专利名称：早期确定前列腺癌治疗后复发的方法
技术领域：
本发明涉及用于检测治疗后前列腺疾病早期复发的组合物和方法。
背景技术：
在世界范围内，每年有大约670,000例前列腺癌的新病例。英国前列腺癌发病 率的统计数据参见 http://info.cancerresearchuk.org/cancerstats/types/prostate/incidence/ (2009年1月23日最后一次访问)。在欧洲，2004年诊断了 237,800个新病例，并且其中 的 85,200 人死于前列腺癌。Boyle，P et al.Annalsof Oncology 16 481-488 (2005)。除了 如癌症家族史、吸烟状况、年龄和种族的临床风险因素之外，前列腺癌的初始检测一般 是基于被称为前列腺特异性抗原(PSA)(由正常的、良性的和恶性的前列腺上皮细胞产生 的中性丝氨酸蛋白酶)的蛋白质的循环浓度的提高这一发现。由前列腺细胞产生的PSA 以游离或复合物形式存在于精液、血清、血浆和尿液中，并且可在这些液体中被测量。 游离和复合物形式的同时测量被称为“总PSA”测量，并且被称为“tPSA”或“PSA” 也是正确的。在各种前列腺疾病(尤其是前列腺癌)中，血液中的PSA浓度升高，并 且这种浓度升高反映在PSA的血清测量中。Valsanen et al.，Prostate Cancer and Prostatic Disease 2 91-97(1999)。因此，在过去的二十年里，如血清PSA的常规免疫测定之类 的检测方法已被用于前列腺癌的初期检测。Yuetal.，J.Urologyl57 913-918(1997)。一般来说，如果观察到患者体内的血清PSA浓度升高，就进行前列腺活组织检 查以证实癌的存在并表征癌的病理学特征。一旦证实是前列腺癌，大约三分之二的患者 会通过前列腺根治术(RP，通过外科手术完全切除前列腺)或通过各种方法的放疗、激 素治疗或化疗来进行治疗。但是，这些接受治疗的患者中多达40%可能会发生病情复 发。参见Moul，J.Urology 163 1632-1642(2000)。前列腺癌的复发与存活率的预后不 良有关。但是，如果在早期阶段检测到复发，预后就能够得到改善，从而可以开始进行 包括抢救性治疗(salvage therapy)的合适的处理方法。遗憾的是，用于评价复发可能性 的现有方法不足以进行早期检测。在RP之前或在RP时进行的临床病理观察，如癌症分 期、Gleason评分、诊断时的年龄、手术切缘瘤累(margin involvement)(在手术切缘上存 在癌)、癌对局部组织的浸润、癌对前列腺包膜的浸润、癌对精囊的浸润、癌对膀胱颈的 浸润、癌对淋巴结的浸润、以及肿瘤总体积在估计疾病复发的可能性上能够提供一些的 信息，但并不一定具有预测性，而且也不能被用于确定复发的确切时间。活组织检查或 各种类型的成像方法能够用于证实疾病复发，但是这些方法的缺点是灵敏性差。一般来 说，到了活组织检查或成像研究检测到新肿瘤时，复发已经处于预后极度不良的后期。 因此，这些方法不足以用于早期检测和基于这些方法进行有力治疗。为了解决基于临床病理学发现和活组织检查或成像研究不足以确定疾病复发的 问题，现在判断疾病复发主要是基于治疗后患者体内的血清PSA浓度升高这一发现。 例如，在无残留的前列腺根治术之后，仍残留有分泌PSA的前列腺组织并且生理学上 清除手术前PSA水平的充足时间已经过去了，PSA的血清浓度跌至最低。如果血清PSA浓度在最低点之后开始升高，则可表示疾病复发。这种类型的复发被称为“生化 复发”(BCR)，因为该复发只反映了 PSA循环水平的升高，而不是新发现局部或远处肿 瘤。PSA的生化复发已成为在如RP的治疗之后的前列腺癌的医学处置的现行检测标准。已公布了各种阈值从而确立认为发生了生化复发的点。Cookson MS，et al.J Urology 177 540-545(2007)。通常，在 PSA 最低点之后的 200pg/mL (0.2ng/ml)的值被 用于确定生化复发点。同样，常规的PSA检测具有功能灵敏度可能更高的范围为IOOpg/ ml的检测限。使用检测限为lOOpg/mL的常规PSA检测对生化复发的平均检测时间为超 过 38.4 个月。Vassilikos et al.，ClinicalBiochemistry 33 (2) 115-123 (2000)。

发明内容
本发明可用于根据临床观察和PSA值和本发明的PSA指标，监测接受前列腺疾 病治疗的患者、和检测前列腺癌、以及治疗后或在决定不进行前列腺切除术后治疗后的 癌症复发或病情稳定。通过提供对于PSA的检出限(limitofdetection)和功能灵敏度超过 常规检测的新型检测，本发明对于确定前列腺癌生化复发具有超越常规血清PSA检测的 优势。因此，本发明可用于监测接受前列腺疾病治疗的患者和检测在如RP的基本治疗后 相对于病情稳定(未复发)的癌症复发。本文所描述的方法还可用于，例如检测前列腺癌的早期复发或在前列腺癌的前 列腺根治术之后早期确定患者情况稳定。本发明的检出限和功能灵敏度的提高能够提早 检测到复发，并且在合适的情况下，能够提早开始对复发癌症进行抢救性治疗。前列腺癌的治疗可以是前列腺根治术、放射疗法、化学疗法或抗雄激素治疗。 稳定病情的早期检测能够避免对切缘和Gleasan分评分不良的相对较年轻患者实时辅助治 疗，否则如果未检测到病情稳定则会对这些患者进行治疗。另一方面，可对使用本发明 的方法检测到早期复发的患者进行早期治疗。因此，能够检测低水平PSA的能力使得减 少对某些因为具有高复发风险而目前正在进行治疗的患者的治疗，因为现在已知由于他 们的PSA水平低因此他们不具有BR。BR的这种早期检测还可以导致早期治疗。Nilsson et.al.，ActaOncologica Vol.43，No.4, pp 316-381, 2004。在一种实施方式中，可在治疗之后监测患者体内的总PSA(tPSA或PSA)水平浓 度，通过从治疗后的患者获得一个或多个样本并通过使用检测限至少低至lpg/mL和功能 灵敏度低于10pg/mL的PSA检测来确定每一样本中的PSA量。在另一种实施方式中，使 用检测限和功能灵敏度低于lpg/mL的PSA检测通过确定PSA值是否超过其对应的PSA 指标临界值(cutoff)来确定治疗后患者的前列腺癌的复发。在一种更优选的实施方式中， PSA检测具有的检测限至少低至0.2pg/mL，功能灵敏度等于或低于0.5pg/mL。本发明的方法中使用的PSA检测的检测限和功能灵敏度的改进能够进行早期生 化再度恶化或复发的检测。当癌细胞较少并且这样的细胞对治疗更敏感时，这种早期生 化复发的检测将会实现早期的抢救性治疗。抢救性治疗可以包括局部放射疗法，并且可 以通过与并发的雄激素阻断(concurrent androgen deprivation) —起进行或不与其一起进 行。例如，已显示当用于治疗PSA倍增时间少于6个月(当发生血清PSA浓度倍增的时 间，为天或月或年)的男性时，使用标准的常规检测确定的生化复发之后的两年内提供 治疗时，抢救性放射疗法具有良好的效果。Track etal.，ASCO 2008 UrogenitaryCancersSymposium, Abstract No.85。此外，早期生化复发的检测可消除对病情稳定的患者进行 进一步昂贵的治疗的需要，或避免了对这些患者的不必要的辅助和抢救性治疗的需要。在本发明的另外一种实施方式中，使用功能灵敏度至少小于lpg/mL的PSA检 测来检测前列腺癌治疗之后的早期复发。基于PSA测量的指标被用于检测早期生化复 发。这些指标包括监测过程中观察到的最高PSA水平、最低PSA水平、最低PSA水 平的倍数、最高PSA观察水平与最低PSA水平的比值、或倍增数目。还可以使用PSA 速率指标，如Ln[PSA]相对(vs.)时间的PSA升高斜坡的速度、第二连续升高(pg/mL/ 月)和倍增时间。可以单独或组合使用任意这些指标来确定患者是否具有早期生化复发 (ES-BCR)或病情稳定。在一个方面，本发明中提出的PSA检测被用于确定患者是否具有前列腺癌复发 的早期风险，即，检测早期生化复发(ES-BCR)，或患者是否更可能表现为病情稳定的 特征，即，检测病情稳定。例如，如果所观察到的最高[PSA]等于或超过[PSA]指标， 则确定为患者具有ES-BCR，如果所观察到的最高[PSA]低于[PSA]指标，则确定为患者 病情稳定。作为另一个实施例，PSA检测能够被用于测量获自接受了前列腺癌的前列腺根 除术的患者的系列样本中的PSA浓度水平。该测量可被用于确定PSA速率值。从而能 够通过确定PSA升高值的速率是否等于或超过PSA升高指标的速率来确定患者是否具 有ES-BCR或病情稳定。如果PSA升高的速率等于或超过速率指标，则确定患者具有 ES-BCR,如果PSA升高的速率低于阈值，则确定患者的病情稳定。当PSA速率指标为 倍增时间时，当倍增时间值至少低至倍增时间指标时倍增时间值等于或超过倍增时间指 标，即，低倍增时间比高倍增时间与更为不良的预后相关。在另外一个方面，基于一个或多个PSA指标的其他分析可将患者分为其他的亚 类型，从而使临床医生调整治疗以适合该亚类型，并在比目前临床操作更早期地进行这 些治疗。早期开始抢救性治疗能够改善患者的治疗效果。本文中通过参考附图和实施例更充分地描述本发明，附图和实施例要与发明内 容部分具体实施方式
部分和具体讨论或公开的任意优选的和/或特定的实施方式一起 阅读。但是，可以多种不同的形式来表现本发明，不应理解为限于本文列出的实施方 式；而是这些实施方式仅是以举例说明的方式提供，从而本文所披露的内容是完整的、 充分的，并将本发明的完整范围充分地传达给所属领域的技术人员。


图1示出了本发明的一种实施方式的结果，特别示出了 11号复发患者的具有指 数拟合的核酸检测免疫分析NADIA [PSA] (PSA浓度)pg/mL相对前列腺根除术后的 天数的曲线图。NADIA 检测[PSA]是具体实施方式
部分中描述的NADIA 检测研 究确定的[PSA]。图2示出了 31号复发患者的NADIA [PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数 的曲线图。图3示出了 38号复发患者的NADIA [PSA]pg/mL相对前列腺根除术后天数 的曲线图。
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图4示出了病情稳定的86号患者的NADIA [PSA]pg/mL相对前列腺根除术 后天数的曲线图。图5示出了病情稳定的120号患者的NADIA [PSA]pg/mL相对前列腺根除术 后天数的曲线图。图6示出了病情稳定的126号患者的NADIA [PSA]pg/mL相对前列腺根除术
后天数的曲线图。图7示出了图示的所有43位复发患者的pg/mL相对前列腺根除术后天数的曲线 图。图8示出了 43位复发患者的PSA水平范围限制于1000pg/ml的[PSA]pg/ml相
对前列腺切除术后时间的叠加图。图9示出了前列腺切除术后第一总[PSA]相对患者亚群(前列腺癌复发⑴或病 情稳定(0))的曲线图。图10示出了最低总[PSA]相对患者亚群(前列腺癌复发⑴或病情稳定(0))的 曲线图。图11示出了所观察到的最高[PSA]水平(pg/mL)相对患者亚群(前列腺癌复发 (1)或病情稳定(0))的曲线图。图12示出了最高[PSA]水平/最低[PSA]水平相对患者亚群(前列腺癌复发⑴ 或病情稳定(0))的曲线图。图13示出了 [PSA]水平的第二连续上升(pg/mL/月)相对患者亚群(前列腺癌 复发(1)或病情稳定(0))的曲线图。图14示出了倍增时间数据(天)相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳定 (0))的曲线图。图15A-图15C示出了倍增时间分别< 150天、150-400天、或> 400天的复发
患者的叠加图。图15A示出了倍增时间< 150天的复发患者的范围限制于1000pg/mL的[PSA] pg/ml相对手术后天数的叠加图。图15B示出了倍增时间为150-400天的复发患者的范围限制于1000pg/mL的 [PSA]pg/ml相对手术后天数的叠加图。图15C示出了倍增时间> 400天的复发患者的范围限制于1000pg/mL的[PSA] pg/ml相对手术后天数的叠加图。图16A-图16D分别示出了以倍增时间分类的复发患者亚类的叠加图，范围限制 于lOOOpg/mL。倍增时间> 400天的复发患者被进一步细分为所观察到的最高PSA是否 超过或低于200pg/mL。图16A示出了倍增时间< 150天的复发患者的[PSA]pg/ml相对手术后天数的叠 加图。图16B示出了倍增时间为150-400天的复发患者的[PSA]pg/ml相对手术后天数 的叠加图。图16C示出了倍增时间> 400天的复发患者的[PSA] > 200pg/mL相对手术后天
数的叠加图。
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图16D示出了复发患者的[PSA]pg/mL相对手术后天数的叠加图。图17示出了 [PSA]pg/mL相对手术后天数的叠加图，几乎无例外，病情稳定的 患者的最高PSA通常不超过15pg/mL。图18示出了显示监测过程中的倍增数目数据相对患者亚群(前列腺癌复发(1) 或病情稳定(0))的马赛克图。图19示出了显示连续倍增数目数据相对患者亚群(前列腺癌复发(1)或病情稳 定(0))的马赛克图。图20A和图20B示出了多变量ROC曲线与NADIA 所观察到的最高[PSA]水
平的单变量ROC曲线对比。图20A示出了多变量ROC曲线。图20B示出了NADIA 所观察到的最高[PSA]水平的单变量ROC曲线(黑线)相对多变量ROC曲线(虚线)。图21A和图21B示出了多变量ROC曲线与NADIA 最高总[PSA]/最低 [PSA]水平的单变量ROC曲线的对比。图21A示出了多变量ROC曲线。图21B示出了 NADIA 最高总[PSA]/最低[PSA]水平的单变量ROC曲线(黑线)相对多变量ROC 曲线(虚线)。图22A和图22B示出了多变量ROC曲线与[PSA]第二升高(pg/mL/月)的单 变量ROC曲线的对比。图22B示出了多变量ROC曲线。图22A示出了 [PSA] (pg/mL/ month)的第二升高的单变量ROC曲线(黑线)对多变量曲线(虚线)。表22示出了逻 辑回归和ROC计算的结果。图23A-图23C示出了最高总[PSA]、第二升高(pg/mL/月)指标和最高总 [PSA]/最低总[PSA]的单变量分析。图24示出了对于病情稳定的患者经过大约8年时间的[PSA]水平(pg/mL)相对 时间(月)的线性拟合曲线。图25示出了对于复发患者经过大约5年时间的[PSA]水平(pg/mL)相对时间 (月)的线性拟合曲线。
具体实施例方式根据本发明，使用检测限至少低至lpg/mL且功能灵敏度低于10pg/mL的总血 清PSA检测(总血清PSA是同时测量血清中的游离的和复合物形式的PSA)来监测前列 腺癌治疗之后的患者，并且其能够被用于检测治疗后相对于术后病情稳定的早期生化复发。但是，当使用常规的PSA检测时，即使对作为前列腺癌复发指标的生化复发的 应用也是有限制的。当使用常规检测来测量PSA时，前列腺根除术之后的血清PSA的最 低值经常低于检出限。参见 unkeretal.，Anticancer Research 19 2625-2658 (1999)。因 此，当循环中并不是确实不存在PSA时，常规检测得到的RP后的血清PSA值会显示为 零纳克 / 毫升(ng/ml)。参见 Stamey，Clin.Chem.42 (6) 849-852。即使 PSA 值高于常 规检测的检测限，但浓度也会低于该检测的“功能灵敏度”(以精确性和准确性定量低水 平血清PSA浓度的能力)。这表示血清PSA的真实最低浓度不能通过常规检测来检测或 精确且准确地得到。这是令人遗憾的，因为最低浓度本身可以是复发的预报信号，较低 的最低浓度与较低的复发风险相关。此外，当PSA水平开始升高时，这不能被常规检测检测到，直到复发到了预后再次成为不良的阶段才能被常规检测检测到。侵袭性癌可能会复发地更快，但是由于其检出限和功能灵敏度不够，常规检测 不能检测到这些复发。甚至非侵袭性癌也开始显示出常规检测不可检测的血清PSA升 高。因此，常规的血清PSA检测不能辅助医生早期检测前列腺癌复发。目前FDA批准的大多数常规PSA检测测量低至约lOOpg/mL，在美国泌尿外科 协会前列腺癌指导小组(American UrologicalAssociation Prostate Cancer Guideline Panel)近 期推荐的生化复发的定义中反映了该检出限(大于0.2ng/mL(200pg/mL)的[PSA]，大于 0.2ng/mL 的 PSA第二确认水平)。参见 Cookson，etal.，J.Urologyl77 540-545(2007)。 由于功能灵敏度的限制，常规PSA检测显示在具有低于该检测的功能灵敏度的[PSA]的 样本中不存在 PSA0 例如 Stamey (1996) ； Vassilikos et al.，Clinical Biochemistry 33 (2) 115-123(2000)。对于治疗后早期复发的检测，了解治疗后样本中的PSA是否在检测的功能灵敏 度内在临床上是很重要的。否则，临床医生和患者就不知道阴性结果是反映了 “不存 在” PSA还是尽管存在产生PSA的细胞但检测具有检出限。在本发明的方法中，具有如本文所述的低的功能灵敏度限制的检测已被用于测 量女性血清样本中低至0.2-0.5pg/mL范围的PSA水平。检测的0.5pg/mL功能灵敏度能够 确定女性血清中的PSA水平是在0.5pg/mL至3pg/mL的范围内，而不是通常认为的零。 预期在前列腺根除术之后，男性具有的PSA水平至少等于在女性中发现的水平。因此， 功能灵敏度低至0.5pg/mL的检测能够测量接受前列腺根除术后的男性中的可预期的最低 PSA水平。使用功能灵敏度低于0.5pg/mL的PSA检测测量PSA水平能够准确测量治疗后 前列腺癌患者体内的低PSA水平。使用NucleicAcid Detection Immunoassay (核酸检测免
疫测定MNADIA 测试)的[PSA]测量显示，在前列腺根除术后，许多患者具有稳定 的低PSA水平，这表明这些患者的癌生长非常缓慢或已被治愈。对于血清PSA水平随时 间升高的患者，PSA水平是精确的。患者PSA血清水平的精确性足以确定PSA升高的 斜率，并产生PSA水平先前低于目前检测的功能灵敏度的样本的可重复数据。测量PSA 水平是指测量总PSA或tPSA的水平。使用更灵敏的PSA检测确定了在RP后的最低点之后PSA水平的指数升高。 NADIA PSA检测结果显示，在[PSA]水平达到200pg/mL之前，癌细胞存在并且指 数生长很长时间。数据组的回顾性分析结果显示，在血清水平达到目前的生化复发点 200pg/mL之前，前列腺癌细胞存在并且生长了相当长的时间。在本发明的一个方面，具有至少低至0.5pg/mL的功能灵敏度和/或0.2pg/mL的 检测限的PSA检测被用于确定早期前列腺癌的复发。它还降低了检测早期复发所需的时 间，达到例如比常规检测提前30个月。使用这些PSA检测，在0.5至lOOpg/mL范围内 PSA的准确测量能够识别早期生化复发并比基于目前的临床操作更早开始治疗。提早检测到需要进行早期复发前列腺癌的抢救性治疗减少了开始对患者实施持 续治疗所需的时间，目前这样的治疗通常只在PSA水平超过200pg/mL之后才进行。如 本文所述，使用功能灵敏度为0.5pg/mL的PSA检测来监测患者可使对进一步治疗的评价 比使用目前的生化复发测量提前了多达30个月。当细胞可能还是更局部化和/或对治疗
14敏感时，这将有助于提供提前治疗。在一个方面，本发明的方法能够更早地和更精确地识别具有病情恶化的风险的 男性和早期治疗失败的患者。本发明的方法还可用于较早地确定患者未复发。由此，通 过可以更早地将患者分为病情稳定或具有早期生化复发，使用更灵敏的PSA检测降低了 系统成本和患者的焦虑。在某些方面，本发明的高度灵敏的、早期检测方法能够用于评价前列腺根除术 之后的治疗选择。在某些实施方式中，本发明可用于检测患者的病情是否稳定、是否应 该监测和多长时间一次监测患者的复发、是否和什么时候进行抢救性治疗(如抗雄激素 治疗、放射疗法和化学疗法)。前列腺切除术后的治疗主要是根据临床观察确定的，如Gleasan评分、诊断时的 年龄、手术切缘、肿瘤分期(T-stage)、组织浸润、包膜浸润、精囊浸润、膀胱颈浸润、 淋巴结浸润和肿瘤体积。对复发具有预测性的临床参数包括高Gleasan评分、使用目前检 测方法检测到的高PSA(以目前的检测方法测量的高于200ng/mL)、pT3病、阳性手术切 缘和精囊浸润。参见Nilsson，第346页。较高比例的前列腺癌患者未通过RP被治愈，并且27%-53%会在十年内显示出 [PSA]升高。Nilsson et al.， "A systematic overview ofradiation therapy effects in prostate cancer, ” Acta Oncologica，43(4) 316-381(2004)。但是，30%至 70% 目前在进行辅
助治疗的患者不会复发。因此，只根据如年龄、Gleasan评分和手术切缘的临床观察来对 前列腺切除术之后的患者进行辅助治疗会使很大一部分病情稳定的患者遭受不必要的昂 贵治疗和可能的并发症。作为一个实例，可对表现出不良临床征兆的患者进行辅助治疗。这些患者包括 具有不良切缘和Gleason评分的较年轻的患者。例如，具有不良切缘和Gleason评分> 7 的五十岁年龄段的患者通常会接受如外部放射治疗(RT)的治疗。对pT3病程的患者以外 部束放射治疗进行前列腺切除术后治疗可延长无生化疾病生存期，当提早实施治疗时， 未经RP治愈的患者实现病情稳定的可能性要高于延迟抢救性治疗。参见Nilsson et al., at 316。但是，本发明的高灵敏检测以及[PSA]值和指标的应用可以单独使用或与临床 观察组合使用，以提供稳定病情的早期检测，从而能够避免目前进行的不必要的辅助治 疗。例如，相对年轻患者的病情稳定的早期检测(否则会进行治疗)可避免对不必要的治 疗的需要和随之而来的副作用的风险。前列腺切除术后治疗的副作用包括失禁、尿频、 夜尿、膀胱炎、腹泻、直肠出血、性欲降低和/或阳痿。因此，在某些方面，使用本发 明的检测方法在早期检测病情稳定可避免在目前根据临床观察常规进行辅助治疗的患者 中实施不必要的辅助治疗。另外，直到使用常规方法得到的[PSA]达到200pg/mL的延 迟实施抢救性治疗降低了实现病情稳定的可能性。参见Nilsson，345。因此，在某些方面，本发明的PSA值和PSA指标可与临床观察结果组合使用从 而确定是否进行辅助和/或抢救性治疗。例如，如果通常根据临床观察对患者进行辅助 和/或抢救性治疗，但是多个PSA值之一未超过PSA指标，则检测到病情稳定，可以避 免进行不必要的治疗。详细描述了可用于这些方法的PSA值和指标。例如，当[PSA]低 于15pg/mL且Ln[PSA]对时间的斜率低于Ln[PSA]对时间的斜率指标时，则即使相对较
15年轻的患者具有不良的切缘并且Gleasan评分>7，也可以避免进行辅助治疗，并监测患 者直到一个或多个[PSA]值超过[PSA]指标。在其他方面，当本发明的方法和临床观察结果组合使用来检测早期复发时，可 对具有ES-BCR的患者进行提前治疗，从而提高预后。可根据本领域技术人员已知的方 法和治疗方案进行放射疗法和化学疗法。可使用本领域技术人员已知的药物或生物药物 组合物、组合、剂型和剂量进行抗雄激素治疗以用于治疗前列腺切除术后患者的辅助或 抢救性治疗。本发明的一个实施例是功能灵敏度为约0.5pg/mL且检测限为0.2pg/mL的PSA 检测，使用聚合酶链式反应(PCR)产生信号的夹心免疫测定。在下文中描述了在本 发明的方法中用于检测血清或血浆样本中的PSA的这样的检测的实例。在美国专利第 5,665,539号中描述了蛋白质的免疫PCR形式的检测，其全部内容通过引用结合于本文作 为参考。至少低至规定的PSA检测的任意功能灵敏度可用于本发明的方法。检测蛋白 质和蛋白质检测中信号生成的方法对于本领域的人员而言是已知的。例如，本发明的方 法可使用能够提供用于本发明的方法所需的功能灵敏度的检测方式(包括夹心免疫测定) 并产生信号的任何其他方法。例如，产生信号的方法可包括脱氧核糖核酸(DNA)芯片、 生物发光、放射性、化学荧光、纳米颗粒或寡核苷酸-纳米颗粒，可以单独使用或组合 使用。此外，如下文更详细的讨论的，如倍增时间和/或所观察到的最大PSA浓度的 PSA值可用于进一步将早期复发患者分为多个组。这些分类可能可被用于对不同亚群的 患者推荐不同的治疗方法。因此，使用本发明能够为临床医生和患者提供对治疗失败或 早期生化复发的精确指示，并能够更及时和更适当地选择治疗方法以控制病情。此外， 作为早期检测结果的提前治疗可改善患者的治疗结果，并避免使病情稳定的患者接受更 昂贵的治疗。在一种实施方式中，本发明包括一种检测患者是否具有早期生化复发 (ES-BCR，early stage biochemical recurrence)的方法，包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本；b)使用功能灵敏度至少低至20pg/mL的PSA检测测量样本的PSA水平，C)使用一个或多个样本的PSA水平来确定PSA值，其中如果一个或多个样本的 PSA值超过PSA指标，则检测到了 ES-BCR。PSA检测可用于确定从前列腺癌治疗之后的患者获得的样本中的PSA水平。 PSA水平可包括样本中的PSA量或浓度。该样本可以为血浆或血清样本。PSA水平测 量可用于监测和评价前列腺癌治疗是否使该病症得到了有效治疗。优选地，PSA检测具 有的功能灵敏度至少低至0.5pg/mL，检测限低至0.2pg/mL。“PSA值”是一种参数，它是观察到的PSA水平的函数。PSA值可以包括， 例如，PSA最低水平之后测量的观察到的PSA水平、观察到的PSA水平或所观察到的最 大PSA水平与最低PSA水平的比值，Ln[PSA]相对时间的斜率、PSA水平升高的速率、 PSA水平的倍增时间、或PSA水平的第二连续升高。所观察的PSA水平可以为浓度或量。“PSA指标”是预定的边界值、阈值或数目，其以统计显著性来区分病情稳定
16的患者和具有或将具有生化复发和/或疾病复发的患者的亚群。当使用功能灵敏度至少低至lpg/mL的PSA检测获得的PSA值超过对应的PSA 指标时，就检测到“早期生化复发(early stagebiochemical recurrence) ”。可单独或组合
使用该值和对应的指标来确定患者是否具有ES-BCR或病情稳定。可以使用生物化学方法来确定疾病复发，或根据临床观察如成像或活组织检查 来确定，尽管这些方法具有对复发灵敏度较差的缺点。使用本发明的方法获得的一个或 多个PSA值和PSA指标还可与临床观察结果组合来协助或确定患者的治疗选择。例如， 使用本发明的方法检测ES-BCR可导致进一步的治疗，这些治疗包括放射疗法、化学疗 法或抗雄激素治疗。在某些实例中，如果[PSA]值早期快速升高和/或早期测量的PSA 速率超过了 PSA速率指标，则可以许可进行进一步的治疗。作为另外一个实例，根据其 他的包括临床观察结果的患者参数，早期不是那么快的[PSA]速率升高会导致或不会导 致进一步的治疗。临床观察结果可包括Gleasan评分、诊断时的年龄、切缘、肿瘤分期 (T-stage)、组织浸润、包膜浸润、精囊浸润、膀胱颈浸润、淋巴结浸润、活组织检查或 肿瘤体积。在某些实施方式中，支持进一步治疗的参数包括小于年龄边界值(agecutoff) 的年龄、超过Gleasan评分边界值的Gleasan评分、使用本发明方法的高PSA、阳性切缘 和精囊浸润。年龄边界值可以为，例如50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或 60、65、70、75 或 80。Gleason 评分边界值可以为，例如 4、5、6、7、8、9、10。作为另外一个实例，如果还存在未复发的临床观察指征，如低Gleasan评分、或 高龄(如超过70或80岁)，则[PSA]速率值的缓慢升高可能不会导致进一步治疗。此 外，如果本发明的方法检测到病情稳定，则不进行进一步的治疗。在未进行进一步治疗 的情况下，理想的是继续使用本发明的方法监测一个或多个PSA值，单独使用或与临床 观察结果组合使用从而确定在后期是否要进行进一步治疗。PSA指标可以是所观察到的最大PSA水平的预定边界值或阈值、最低PSA水 平的倍数(multiplier)、最大观察PSA水平、最低PSA水平、Ln [P SA]相对(vs.)时间的 斜率、PSA升高的速率或PSA的倍增时间。倍增时间是(Ln (2)/K)，其中K是PSA水 平对时间的曲线图的指数拟合的斜率。在倍增时间的情况下，当倍增时间值小于或等于 PSA指标时，PSA值“超过” PSA指标。使用如本文描述的标准统计学方法确定PSA 指标。例如，PSA水平指标可以为至少约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、 21、 22、 23、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29、 30、 35、 40、 45、 50、 55、 60pg/mL 的[PSA]指标。更优选地，PSA水平指标为至少约15pg/mL、20pg/mL或25pg/mL的 [PSA]指标。还可以规定PSA水平指标的范围。[PSA]指标范围可以为，例如15-25pg/ mL、15-22pg/mL或20_25pg/mL。可单独使用PSA或与其他的PSA指标或临床指标组 合使用从而确定患者病情稳定或具有ES-BCR。"PSA最低点”表示从例如接受前列腺根除术治疗后的患者获得的样本测量的 最低PSA量。PSA最低点是由于通过治疗去除或杀死增生的前列腺组织造成的PSA清 除。PSA的半衰期为2.2天至3.5天，并且将其从血管清除需要耗费3至4周或达6-8周 的时间。Ellis etal.，Adult Urology, 50(4)，573-579，(1997)。在例如前列腺根除术治 疗后，在去除或杀死增生前列腺细胞的治疗之后的血清PSA水平降至最低点。在病情稳 定的患者中，PSA水平会在降至最低点后保持平稳。样本可以是一系列血清样本以用来测量其PSA水平。一系列的血清样本是从接受了例如前列腺根除术或抢救性治疗的治疗 后的同一患者在不同的时间点获得的两个或多个样本。治疗是指前列腺疾病的医疗处置中的一种或多种治疗。前列腺疾病的治疗优选 是前列腺癌的治疗。前列腺癌的治疗优选是前列腺根除术。前列腺癌的治疗还可包括放 射疗法，其包括抢救性放射疗法、以及激素疗法或化学疗法。总PSA检测优选具有至少低至10pg/mL的检测限和至少低至20pg/mL的功能灵 敏度。PSA检测优选具有至少低至15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、 2、1、0.9、0.8、0.7、0.6或0.5pg/mL的功能灵敏度。PSA检测优选具有低至0.2pg/mL 的检测限和/或约0.5pg/mL的功能灵敏度。可替代地，在本文中，检测限是指功能检测 限或检出限。检出限(limit of detection, LOD)设定为5%的I型或II型误差率检测的样 本中的分析物的最低量。在某些实施方式中，检出限可以为至少低至15、14、13、12、11、10、9、8、 7、6、5、4、3、2、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5 或 0.2pg/mL。PSA 检测也可具有低至 0.5pg/mL的检测限，而功能灵敏度低至1、2、3、4或5pg/mL。在某些实施方式中， PSA检测可具有0.2pg/mL的功能检测限和0.5pg/mL的功能灵敏度，并且还包含使样本 与包含非核酸PSA结合体和能够用于产生PCR信号的核酸标记的结合物接触。近年来，对于生化复发的最普遍定义是[PSA]超过0.2ng/mL(200pg/mL)，然 而使用的是 100pg/mL 至 2000pg/mL 的水平范围。Doherty et al.，J.Cancer 83 (11) 1432-1436 (2000)。用功能灵敏度至少低至1.0pg/mL的PSA检测来确定早期生化复发是 否发生是可能的。早期生化复发的检测在使用常规PSA检测确定的生化复发检测之前进 行。在本发明的一个方面，可通过比较所观察到的最大PSA水平与PSA水平指标来 检测基于PSA水平的ES-BCR。PSA水平为10pg/mL至60pg/mL之间的至少任意水平， 优选 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、29、30、35、40、45、50、55 或 60pg/mL，更优选 10、15、20、25 或 30pg/mL 的 PSA水平可用作PSA指标来确定ES-BCR。例如，如果所观察到的最大PSA水平指标 是15pg/mL，则将超过15pg/mL的所观察到的最大PSA水平与PSA指标进行比较来检测 ES-BCR。在另外一个方面，可利用所观察到的最大PSA与最低PSA之比作为PSA指标来 确定是否发生ES-BCR。例如，所观察到的最大PSA/最低PSA可以为3至11之间的 任意值，优选3、4、5、6、7、8、9、10或11，更优选6。最低PSA水平的倍数可以为 2X、4X 或 8X，优选 4X。在本发明的另外一种实施方式中，PSA检测可用于确定从治疗后患者获得的系 列样本的PSA。随时间取得的系列样本的PSA测量可用于计算PSA速率值，包括PSA改 变的速率、Ln[PSA]相对时间的斜率、或PSA增加的倍增时间。将一个或多个这些PSA 速率值与其对应的速率指标进行比较可以确定是否发生ES-BCR。在该实施方式中，本发明可包含，例如，确定患者是否具有早期生化复发 (ES-BCR, early stage biochemical relapse)的方法，包含a)从该患者获得样本；
18
b)使用功能灵敏度至少低至lpg/mL的PSA检测确定每一样本中的PSA水平；c)确定该PSA速率值超过PSA速率指标，从而检测到ES-BCR ；或确定该PSA速率值未超过PSA速率指标，从而检测到病情稳定。用于确定PSA值的第一样本可取自治疗后的任意时间，或在预先清除治疗的 PSA水平和PSA最低点之时或之后。通常，会在治疗后的2周至8周之间的任意时间取 第一样本。可以以用于前列腺疾病的临床监测的任意间隔设定来取样。优选在治疗后30 或45天取第一样本，随后优选以3个月的间隔获取其他的样本。如果样本PSA值显示 出ES-BCR已发生或显示治疗失败，则可调整时间进程。应从PSA最低点测量PSA水平的升高的速率。PSA升高速度超过指标水平的患 者具有发生早期生化复发的特征。可通过使用统计学分析，包括单变量逻辑回归和受试 者工作特性(ROC)分析、双变量分析或多变量分析或其他合适的统计学方法来获得病情 稳定和具有ES-BCR的患者亚群进行良好区分的指标值，从而获得、评价或确定速率指 标。如下文进一步讨论的，PSA水平随时间的升高速率是患者是否具有ES-BCR或 病情稳定的一个良好指标。此外，诸如第二连续升高的速率指标可用作患者是否具有 ES-BCR或病情稳定的指标。[PSA]指标的改变速度或第二连续升高指标可以为0.2pg/ mL/月和 2.5pg/mL/月之间的任意值，优选 0.2、0.3、0.4.、0.5、0.6、0.8、0.9、1.0、 1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、 2.8、2.9、3.0、3.2.、3.4、3.6、3.8 或 4.0pg/mL/月，并且更优选 0.4、0.5、0.6、0.7、 0.8、0.9、1.0或2.0pg/mL/月，或这些值中的任意值。作为另外一个实例，Ln[PSA]相 对时间的斜率指标可以为超过约0.015至0.0425之间的任意水平，优选0.015、0.175、 0.020、0.0225、0.025、0.0275、0.030、0.0325、0.035、0.0375、0.040、0.0425 或 0.045， 并且更优选0.03。此外，在一种实施方式中，患者是否具有ES-BCR的倍增时间指标可以为 400-800 天之间的任意天数，更优选 400、425、450、475、500、525、550、575、600、 625、650、675、700、725、750、775或800天，并且最优选550天。当PSA速率值未 超过PSA速率指标时，确定病情是稳定的；如果PSA速率值等于或超过PSA速率指标， 则检测到了 ES-BCR。在倍增时间指标的情况下，如果PSA倍增时间天数等于或少于倍 增时间指标，则检测到了 ES-BCR。对于倍增时间值和指标，如果倍增时间值小于倍增 时间指标，将确定倍增时间值超过倍增时间指标。在其他的实施方式中，所观察到的最大PSA指标和Ln[PSA]相对时间的斜率指 标的组合用于确定患者是否病情稳定或具有ES-BCR。例如，该方法还包含C)确定PSA 水平超过15pg/mL的PSA指标并且Ln[PSA]相对时间的斜率超过0.03的Ln[PSA]相对时 间的斜率指标，从而检测到ES-BCR。另外，如果PSA水平小于15pg/mL或PSA水平 升高速率低于约0.03，则检测到病情稳定。在该实施例中，如果两个PSA升高速率都等 于或超过速率指标，并且所观察到的PSA值等于或超过所观察到的最大PSA指标，则确 定 ES-BCR。在另外一个方面，本发明提供了一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期 生化复发(ES-BCR，early stagebiochemicalrecurrence)的方法，包含
a)从前列腺癌治疗后的患者获得系列血清样本；b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA检测测量每一样本中的PSA水平；C)确定PSA速率值；d)确定PSA速率值等于或小于PSA速率指标，从而检测到了 ES-BCR ；和e)根据PSA速率指标将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。PSA倍增时间值等于或超过速率阈值的患者可根据倍增时间被分类为具有急 性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR)。作为一个实施例，在某些实施方式中，倍增 时间等于或少于10个月显示出快速复发；倍增时间大于约10个月到长达等于24个月或 约24个月显示出中性ES-BCR，倍增时间大于约24个月显示出慢性复发。在另外一个方面，本发明提供了一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期 生化复发(ES-BCR)的方法，包含a)从前列腺癌治疗后的患者获得一系列血清样本组；b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA检测测量每一样本中的PSA水平；c)确定倍增时间值和所观察到的最大PSA值；d)确定倍增时间等于或小于倍增时间指标，从而检测到了 ES-BCR ；和e)根据倍增时间和所观察到的最大PSA将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。在另一方面，可将PSA倍增时间等于或超过倍增时间阈值的患者根据倍增时间 和/或所观察到的最大PSA分类为四个ES-BCR亚类。1型复发患者的倍增时间少于150 天。2型复发患者的倍增时间为150-400天，3型复发患者和4型复发患者的倍增时间超 过400天。对于3型患者，所观察到的最大PSA超过200pg/mL，而4型患者对于超过 400天的持续时间所观察到的最大PSA值不超过200pg/mL。在另外一个方面，本发明提供了一种确定检测患者在前列腺癌的抢救性治疗之 后是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法，包含a)从接受抢救性治疗后的患者获得样本；b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA测定测量每一样本中的PSA水平；c)使用一个或多个样本的PSA水平来确定PSA值；其中，如果PSA值超过PSA指标，则检测到了 ES-BCR，如果PSA值未超过
PSA指标，则检测到了病情稳定。在另外一个方面，本发明提供了一种包含使用PCR信号检测的适合于进行PSA 夹心免疫测定的核酸-抗PSA偶合物(conjugate，结合物)的试剂盒，其中该测定具有至 少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至0.5pg/mL的功能灵敏度。该试剂盒还包含确定一 个或多个PSA值的软件。在另外一个方面，本发明提供了 一种包含检测患者是否具有早期生化复发 (ES-BCR)的方法说明的标签(label)，其包含a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本；b)使用功能灵敏度小于lpg/mL的PSA检测测量样本中的PSA水平；c)使用一个或多个样本的PSA水平来确定PSA值；其中，如果PSA值等于或超过PSA指标，则检测到了 ES-BCR，如果PSA值未
超过PSA指标，则检测到病情稳定。
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实施例使用较高灵敏度测定来测量总PSA(tPSA)的临床研究显示，通过使用较高灵敏 度的检测来监测血清PSA的变化能够提前检测到生化复发。相比之下，以前报道的常规 检测的功能灵敏度是有限的，并且不能可靠地报告低于约O.Olng/mLaOpg/mL)的PSA 水平。因此，使用高灵敏度[PSA]测定提供了更可靠的早期BCR检测。丨丨1:麟耐 龍隨歹丨謎别牛涯(PSA)隨隨泖輔雕 (Nucleic Acid Detection Immunoassay， NADIA 测定)使用功能灵敏度为0.5pg/mL的核酸检测免疫测定(NADIA 测定)来测量血 清样本中的总PSA(tPSA)。参见ClinChemM(6)Suppl.，2007，#C_15。以夹心免疫测 定的形式来实施NADIA 测定。在设计为检测接受前列腺根除术的男性患者样本中pg/mL水平的PSA测定中使 用了针对PSA上不同表位的两种抗体。实施例IA =产牛信号核酸-抗PSA偶合物(conjugate)第一抗体偶合(化学连接)于Jablonski 和 Adams 在 IVDTechnology (2006 年 11
月)中所描述的60个碱基的寡核苷酸。然后在pH范围为7.0-7.5下将该报告抗体在含有 牛血清白蛋白(BSA)和表面活性剂的的缓冲稀释液中稀释到约10-30皮摩尔(pM)以减 少非特异性结合。实施例IB 产牛捕获核酸_抗PSA偶合物将第二抗体固定在直径大约为1微米的顺磁微粒上。捕获抗体具有与其化学连 接的生物素，使用Pierce提供的类别号为21335的EZ-连接硫代-NHS-LC-生物素(硫 代琥珀酰亚胺基-6-(生物素氨基)己酸酯(盐)，使用它们的目录中描述的方法来使用上 述生物素，随后通过制造商Seradyn(类别号为3015-2104)制造的已连接到磁性微粒上的 链霉亲和素连接物将其连接到顺磁微粒上。实施例IC = NADIA 测定的条件使75微升(μ )的报告抗体与20 μ 1的患者血清样本在室温下反应两小时。然 后以异质的形式将固定在顺磁微粒上的捕获抗体加入到报告抗体和样本溶液中。轻轻搅 拌使顺磁微粒保持为悬浮状态，从而使该混合物反应30分钟。孵育结束时，从剩余溶液磁性分离微粒，小心地去除剩余溶液而在孔的一侧留 下磁性颗粒。然后将磁性颗粒清洗3-5次从而去除未结合的报告抗体。将该溶液缓冲至 中性ρΗ，该溶液含有如Tween20的表面活性剂。所得到的清洗后的颗粒只含有PSA(如 果存在的话)，捕获抗体和由DNA标记的报告抗体成为夹心结构。然后将含有与DNA互补的互补引物和Taq聚合酶的PCR试剂加入到清洗后的顺 磁微粒中，进行实时PCR。该PCR扩增步骤使用标准的市售试剂。在含有结合于报告 抗体的DNA的免疫复合物的存在下，进行DNA模板的扩增。然后从由已知的tPSA浓度校准(5、25和100pg/mL)产生的标准曲线读取未知 样本。此外，每一 96孔板包含0.0pg/mL、10.0pg/mL和80.0pg/mL的PSA对照，进一
步保证每块板的运行的PCR扩增步骤都在适当的控制下。如Jablonski和Adams在IVD Technology (2006年11月)中所述，还可以以同质
形式进行该测定。例如，第一抗PSA单克隆抗体由寡核苷酸序列(a)标记，第二抗体偶
21合于寡核苷酸序列(b)或(C)。寡核苷酸序列(a)分别与序列(b)和(C) 3’末端的最后 9个和15个碱基互补。在含有0.1%的牛血清白蛋白(BSA)的IOmmolTris (pH 8.0)中将 偶合对稀释到lO-lOOpmol，并且在PSA的存在下结合2小时。然后用Tris/BSA稀释溶 液，从而将块状偶合物浓度降至低于lpmol，并在52°C下保持1分钟以使未结合的偶合物 完全融化。加入含有Taq聚合酶和下游引物的PCR试剂混合物，并封闭(seal)反应。将 温度降低至23°C以使与免疫复合物相连的DNA链完全杂交并且开始第一链的延伸。游离 的MAb-DNA在稀释溶液中的第一延伸的时间范围(timeframe)内不能以相同程度杂交， 并且不能参与随后的指数扩增。使与PSA免疫复合物相连的重叠DNA标记延伸5分钟， 通过将温度提高到85°C超过3分钟来结束。立即开始所形成的模板的实时PCR扩增，破 坏不再需要的免疫复合物。该测定的灵敏度确定为约100fg/mL。为了证明 NADIA PSA 测定的性能，IMD 从 EleftheriosDiamandis M.D.Ph. D. (University Health Network and TorontoMedical Laboratories,多伦多，ON,力口拿大)的
实验室获得患者样本。这些样本包括42位先前被DrDiamandis描述为具有病情稳定特 征的患者，和43位具有被他分类为具有生化复发的PSA值升高的患者。在前列腺切除 术后获得这些样本，如果手术后他们的PSA值降低至lOOpg/mL则将他们的样本包括在 内。使用几种标准确定生化复发，并且生化复发是基于研究过程中获得的时间点值。参 见 Yu, He ； Diamandis, Eleftherios, P.Wong, Pui-Yuen ； Nam, Robert ； Trachtenberg, John "Detection of Prostate Cancer Relapse with Prostate SpecificAntigen Monitoring at Levels of.001to0.1ug/L” J.Urologyl57 913-18(1997)。NADIA PSA测定的灵敏度足以准确区别背景值的回顾性临床研究中所有女 性样本中的tPSA值和男性群体样本中所观察到的最低值。实施例2 评价疾病结果的指标的回顾件研究NADIA 测定被用于测量前列腺根除术后前列腺癌患者的系列血清样本中的 tPSA水平。将结果与较早的使用基于免疫荧光(IFM)测定的研究测定的血清样本的PSA 水平的测量结果进行比较。Vassilikos etal.，Clin.Biochem.33 115-123 (2000)。然后分 析NADIA 测定结果从而确定患者临床结果的一致性。样本遵循以前发表的研究(J Urol 157 913-8，1997)储存的血清样本(N = 435)用 于本研究。在1993和1994年收集样本，使用AbbottLaboratories IMx测定来测量PSA水 平，然后将样本于_40°C冷冻储存。样本也用于Vassilikos等的研究，其中使用IFM测 定来确定tPSA水平。在Clin Chem迎2108-14，1993中更详细地描述了 IFM测定。 从85位RP后的基线tPSA < 100pg/mL (利用IMx测定测量)的患者获得用于Vassilikos 等的研究的血清样本，在RP后从每一位患者获取超过3个系列样本(平均为5.0，中值 为5，范围为3-6)。中值年龄为63岁(年龄范围为49-73岁)，RP前的tPSA为7.1ng/ mL(0.1-49.0)，Gleason评分为7(5-9)，肿瘤累及程度百分比是25% (1-90% )。临床分 期为Tla-c (16)、T2a-b(35)和未知(33)。4位患者接受了 RP前治疗(激素=1 ；放射 疗法=2)。在Journal of Urology的研究中，对开始时以Abbott IMx测定确定tPSA值的血 清样本通过IFM方法进行了再次分析，与初始值比较未显示显著差异。JoumalofUrology 的文章确定了 BCR为>2次的连续tPSA升高达到MOOpg/mL，复发从第一次tPSA升高
22开始。如果RP后前列腺根除术(RP)后患者的PSA水平低于使用目前FDA批准的常 规PSA测定的可检测限，就将他们的血清样本包括在NADIA 测定PSA研究中。多 种常规测定都报道患者在手术后具有零或<0.1ng/mL(< lOOpg/mL)的值。NADIA PSA可检测低于FDA批准的PSA测定大约200倍的PSA水平。因此，使用更高灵敏度 的PSA测定能够在第一时间测量前列腺切除术后患者的真实PSA水平。更灵敏和更准确 的PSA水平测量使得能够将患者分为两类_病情稳定和早期生化复发。研究中患者的描沭件统计因为无NADIA 测定数据或不能获得手术数据，7位患者被预期性地排除出 该分析。本研究中包括的患者的最终数目为85位。在下表1中示出了本研究中包括的 每一位患者随着时间取样获得的[PSA](pg/mL)测量结果。
权利要求
1.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法，包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本；b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平； C)使用一个或多个样本的PSA水平确定PSA值；其中，如果所述PSA值至少是或超过PSA指标，则检测到ES-BCR，如果所述PSA 值未超过所述PSA指标，则检测到病情稳定。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述PSA指标是[PSA]。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述检出限至少低至l.Opg/mL。
4.根据权利要求1或14所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.5pg/mL。
5.根据权利要求1或14所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.2pg/mL。
6.根据权利要求1、4或14中任一项所述的方法，其中，所述样本是所述患者的系列 样本组中的一个，并确定每一样本中的所述PSA的量。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述PSA指标是速率指标。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述速率指标是倍增时间。
9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述速率指标是Ln[PSA]相对时间的斜率。
10.根据权利要求7所述的方法，其中，所述速率指标是[PSA]升高的速度。
11.根据权利要求6所述的方法，其中，所述PSA指标是所观察到的最高PSA水平/ 最低PSA水平。
12.根据权利要求6所述的方法，其中，所述PSA值是[PSA]。
13.根据权利要求6所述的方法，其中，所述PSA值是第二连续升高(pg/mL/月)。
14.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法，包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本；b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平； C)使用一个或多个样本的所述PSA水平确定两个或多个PSA值；其中，如果两个或多个PSA值的每一个至少为或超过其分别的PSA指标，则检测到 ES-BCR。
15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述检出限至少低至l.Opg/mL。
16.根据权利要求14所述的方法，其中，一个PSA指标是速率指标。
17.根据权利要求14所述的方法，其中，所述PSA指标之一是Ln[PSA]相对时间的斜率。
18.根据权利要求16所述的方法，其中，所述速率指标是倍增时间。
19.根据权利要求16所述的方法，其中，所述速率指标是[PSA]升高的速度。
20.根据权利要求16所述的方法，其中，所述速率指标是所观察到的最高PSA水平/ 最低PSA水平。
21.根据权利要求14所述的方法，其中，所述PSA值是第二或更多的连续升高(pg/ mL/ 月)。
22.根据权利要求2或12中任一项所述的方法，其中，[PSA]是PSA值，并且所述 [PSA]至少为或超过所测量到的最低[PSA]的2倍。
23.根据权利要求1、14、45或49-60中任一项所述的方法，其中，所述测量PSA水平还包括使所述样本与包含非核酸PSA结合体和核酸标记的偶合物接触。
24.根据权利要求6所述的方法，其中，所述测量PSA水平还包括 使所述样本与包含非核酸PSA结合体和核酸标记的偶合物接触。
25.根据权利要求8或18中任一项所述的方法，其中，所述倍增时间指标为150天。
26.根据权利要求8或18中任一项所述的方法，其中，所述倍增时间指标为400天。
27.根据权利要求8或18中任一项所述的方法，其中，所述倍增时间指标为550天。
28.根据权利要求8或18中任一项所述的方法，其中，所述倍增时间指标为700天。
29.根据权利要求8或18中任一项所述的方法，其中，所述倍增时间值为150-400 天，检测至IJ 2型ES—BCR。
30.根据权利要求9或17中任一项所述的方法，其中，所述Ln[PSA]相对时间的斜率 指标至少为0.03。
31.根据权利要求8或18中任一项所述的方法，其中，所述倍增时间值为约150天至 约400天。
32.根据权利要求8或18中任一项所述的方法，其中，所述倍增时间值为约10个月 至24个月。
33.根据权利要求11或20中任一项所述的方法，其中，所述观察到的最高PSA/最 低值为3至11。
34.根据权利要求11或20中任一项所述的方法，其中，所述观察到的最高PSA/最 低值是6。
35.根据权利要求2或12中任一项所述的方法，其中，所述[PSA]指标是lOpg/mL。
36.根据权利要求2或12中任一项所述的方法，其中，所述[PSA]指标是15pg/mL。
37.根据权利要求2或12中任一项所述的方法，其中，所述[PSA]指标是20pg/mL。
38.根据权利要求2或12中任一项所述的方法，其中，所述[PSA]指标是25pg/mL。
39.根据权利要求2或12中任一项所述的方法，其中，所述[PSA]指标是50pg/mL。
40.根据权利要求22所述的方法，其中，所述[PSA]指标是lOpg/mL。
41.根据权利要求22所述的方法，其中，所述[PSA]指标是15pg/mL。
42.根据权利要求22所述的方法，其中，所述[PSA]指标是20pg/mL。
43.根据权利要求22所述的方法，其中，所述[PSA]指标是25pg/mL。
44.根据权利要求22所述的方法，其中，所述[PSA]指标是50pg/mL。
45.一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR)的方法，包含a)从前列腺癌治疗后的患者获得系列血清样本组；b)使用检出限为约0.5pg/mL的PSA测定来测量每一样本中的PSA水平；c)确定倍增时间和所观察到的最高PSA水平；d)确定所述倍增时间低于倍增时间指标，从而检测ES-BCR；和e)根据所述倍增时间和所观察到的最高PSA将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。
46.根据权利要求45所述的方法，其中，所述倍增时间小于150天。
47.根据权利要求45所述的方法，其中，所述倍增时间为150天至400天。
48.根据权利要求45所述的方法，其中，所述倍增时间超过400天。
49.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法，包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本，其中所述样本是来自所述患者的系列样本组 之一，并确定每一样本的PSA的量；b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平； C)使用一个或多个样本的所述PSA水平确定Ln[PSA]相对时间的斜率；其中，如果所述Ln[PSA]相对时间的斜率值至少为或超过Ln[PSA]相对时间的斜率指 标，则检测到ES-BCR，如果所述Ln[PSA]相对时间的斜率值未超过Ln[PSA]相对时间的 斜率指标，则检测到病情稳定。
50.根据权利要求49所述的方法，其中，所述检出限低于l.Opg/mL。
51.根据权利要求14或49中任一项所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.5pg/mLo
52.根据权利要求14或49中任一项所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.2pg/mLo
53.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法，包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本，其中所述样本是来自所述患者的系列样本组 之一，并确定每一样本的PSA的量；b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平； C)使用一个或多个样本的所述PSA水平确定[PSA]升高的速度；其中，如果所述[PSA]升高的速度值至少为或超过[PSA]升高的速度指标，则检测到 ES-BCR，如果所述[PSA]升高的速度值未超过[PSA]升高的速度指标，则检测到病情稳 定。
54.根据权利要求53所述的方法，其中，所述检出限低于1.0pg/mL。
55.根据权利要求53所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.5pg/mL。
56.根据权利要求53所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.2pg/mL。
57.一种检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法，包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本，其中所述样本是来自所述患者的系列样本组 之一，并确定每一样本的PSA的量；b)使用检出限低于2.0pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平；其中，如果[PSA]值至少为或超过[PSA]指标，则检测到ES-BCR，如果PSA值未超 过PSA指标，则检测到病情稳定。
58.根据权利要求57所述的方法，其中，所述检出限低于l.Opg/mL。
59.根据权利要求57所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.5pg/mL。
60.根据权利要求57所述的方法，其中，所述检出限至少低至0.2pg/mL。
61.一种检测患者是否具有急性、中性或慢性早期生化复发(ES-BCR)的方法，包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得系列血清样本组；b)使用功能灵敏度为约0.5pg/mL的PSA测定来测量每一样本中的PSA水平； C)确定PSA速率值；d)确定所述PSA速率值等于或小于PSA速率指标，从而检测到ES-BCR；和e)根据所述PSA速率指标将ES-BCR分类为急性、中性或慢性。
62.根据权利要求1、10、14、19、45或49-60、92中任一项所述的方法，其中，检 测到ES-BCR导致选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
63.根据权利要求1、10、14、19、45或49-60、93、94中任一项所述的方法，其 中，检测到病情稳定导致在后期没有检测到ES-BCR时就不进行进一步的治疗。
64.根据权利要求61所述的方法，其中，检测到ES-BCR，并且分类为急性的 ES-BCR导致选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
65.根据权利要求61所述的方法，其中，检测到ES-BCR，并且分类为中性的 ES-BCR,还包含(f)获得临床参数，对比年龄边界值年轻的、Gleason评分超过Gleason 评分边界值的患者进行选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
66.根据权利要求61所述的方法，其中，检测到ES-BCR，并且分类为慢性的 ES-BCR,还包含(f)获得临床参数，对比年龄边界值年轻的、Gleason评分超过Gleason 评分边界值的患者进行选自抗雄激素疗法、放射疗法和化学疗法的治疗。
67.根据权利要求61所述的方法，其中，检测到病情稳定导致在后期没有检测到 ES-BCR时就不进行进一步的治疗。
68.根据权利要求17所述的方法， 值是 15pg/mLo
69.根据权利要求17所述的方法， 值是 10pg/mL。
70.根据权利要求17所述的方法， 值是 5pg/mLo
71.根据权利要求14所述的方法， 值是 5pg/mLo
72.根据权利要求14所述的方法， 值是 10pg/mL。
73.根据权利要求14所述的方法， 值是 15pg/mLo
74.根据权利要求68、69或70中任一项所述的方法，其中，[PSA]值小于[PSA]边 界值并且Ln[PSA]相对时间的斜率小于Ln[PSA]相对时间的斜率指标，当后期没有检测到 ES-BCR时，不进行进一步的治疗。
75.根据权利要求68、69或70中任一项所述的方法，其中，[PSA]值小于[PSA]边 界值并且第二 PSA值小于第二 PSA指标，当后期没有检测到ES-BCR时，不进行进一步 的治疗。
76.根据权利要求71所述的方法，其中，所述[PSA]值小于5pg/mL的所述[PSA]临 界值并且所述第二 PSA值小于PSA指标，当后期没有检测到ES-BCR时，不进行进一步 的治疗。
77.根据权利要求72所述的方法，其中，所述[PSA]值小于lOpg/mL的所述[PSA]边界值并且所述第二 PSA值小于PSA指标，当后期没有检测到ES-BCR时，不进行进一步 的治疗。
78.根据权利要求73所述的方法，其中，所述[PSA]值小于15pg/mL的所述[PSA]边其中，第二 PSA指标是[PSA]，且所述[PSA]边界 其中，第二 PSA指标是[PSA]，且所述[PSA]边界 其中，第二 PSA指标是[PSA]，且所述[PSA]边界 其中，第一 PSA指标是[PSA]，且所述[PSA]边界 其中，第一 PSA指标是[PSA]，且所述[PSA]边界 其中，第一 PSA指标是[PSA]，且所述[PSA]边界5界值并且所述第二 PSA值小于PSA指标，当后期没有检测到ES-BCR时，不进行进一步 的治疗。
79.根据权利要求74和75中任一项所述的方法，还包含监测患者ES-BCR。
80.—种试剂盒，包含a)适合于实施使用PCR信号检测的PSA夹心免疫测定的核酸_抗PSA偶合物，其中所述测定具有至少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至 0.5pg/mL的检出限。
81.—种试剂盒，包含a)适合于实施使用PCR信号检测的PSA夹心免疫测定的核酸-抗PSA偶合物，其中 所述测定具有至少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至l.Opg/mL的检出限。
82.—种试剂盒，包含a)适合于实施使用PCR信号检测的PSA夹心免疫测定的核酸-抗PSA偶合物，其中 所述测定具有至少低至0.2pg/mL的检测限和至少低至2.0pg/mL的检出限。
83.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒，其中，所述核酸-抗PSA偶 合物还包含第一核酸_抗PSA偶合物和第二核酸_抗PSA偶合物，其中所述第二核酸_抗 PSA偶合物结合于固体支持物。
84.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒，还包含用于确定一个或多个 PSA值的软件。
85.根据权利要求46、47或48中任一项所述的方法，还包含用于确定一个或多个 PSA值的软件。
86.—种包含检测患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)的方法的说明的标签，所述 方法包括a)从前列腺癌治疗后的患者获得样本；b)使用检出限低于lpg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平；C)使用一个或多个样本的PSA水平确定PSA值；其中，如果所述PSA值超过PSA指标，则检测到ES-BCR，如果所述PSA值未超过 所述PSA指标，则检测到病情稳定。
87.—种检测患者在接受前列腺癌的抢救性治疗后是否具有早期生化复发(ES-BCR) 的方法，包括a)从接受抢救性治疗后的患者获得样本；b)使用检出限为约0.5pg/mL的PSA测定来测量所述样本中的PSA水平；C)使用一个或多个样本的PSA水平确定PSA值；其中，如果所述PSA值超过PSA指标，则检测到ES-BCR，如果所述PSA值未超过 所述PSA指标，则检测到病情稳定。
88.根据权利要求2或12中任一项所述的方法，其中，所述[PSA]值超过所测量到的 最低[PSA]至少4倍。
89.根据权利要求1、14、45、49、53、57、61或87中任一项所述的方法，其中，所 述PSA测定是使用适合用于实施PSA夹心免疫测定的两种核酸_抗PSA偶合物的夹心免 疫测定，并且还包含使用PCR信号检测。
90.根据权利要求89所述的方法，其中，所述核酸-抗PSA偶合物还包含第一核酸_抗PSA偶合物和第二核酸-抗PSA偶合物，其中所述第二核 酸-抗PSA偶合物结合于固体支持物。
91.根据权利要求89所述的方法，其中，所述PSA夹心免疫测定是均相测定。
92.根据权利要求10、19、53、54、55或56中任一项所述的方法，其中，所述[PSA] 升高速度超过所述[PSA]升高速度指标，其中检测到了 ES-BCR。
93.根据权利要求10、19、53、54、55或56中任一项所述的方法，其中，所述[PSA] 升高速度未超过所述[PSA]升高速度指标，其中检测到了病情稳定。
94.根据权利要求10、19、53、54、55或56中任一项所述的方法，其中，所述[PSA] 升高速度未超过所述[PSA]升高速度指标，当后期没有检测到ES-BCR时，不进行进一步 的治疗。
95.根据权利要求94的任一项所述的方法，还包含监测患者的ES-BCR。
96.根据权利要求92所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
97.根据权利要求93所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
98.根据权利要求94所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
99.根据权利要求95所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约1.5pg/mL/月。
100.根据权利要求92所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
101.根据权利要求93所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
102.根据权利要求94所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
103.根据权利要求95所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约0.5pg/mL/月。
104.根据权利要求92所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
105.根据权利要求93所述的方法，其中所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
106.根据权利要求94所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
107.根据权利要求95所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约2.0pg/mL/月。
108.根据权利要求92所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约l.Opg/mL/月。
109.根据权利要求93所述的方法，其中所述[PSA]升高速度指标是约l.Opg/mL/月。
110.根据权利要求94所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约l.Opg/mL/月。
111.根据权利要求95所述的方法，其中，所述[PSA]升高速度指标是约l.Opg/mL/月。
112.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒，其中，所述核酸-抗PSA偶 合物还包含第一核酸_抗PSA偶合物和第二核酸_抗PSA偶合物，其中所述第二核酸_抗 PSA偶合物结合于固体支持物。
113.根据权利要求80、81或82中任一项所述的试剂盒，其中，所述夹心免疫测定是 均相测定。
全文摘要
本发明描述了用于具有低功能灵敏度的PSA测定的组合物和方法，该PSA测定可用于例如，测定接受治疗后的前列腺疾病的早期复发和确定患者是否具有早期生化复发(ES-BCR)或病情稳定。
文档编号G01N33/574GK102016588SQ200980113911
公开日2011年4月13日 申请日期2009年2月19日 优先权日2008年2月21日
发明者托马斯·亚当斯, 爱德华·亚布隆斯基, 罗伯特·卡姆, 马克·J·萨尔诺, 鲁斯·桑德斯 申请人:艾瑞斯国际有限公司