专利名称：一种分离测定护肤类化妆品中6种皮质激素的方法
技术领域：
本发明属于分析技术领域，具体涉及一种分离测定护肤类化妆品中皮质激素的方法。
背景技术：
糖皮质激素(CorticosteiOids)是一类由肾上腺皮质分泌的留类激素，有重要的生理活性，如抗炎及抗过敏，降低毛细血管壁和细胞膜的通透性，减少炎性渗出等作用。短时间使用含有糖皮质激素的护肤类化妆品可使皮肤光滑细腻、红润白嫩、保湿而富有弹性、减少皱纹或治疗粉刺，有着较好的美容效果。但长期使用糖皮质激素会导致面部皮肤损害、发生皮肤变薄、毛细血管扩张、毛囊萎缩。我国《化妆品卫生规范》]规定此类物质为化妆品 中禁用物质。因此建立护肤类化妆品中激素的高效快速检测方法，对于严格控制此类化妆品的产品质量，确保使用安全具有重要的意义。糖皮质激素的测定方法主要有高效液相色谱法、LC-MS, GC-MS和毛细管电动色谱法等，其中高效液相色谱法是最常用的方法，但是该方法需要比较复杂的样品预处理过程，且液相色谱仪及液相色谱柱价格昂贵，仪器的运行成本也比较高。因而有必要建立一种简单、快速、灵敏度高且成本相对低的检测方法。微乳毛细管电动色谱(MEEKC)是在20世纪90年代在胶束毛细管电动色谱的基础上发展起来的一种电泳新技术，由于该法具有分离效率高，分析速度快，应用范围广泛，样品预处理简单，分析耗费低等优点，因此越来越受到了人们的重视。

发明内容
本发明提供了一种以离子液体和环糊精为添加剂的反向微乳毛细管电泳法(MEEKC)，分离测定护肤类化妆品中丙酸氟替卡松、曲安奈德、醋酸可的松、地塞米松、氢化可的松和泼尼松6种激素。本发明是这样实现的，样品经甲醇提取后，将样品提取液进样至含有离子液体BMM-BF4和β -环糊精的微乳运行液的毛细管电泳上，在电泳及测定条件下分离并测定化妆品中激素的含量。所述样品提取液采用以下步骤获得，在一定量的样品中加入一定体积的甲醇，超声助溶30min ;采用高速离心机，12000r/min,离心20min ;如此处理3次,合并3次上清液，在旋转蒸发仪上浓缩至约lmL，转移并加微乳运行液清洗定容至IOmL ;溶液经O. 45 μ m滤膜过滤，并超声脱气所述的微乳运行液的组成为0. 026g/mL十二烷基硫酸钠SDS，O. 073g/mL正丁醇，O. 06g/mL 正辛烧，10mmol/L I-甲基-3-正丁基四氟化硼，10mmol/L β -环糊精，20mmol/LpH 2. 2的磷酸二氢钠缓冲液。微乳运行液配制时需超声30min，使用前经0. 45 μ m滤膜过滤，并超声脱气lOmin。所述的毛细管电泳所采用的毛细管为未涂层石英毛细管,总长度为65cm,有效长度50cm,柱内径为50 μ m。
所述的毛细管电泳的条件为进样电压_20kV，进样时间3s，反相运行电压_20kV，运行温度20 °C。样品提取液经毛细管电泳分离后，采用紫外光检测器检测，检测波长为245nm。所述的方法，其特征是进行毛细管电泳时，要对毛细管进行冲洗压力为20kpa冲洗，按照冲洗目的的需要，冲洗的程序为进行毛细管电泳时，要对毛细管进行冲洗，冲洗压力为20kpa，按照冲洗目的的需要，冲洗的程序为A、对于新的毛细管在使用前进行的冲洗 CH3OH5min，
H2O3min,
O. I mol/L HCl5min，
H2O3min，
0.1 mol/L NaOH 5min,
H2O3min,
微乳运行液5 min.。B、进样前对毛细管进行的冲洗H2O3min,O. Imol/NaOH 5min,H2O3min,微乳运行液5min.。C、检测结束对毛细管进行的冲洗H2O3min,O. Imol/NaOH 5min,H2O3min,空气5min。


β -环糊精和离子液体为添加剂的MEEKC分离6种激素的电泳谱图
具体实施方案实施例I、材料与方法(I)试验材料某品牌化妆品中的乳液。(2)仪器及色谱条件ΤΗ-3100高效毛细管电泳仪。采用未涂层石英毛细管(总长度为65cm,有效长度50cm,柱内径为50 μ m)为分离通道，以离子液体BMIM-BFdP β -环糊精为添加剂的微乳液为运行缓冲溶液，以压力_20kV方式阴极进样3s，紫外检测波长245nm，运行电压_20kV，温度20°C。(3)激素标准溶液的配制准确称取泼尼松、氢化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松各O. 0800g，分别加10. OmL甲醇溶解、混匀，配制成质量浓度均为8mg/mL的6种激素的标准储备液，于4°C冰箱内避光保存，使用时根据需要稀释成不同浓度的标准液。(4)样品溶液制备称取2. OOg化妆品，加入IOmL甲醇，超声助溶30min采用高速离心机，12000r/min，离心20min ;如此处理3次，合并3次上清液，在旋转蒸发仪上浓缩至约ImL,转移并加微乳运行液清洗定容至IOmL ;溶液经O. 45 μ m滤膜过滤,并超声脱气后使用。(5)微乳运行液的制备0.026g/mL十二烷基硫酸钠SDS，O. 073g/mL正丁醇，
O.06g/mL正辛烧，10mmol/L I-甲基-3-正丁基四氟化硼，10mmol/L β -环糊精，20mmol/ LpH 2. 2的磷酸二氢钠缓冲液。超声30min。使用前经O. 45 μ m滤膜过滤，并超声脱气lOmin。(6)化妆品中激素含量的测定优化的实验条件下，化妆品提取液在高效毛细管电泳仪上进样，平行测定3次。(7)样品回收率测定在相应化妆品中加入一定量相应激素的标准溶液,充分混匀，与相应样品同时同样处理，所得提取液在高效毛细管电泳仪上进样，同样平行测定3次。2、测定结果(I)激素分离结果(如附图所示)(2)激素测定结果6种激素的线性范围、回归方程及相关系数、检出限见表I所示。表1、6种激素线性范围、回归方程及相关系数、检出限
权利要求
1.一种分离测定护肤类化妆品中6种激素的方法，其特征是以离子液体和β-环糊精为添加剂的反向微乳毛细管电泳法(MEEKC)，样品经甲醇提取后，将样品提取液进样至含有离子液体BMIM-BF4和β -环糊精的微乳运行液的毛细管电泳上，在电泳及测定条件下分离并测定化妆品中丙酸氟替卡松、曲安奈德、醋酸可的松、地塞米松、氢化可的松和泼尼松激素的含量。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征是样品提取液采用以下步骤获得，在一定量的样品中加入一定体积的甲醇，超声助溶30min ;采用高速离心机，12000r/min,离心20min ；如此处理3次，合并3次上清液，在旋转蒸发仪上浓缩至约lmL，转移并加微乳运行液清洗定容至IOmL ;溶液经O. 45 μ m滤膜过滤，并超声脱气。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征是微乳运行液的组成为0.026g/mL十二烷基硫酸钠SDS，0. 073g/mL正丁醇，O. 06g/mL正辛烷，IOmmoI/L I-甲基-3-正丁基四氟化硼，lOmmol/L0 -环糊精，20mmol/L pH 2. 2的磷酸二氢钠缓冲液。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征是微乳运行液配制时需超声30min，使用前经O. 45 μ m滤膜过滤,并超声脱气lOmin。
5.根据权利要求I所述的方法，其特征是毛细管电泳所采用的毛细管为未涂层石英毛细管，总长度为65cm，有效长度50cm，柱内径为50 μ m。
6.根据权利要求I所述的方法，其特征是毛细管电泳的条件为进样电压_20kV，进样时间3s，反相运行电压_20kV，运行温度20°C。
7.根据权利要求I所述的方法，其特征是样品提取液经毛细管电泳分离后，采用紫外光检测器检测，检测波长为245nm。
8.根据权利要求I所述的方法，其特征是进行毛细管电泳时，要对毛细管进行冲洗，冲洗压力为20kpa，按照冲洗目的的需要，冲洗的程序为 A、对于新的毛细管在使用前进行的冲洗CH3OH5min，H2O3min，.O. I mol/L HCl5min，H2O3min,.0.1 mol/L NaOH 5min，H2O3min，微乳运行液5min.。
B、进样前对毛细管进行的冲洗 H2O3min, .O. Imol/NaOH 5min, H2O3min, 微乳运行液 5min.。
C、检测结束对毛细管进行的冲洗 H2O3min, . O. Imol/NaOH 5min, H2O3min,空气 5min。
全文摘要
本发明提供了一种分离测定护肤类化妆品中6种激素的方法。以离子液体和β-环糊精为添加剂的反向微乳毛细管电泳法(MEEKC)分离测定化妆品中丙酸氟替卡松、曲安奈德、醋酸可的松、地塞米松、氢化可的松和泼尼松6种激素。本发明比常规的MEEKC分离测定方法具有更高的分离度。实验结果显示该方法样品处理简单、用量少，方法经济快速，分离度好和灵敏度高，实现了化妆品中皮质激素的毛细管电泳测定。
文档编号G01N27/447GK102778494SQ201210177688
公开日2012年11月14日 申请日期2012年6月1日 优先权日2012年6月1日
发明者刘瑛, 商少明, 李娟 , 李萌, 陈新 申请人:江南大学