专利名称：一种新型的ana、抗dna联合检测法的制作方法
技术领域：
本发明涉及到一种实验室的免疫检测技术，具体地说，也就是涉及到一种医学疾病诊断方法的检测。
系统性红斑狼疮(SLE)是侵犯皮肤、关节、肾脏、肝脏、心脏等多器官的自身免疫性疾病，患者血清中存在有多种自身抗体，其中主要有抗核抗体(ANA)和抗双链的脱氧核糖核酸抗体(ds-DNA)。血清中ANA阳性率高达0.80-0.96%，但其他风湿性性疾病如皮肌炎、硬皮病、结缔组织周围炎等ANA亦可阳性。因此为了鉴别这些疾病，寻找一种特异性高又灵敏、快速的检测方法，本发明用锥虫和肝细胞配合后组成双抗原底物，可同时检出ANA和抗DNA抗体。
经联机检索美国专利近40年及世界专利近10年无此检测方法，近期首都医院徐世正等“测定双链DNA抗体新方法”一文，其主要方法为用感染锥虫的小鼠剪其尾部滴血直接制片，制成的血片虫体堆积，血细胞极少或没有有核细胞，此片只能做抗DNA单一染色，无法做ANA染色。
本发明的任务在于为克服现有技术的不足，并能同时在一张玻片上、一个视野里发现两种抗体的存在为目的而实现的。
本发明通过以下几个途径完成(一)锥虫的形态及结构锥虫是一种单细胞原生动物，能寄生于许多动物体内，如牛、羊、马、狗、兔、鼠均可被感染而患锥虫病。锥虫的虫体呈纺锤状、梭形、柳叶形等，伊氏锥虫体长15.6-31.3μ左右、宽1.5-2.5μ，瑞士染色镜下可见紫红色的体核和动基体，浅红色的波动膜和鞭毛。
(二)双抗原底物的制备取锥虫数条用无菌生理盐水混和腹腔接种小白鼠，防蚊、防蝇喂养3-7天，待小鼠发病至睡眠状态后，尾部取血作锥虫计数，锥虫达5-107/mm2时用肝素抗凝，小白鼠临死前1-1.5小时作眼球后取血，再将死鼠解剖取出肝脏，用肝脏的切面沾上含有锥虫的血液在洁净玻片上轻轻压印一下，制成一层薄的具有肝细胞和锥虫的双抗原底物。室温凉干后，用玻璃纸包好置于5--40℃最佳4--30℃内保存备用。
(三)检测方法取患者血清。用间接免疫荧光法(同ANA法)、FITC最大吸收光谱520-530nm，每例标本做原配血清1∶10、1∶20、1∶40、1∶80五个滴度，将上述血清分别加于五个含有锥虫和肝细胞的印片上，经染色后镜检有翠绿色荧光者为阳性，锥虫的体核和动基体发出一大一小亮绿色荧光为双链DNA抗体阳性，肝细胞亮绿色为抗核抗体阳性，无绿色荧光者为阴性。
本发明的特殊功能在于一种检测手段可得出两种检策效果，患红斑狼疮的病人能够很快明确诊断，得到及时治疗;使用本方法省时、省力、节约试剂，减轻病人经济负担。
权利要求
1.一种新型的ANA、抗DNA联合检测法，其特征在于利用感染锥虫的实验动物肝脏切面沾上含有锥虫的血液在洁净玻片上轻轻压印一下，制成具有肝细胞和锥虫的双抗原底物，置5-40℃最佳温度为4-30℃保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种新型的ANA、抗DNA联合检测法，其特征在于实验动物以小白鼠为最好，并在小白鼠感染锥虫后临死前1-1.5小时取其肝脏切片。
3.根据权利要求1、2所述的一种新型的ANA、抗DNA联合检测法，其特征在于取临终前小白鼠的眼球血粘在肝切面上，再印在玻片上。
全文摘要
本发明所涉及的是医学免疫的一种新型的ANA、抗DNA联合检测法。主要用于红斑狼疮特异性检查。本方法主要是将感染锥虫的小白鼠眼球血与其肝脏切面混合后印在玻片上制成双抗原底物，取病人血清滴在底物上经荧光染色在电镜下检测ANA及抗DNA。本方法提高了对红斑狼疮病的诊断率，同时省时、省力、节约试剂，减轻了病人的经济负担。
文档编号G01N33/53GK1059033SQ9110574
公开日1992年2月26日 申请日期1991年8月15日 优先权日1991年8月15日
发明者肖丽文, 冯柏庄, 高静雯 申请人:中山医科大学附属第一医院