査。随后所有的参与者每3年都利用电话和临床访问进行追踪。在第二次临床访问的时候再进行一次全面的体检。第二次临床访问时获得的血样用于低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的测定。实例2实验方法利用的血浆中的低密度脂蛋白连接的自酯酶a2阜克^r坑ftr架测定血浆中的低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的水平。实验样品先用稀释液稀释然后在2-8。C孵育60分钟。被稀释的样品然后和固定的单克隆抗体在2-8°C反应90分钟。接下来冲洗掉没有结合的抗原。然后加入和辣根过氧化物酶链接的单克隆抗体反映60分钟。反应体系用蒸馏水冲洗掉没有结合的抗体。随后加入辣根过氧化物酶的反应底物TMB反应20分钟。最后利用1N的盐酸终止反应。利用分光光度计在450NM来测定辣根过氧化物酶转化底物的能力，以此来反应样品中的低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2含量。实例3统计分析方法在第二次临床回访时出现任何脑中风症状的患者被纳入统计。利用三个Cox回归模型来分析低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2和脑中风的相关性。在第一个模型中低密度脂蛋白连接的磷酸酷酶A2被单独纳入分析。在第二个模型中年齡，性别和人种进行了调整。在第三个模型中其他的一些可能的标志物包括C反应蛋白进行了调整。利用Cox模型来得到危险系数。实例4结果4.1脑中风人群的低密度脂蛋白连接的碟酸職酶A2水平高于正常人群。结果如表一所示。平均值脑中风人群非脑中风人群Lp-PLA2(pg/L)4433744.2低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2是脑中风的危险因素。并且可以独立的预测脑中风的发病几率。结果如表二所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>权利要求1.通过患者的低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的水平来预测患者发生脑中风的几率。2.按照权利要求1的方法，低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的水平和患者的脑中风的发病几率相关。3.按照权利要求l的方法，根据低密度脂蛋白连接的磷酸酯酵A2的水平将患者区分为低，中，高度脑中风危险人群。4.按照权利要求1的方法，测量低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的水平包括测量测量低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的总量和活性。5.按照权利要求2的方法，低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2是从和神经损伤，高血压调控，凝血和出血控制，炎症和凋亡相关的标志物独立分离的。6.按照权利要求l的方法，测量样品来自人体全血，血浆和血清。7.按照权利要求1的方法，患者人群包括糖尿病病人，高血脂病人，高血压病人，吸烟者，代谢疾病病人，肥胖病人，厌食病人和体制虚弱病人。8.按照权利要求l的方法，利用酶连反应来检测低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的水平。9.利用测量低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的水平的试剂盒来诊断脑中风的易患性。10.通过抑制低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2的活性预防和治疗脑中风。全文摘要本发明提供了一种预测脑中风的方法。该方法包括了利用低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A2(Lp-PLA₂)作为特异的脑中风标志物来预测脑中风的发病几率。通过测量低密度脂蛋白连接的磷酸酯酶A₂的血液水平发现脑中风的高危患者。文档编号G01N33/50GK101338336SQ200710165328公开日2009年1月7日申请日期2007年10月29日优先权日2007年10月29日发明者栋刘申请人:栋刘