专利名称：一种尿微量白蛋白液体定量检测试剂及方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，涉及ー种尿微量白蛋白(Urinary Microalbumin)液体定量检测试剂和方法。
背景技术：
尿液是由某些血液成分经过肾小球滤过作用，肾小管重吸收、集合、排泌形成的。临床尿液检查可以直接帮助医生了解病患的泌尿生理功能和病理功能的变化，也可以间接反映全身多脏器及系统的功能情況。国内外临床尿检验非常普遍，许多与肾功能，心血管，代谢病，感染病等有关领域的检验需要用尿液进行。常规的尿检验包括以下10项葡萄糖(GLU)，胆红素(BIL)，尿胆原(URO)，酮体(KET)，白细胞(LEC)，亚硝酸盐(NIT)，蛋白质、(PRO)，酸碱度(pH)，潜血(BLD)和比重(SG)。蛋白尿(Proteinuria)指的是尿液中含有非正常高浓度蛋白质的病症，尿蛋白主要为白蛋白，同时也包含ー些球蛋白和肾元分泌的蛋白质。在正常情况下，大多数蛋白质是不能通过肾小球的滤过作用而进入尿液的，但是在肾脏功能受到损坏的情况下，ー些蛋白质会进入尿液，形成蛋白尿。对蛋白尿病人的尿蛋白(Urine Protein)和尿微量白蛋白(Urine Microalbumin)进行定量分析，能够让医生知道病人是属于微量白蛋白尿症(Microalbuminuria)还是大量白蛋白尿症(Macroalbuminuria)。正常人尿中微量白蛋白浓度〈2 mg/dL，微量白蛋白尿是肾病的早期症兆，是反映全身微循环的重要组成部分，是肾小球毛细血管通透性的指标，其特征是尿白蛋白的浓度为2-20 mg/dL ;大量白蛋白尿症的白蛋白浓度〉20 mg/dL，且病情严重，经常是高血压或者糖尿病引起。国内目前应用的尿检验技术主要是干化学试纸定性检验系统，只能提供定性分析结果如阴性或阳性，不能定量。同时，干化学试纸法受影响因素也较多，临床工作中不可避免地会出现假阴性和假阳性。此夕卜，干化学试纸条受到灵敏度的限制，大于20 mg/dL才呈现阳性，而此时肾脏病变已经不可逆。为了对肾病进行早期预测，为临床医生提供准确的诊断信息，进行尿微量白蛋白定量检验具有重要的意义。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是弥补现有的干化学试剂系统存在的缺陷，提供ー种尿微量白蛋白液体定量检测试剂及方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是ー种试剂由Rl试剂和R2试剂组成，Rl试剂由以下方法制备往烧杯中加入2-10 g氯化钠、1-10 g磷酸氢ニ钠、0. 1-2.0g磷酸ニ氢钾、0. 1-10 g叠氮化钠、10-100 g聚こニ醇，用IL蒸馏水搅拌至固体化学物完全溶解，形成Rl试剂；
R2试剂优选由以下方法制备
a、用IL磷酸盐缓冲液溶解0.1-2. Og叠氮化钠，搅拌至完全溶解后，形成中间溶液；
b、加入与中间溶液体积比为1:20-1:100的抗人白蛋白抗体，形成均一性的R2试剂。
本发明所述的Rl试剂由以下方法制备往烧杯中加入4 g氯化钠、5.5 g磷酸氢ニ钠、I. O g磷酸ニ氢钾、5g叠氮化钠、10 g聚こニ醇，用IL蒸馏水搅拌至固体化学物完全溶解，形成Rl试剂；
R2试剂优选由以下方法制备
a、用IL磷酸盐缓冲液溶解O.5g叠氮化钠，搅拌至完全溶解后，形成中间溶液；
b、加入与中间溶液体积比为1:50的抗人白蛋白抗体，形成均一性的R2试剂。本发明所述的任意一种试剂的尿微量白蛋白液体定量检测方法，其特征在于包含以下步骤
a、把所述尿微量白蛋白液体定量检测试剂的Rl试剂和R2试剂，分装后分别放入自动化分析仪的Rl和R2试剂仓，然后进行尿微量白蛋白检测项目的參数设置；样品体积2 —10ml，Rl试剂50 — 200ml, R2试剂10 — 100ml，校准类型:5AB，波长:340nm，检测方法 終点法，测光点0 - 30 ；
b、设定5个标准品浓度，分别为0mg/dL、lmg/dL、5mg/dL、10mg/dL、30mg/dL,测定不同浓度标准品的吸光值，制作浓度对吸光值的标准曲线；
C、根据标准曲线进行试剂检测灵敏度分析；
d、根据标准曲线进行样品的精密度和回收率试验；
e、根据标准曲线进行常用药物的干扰分析试验。本发明所述的尿微量白蛋白液体定量检测方法，灵敏度达到O. 16 mg/dL。本发明所述的尿微量白蛋白液体定量检测方法，检测尿液样本中的白蛋白，不受常用药物干扰。本发明所述的自动化分析仪为Hitachi7180、01ympus5400或迈瑞BS-800。本发明所述的自动化分析仪优选为01ympus5400。本发明同现有技术相比具有以下优点及效果该液体定量检测试剂及方法是利用免疫反应原理，采用液体试剂系统，借助自动化分析仪对尿液中的微量白蛋白进行定量检测的方法，同时具有定量、准确、快速和操作简便的优点。可以准确定量測定尿液中微量白蛋白的含量，检测灵敏度达到O. 16 mg/dL，与常见药物无任何交叉反应，可以为临床医生提供准确可靠的诊断信息。


图I为01ympus5400自动化分析仪测定尿微量白蛋白的标准曲线。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进ー步的详细说明，以下发明是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。实施例I :ー种尿微量白蛋白液体定量检验试剂的制备步骤
a、往烧杯中加入如下化学品4g氯化钠、5. 5g磷酸氢ニ钠、I. Og磷酸ニ氢钾、5g叠氮化钠、10 g聚こニ醇，IL蒸懼水,搅拌至固体化学物完全溶解,形成Rl试剂；
b、用IL PBS缓冲液溶解O. 5g叠氮化钠，搅拌至完全溶解后，形成中间溶液；
C、加入与中间溶液体积比为1:50的抗人白蛋白抗体，形成均一性的R2试剂。
其它实施例2 — 13 :其它实施例的制备步骤与实施例I相同，区别仅在于配比，故将其它实施例的配比列表如下
权利要求
1.一种尿微量白蛋白液体定量检测试剂，其特征在于由Rl试剂和R2试剂组成，Rl试剂由以下方法制备往烧杯中加入2-10 g氯化钠、1-10 g磷酸氢二钠、O. 1-2.0 g磷酸二氢钾、O. 1-10 g叠氮化钠、10-100 g聚乙二醇,用IL蒸懼水搅拌至固体化学物完全溶解,形成Rl试剂； R2试剂由以下方法制备 a、用IL磷酸盐缓冲液溶解O.1-2. Og叠氮化钠，搅拌至完全溶解后，形成中间溶液； b、加入与中间溶液体积比为1:20-1:100的抗人白蛋白抗体，形成均一性的R2试剂。
2.根据权利要求I所述的尿微量白蛋白液体定量检测试剂，其特征在于Rl试剂由以下方法制备往烧杯中加入4 g氯化钠、5. 5 g磷酸氢二钠、I. O g磷酸二氢钾、5g叠氮化钠、.10 g聚乙二醇，用IL蒸馏水搅拌至固体化学物完全溶解，形成Rl试剂； R2试剂由以下方法制备 a、用IL磷酸盐缓冲液溶解O.5g叠氮化钠，搅拌至完全溶解后，形成中间溶液； b、加入与中间溶液体积比为1:50的抗人白蛋白抗体，形成均一性的R2试剂。
3.一种用权利要求1、2中所述的任意一种试剂的尿微量白蛋白液体定量检测方法，其特征在于包含以下步骤 a、把所述尿微量白蛋白液体定量检测试剂的Rl试剂和R2试剂，分装后分别放入自动化分析仪的Rl和R2试剂仓，然后进行尿微量白蛋白检测项目的参数设置；样品体积2 -.10ml, Rl试剂50 — 200ml, R2试剂10 — 100ml，校准类型:5AB，波长340 nm，检测方法终点法，测光点0 - 30 ； b、设定5 个标准品浓度,分别为 O mg/dL、l mg/dL、5 mg/dL、10 mg/dL、30 mg/dL,测定不同浓度标准品的吸光值，制作浓度对吸光值的标准曲线； C、根据标准曲线进行试剂检测灵敏度分析； d、根据标准曲线进行样品的精密度和回收率试验； e、根据标准曲线进行常见药物的干扰分析试验。
4.根据权利要求3所述的尿微量白蛋白液体定量检测方法，其特征在于灵敏度达到.O.16 mg/dL。
5.根据权利要求3所述的尿微量白蛋白液体定量检测试剂，其特征在于检测尿液样本中的白蛋白，不受常用药物干扰。
6.根据权利要求3所述的尿微量白蛋白液体定量检测试剂，其特征在于所述的自动化分析仪为 Hitachi7180、01ympus5400 或迈瑞 BS — 800。
7.根据权利要求I所述的尿微量白蛋白液体定量检测试剂，其特征在于所述的自动化分析仪为01ympus5400。
全文摘要
本发明公开了一种尿微量白蛋白的液体定量检测试剂及方法，由R1试剂和R2试剂组成，R1试剂由蒸馏水溶解一定量的氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、叠氮化钠、聚乙二醇得到；R2试剂由磷酸盐缓冲液溶解一定量的叠氮化钠后加入一定量的抗人白蛋白抗体得到。利用自主研发的尿微量白蛋白液体检测试剂结合自动化分析仪系统，能够准确定量尿样本中微量白蛋白的含量，给临床医生提供准确的信息，为实现定量、自动化、快速检测尿液样本提供了可能。
文档编号G01N33/68GK102680700SQ20121012800
公开日2012年9月19日 申请日期2012年4月27日 优先权日2012年4月27日
发明者孟雷, 田军, 蔡江丽, 虞留明 申请人:嘉兴九七九生物技术有限公司