专利名称：一种利用线虫鉴定地沟油的方法
技术领域：
本发明涉及一种鉴定地沟油的方法。
背景技术：
地沟油，泛指在生活中存在的各类劣质油，如回收的食用油、反复使用的炸油，以及通过过滤、加热、沉淀、分离等方法对城市下水道里的垃圾加工而成的“食用油”。“地沟油”是一种质量极差、极不卫生的非食用油。一旦食用“地沟油”，它会破坏人们的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的严重后果。地沟油回流到餐桌的现象在中国普遍存在并在近年被广泛关注，而鉴定地沟油成为难题。目前国内尚未有检测地沟油的统一标准。 单凭人的感官，地沟油的色、香、味与普通食用油几乎没有分别。即便是能探明底细的仪器也常常难以辨别真假。见诸报道的地沟油检测方法都存在一定盲区，准确率也有待提高，尚不足以对地沟油进行充分有效的鉴定。一般地沟油中含有胆固醇类物质，而植物油中没用这类具有动物油属性的成分；即使地沟油经过数级精炼，胆固醇也会痕量存在。常规的通过胆固醇检测鉴定地沟油的方法，具有操作复杂、仪器依赖度大、成本较高的不足，而且常规胆固醇检测方法5mg/ g(10% )检出限较高，无法针对特异成分痕量低的高精炼地沟油进行检测。

发明内容
本发明目的是为了解决常规的通过胆固醇检测鉴定地沟油的方法，具有操作复杂、仪器依赖度大、成本较高的不足，而且无法针对特异成分痕量低的高精炼地沟油进行检测的问题，而提供一种利用线虫鉴定地沟油的方法。利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至50 60°C，然后在无菌环境下加入I IOml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8 12h后接入5 10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退， 则待检测食用油不是地沟油；若2处内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。本发明通过对线虫生长观测和行为观察，借助胆固醇这样关键因子对地沟油进行判断。胆固醇是线虫的关键生长因子，在缺乏胆固醇的线虫培养基中，线虫发育明显滞后和不足；地沟油中普遍含有胆固醇，在无胆固醇成分的培养基中添加微量地沟油，线虫生长状况与含有胆固醇成分的培养基中生长的线虫毫无差别。将疑似地沟油添加入无胆固醇成分的线虫培养基中，如果此培养基上生长的线虫生长良好、行为正常，与正常培养基生长的线虫无差别，便可确定此类食用油为地沟油。
本发明与传统的利用分析仪器鉴定地沟油的方法相比，弥补了常规胆固醇检测方法5mg/g(10%)检出限较高的不足，对特异成分痕量低的高精炼地沟油可以有效鉴定。利用线虫生长和行为指标，可以直观高效的甄别食用油的质量优劣。此外，本检测方法对实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器和检测设备，实验操作方便，灵敏度高，准确度好， 成本低廉，易于培训和掌握。


图I为实施例中幼虫长至成虫时间，以幼虫生长产卵小时数计的柱状图；图2为实施例中线虫头摆率的柱状图。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至50 60°C，然后在无菌环境下加入I IOml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8 12h后接入5 10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退， 则待检测食用油不是地沟油；若2处内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。本实施方式步骤一中待检测食用油为疑似地沟油的食用油。本实施方式中24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，是指幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫，以头摆率为指标表征其活动状况良好。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中磷酸盐缓冲液的配置将13. 6g的KH2PO4和I. 8g的Κ0Η,加蒸馏水定容至IOOmL,调节pH值为6. 0，获得磷酸盐缓冲液。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是步骤一中再降温至 55°C，然后在无菌环境下加入2ml的待检测食用油。其它步骤及参数与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三之一不同的是步骤二中培养皿中的培养基凝固8h后接入8只线虫幼虫进行观察。其它步骤及参数与具体实施方式
一至三之一相同。实施例利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至55°C，然后在无菌环境下加入Iml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培
养皿；二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。本实施例步骤一中待检测食用油为疑似地沟油的食用油。本实施例中24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，是指幼虫在24h内开始产卵(图I)，即发育为健康正常的成虫，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。对照组正常培养基上生长的线虫，即幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫， 以头摆率为指标表征其活动状况良好；正常培养基将17g的琼脂粉、2. 5g的蛋白胨、O. Ilg 的CaCl2、0. 12g的MgSO4,3g的NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌20min，再降温至55°C，然后在无菌环境下加入Iml胆固醇溶液，获得正常培养基；其中胆固醇溶液的浓度为10mg/ml。可见，实施例中生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；实施例中的待检测食用油含有胆固醇成分，可鉴定为劣质地沟油。实验佐证I :一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min,再降温至55°C，然后在无菌环境下加入Iml胆固醇溶液和IOml动物油，获得培养基， 再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图I)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。可见，实验佐证I的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明添加动物油对线虫的生长和活动没有影响。实验佐证2 一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min,再降温至55°C，然后在无菌环境下加入Iml胆固醇溶液和IOml植物油，获得培养基， 再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图I)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。可见，实验佐证2的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明添加植物油对线虫的生长和活动没有影响。实验佐证3 一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min,再降温至55°C，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，线虫在无胆固醇培养基中生长缓慢，36h后开始产卵(图I)，成虫明显体弱瘦小，头摆率显著降低(图2)。可见，实验佐证3中线虫活动能力减弱，运动行为衰退；不添加胆固醇(或地沟油)，线虫生长缓慢；表明作为线虫关键生长因子的胆固醇缺失，使线虫发育受阻，生长减慢，活动能力降低。实验佐证4 一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、0· 12g 的 MgSO4,3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至55°C，然后在无菌环境下加入Iml动物油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图I)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。可见，实验佐证4的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明在无胆固醇成分的线虫培养基中，添加含有胆固醇成分的动物油，弥补了培养基中胆固醇的缺失，使得线虫的生长和活动得以正常。实验佐证5 一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至55°C，然后在无菌环境下加入5ml动物油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图I)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。可见，实验佐证5的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明在无胆固醇成分的线虫培养基中，添加含有胆固醇成分的动物油，弥补了培养基中胆固醇的缺失，使得线虫的生长和活动得以正常。实验佐证6 一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至55°C，然后在无菌环境下加入IOml动物油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8h后接入10只线虫幼虫进行观察，幼虫在24h内开始产卵，即发育为健康正常的成虫(图I)，以头摆率为指标表征其活动状况良好(图2)。可见，实验佐证6的培养基上生长的线虫与正常培养基上生长的线虫无差别；表明在无胆固醇成分的线虫培养基中，添加含有胆固醇成分的动物油，弥补了培养基中胆固醇的缺失，使得线虫的生长和活动得以正常。实验佐证7 一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl 和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至55°C，然后在无菌环境下加入IOml植物油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固12h后接入5只线虫幼虫进行观察，线虫在无胆固醇培养基中生长缓慢，36h后开始产卵(图I)，成虫明显体弱瘦小，头摆率显著降低(图2)。可见，实验佐证7中线虫活动能力减弱，运动行为衰退；表明仅添加植物油，此培养基中无胆固醇成为，线虫生长缓慢，活动能力降低。实验佐证8 一、将 17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgSO4'3g 的 NaCl和25mL磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌 20min，再降温至55°C，然后在无菌环境下加入Iml植物油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固12h后接入5只线虫幼虫进行观察，线虫在无胆固醇培养基中生长缓慢，36h后开始产卵(图I)，成虫明显体弱瘦小，头摆率显著降低(图2)。可见，实验佐证8中线虫活动能力减弱，运动行为衰退；表明仅添加植物油，此培养基中无胆固醇成为，线虫生长缓慢，活动能力降低。
权利要求
1.一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于利用线虫鉴定地沟油的方法按以下步骤实现一、将17g 的琼脂粉、2. 5g 的蛋白胨、O. Ilg 的 CaCl2、O. 12g 的 MgS04、3g 的 NaCl 和 25mL 磷酸盐缓冲液，加蒸馏水定容至1000ml，然后放入高压蒸汽灭菌锅中于120°C灭菌20min， 再降温至50 60°C，然后在无菌环境下加入I IOml的待检测食用油，获得培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固8 12h后接入5 10只线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成利用线虫鉴定地沟油。
2.根据权利要求I所述的一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于步骤一中磷酸盐缓冲液的配置将13. 6g的KH2PO4和I. 8g的Κ0Η，加蒸馏水定容至IOOmL,调节pH值为 6.0，获得磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求I或2所述的一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于步骤一中再降温至55°C，然后在无菌环境下加入2ml的待检测食用油。
4.根据权利要求3所述的一种利用线虫鉴定地沟油的方法，其特征在于步骤二中培养皿中的培养基凝固8h后接入8只线虫幼虫进行观察。
全文摘要
一种利用线虫鉴定地沟油的方法，它涉及一种鉴定地沟油的方法。它解决了常规的通过胆固醇检测鉴定地沟油的方法，具有操作复杂、仪器依赖度大、成本较高的不足，而且无法针对特异成分痕量低的高精炼地沟油进行检测的问题。方法一、制备培养基，再倒入培养皿；二、培养皿中的培养基凝固后接入线虫幼虫进行观察，若幼虫生长缓慢，超过36h后才能发育为成虫且成虫体型明显瘦小，活动能力减弱，运动行为衰退，则待检测食用油不是地沟油；若24h内可发育为成虫且生长和活动状况良好，则待检测食用油是地沟油，即完成。本发明对特异成分痕量低的高精炼地沟油可以有效鉴定。本发明实验条件要求低，不需要特殊的高精分析仪器，操作方便，成本低廉。
文档编号G01N33/03GK102608281SQ20121005157
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月1日 优先权日2012年3月1日
发明者徐镜波, 李铸衡, 王云彪 申请人:中国科学院东北地理与农业生态研究所