专利名称：：一种新的阴道微生态评价体系、以及一种用于测评阴道微生态的试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医学微生态领域，尤其涉及一种新的阴道微生态评价体系，以及一种用于测评阴道微生态的试剂盒。
背景技术：
：微生态学是一门新兴的科学，近年来随着科技的迅猛发展,医学微生态学已成为一门独立的边缘学科并日益受到人们的重视。2001年，作为微生态学的一个分支学科，感染微生态学正式提出。随之，对于女性生殖道感染的微生态学研究也逐渐受到关注。从微生态角度出发，阴道感染即为阴道微生态失调症，其主要表现就是阴道菌群的失调。健康妇女的阴道排出物中可分离到20多种微生物，它们与宿主、环境之间构成了相互制约、相互协调、动态的微生态平衡。主要的常驻菌有:乳酸杆菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、棒状杆菌、B族链球菌、粪链球菌、支原体、白假丝酵母菌、消化球菌和类杆菌等等。一般用定性和定量的方法测得健康妇女阴道排出物中活菌数为102—9/ml，正常状态下，阴道内厌氧菌和需氧菌的比例为5:1，二者处于平衡状态，尤其是厌氧菌的存在对维持宿主阴道定植抗力方面起重要作用。但是在某种或某些因素作用下，阴道环境改变，阴道的微生物种群发生生态演替，超过了生理范围时，阴道内菌群的数量、种类、比例、分布发生变化，阴道的微生态平衡就被破坏，表现为阴道菌群失调引起的多种疾病。临床上常见的细菌性阴道病(BacterialVaginosis，BV)目前认为就是以阴道加德纳氏菌(GardnerellaVaginalis)等多种微生物的增加为主，同时伴有乳杆菌减少的阴道菌群紊乱所致的内源性感染。BV患者的阴道菌群失调主要表现为阴道加德纳氏菌、类杆菌、弯曲菌、消化球菌、优杆菌及支原体的增多，而乳杆菌的数量显著减少。调查其病原，无特异的微生物发现，如滴虫、念珠菌以及淋球菌等。其病因多认为是来源于阴道微生物群中的多种条件致病菌的复合感染。临床多发病、常见病之一，外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginalcandidiasis,VVC)其病原体是念珠菌，其中大部分由感染白色念珠菌所引起。正常情况下白色念珠菌与机体处于共生状态，不引起疾病。但在阴道微环境中平衡状态被破坏后，白色念珠菌则由酵母孢子相转为菌丝相，在阴道内大量生长繁殖，引起外阴阴道念珠菌病。在vvc中，患者阴道的乳杆菌和革兰阳性菌的检出率降低，白色念珠菌的检出率明显增加。临床上还有一些患者主诉偶尔或经常感觉外阴不适甚至瘙痒，分泌物增多，但检査没有找到明确的病原，无法确诊为阴道炎。对这部分患者经过进一步的研究发现，其阴道内微生态环境实际已经处于失调状态，但用目前的诊断方法尚未能确诊为任何感染及何种环境紊乱。综上所述，目前临床上能够明确诊断和不明病因的阴道炎症，都存在不同程度的阴道微生态失调。所以，让临床医师及时了解患者症状、体征之余，进一步了解患者的阴道微生态状况，有的放矢进行诊断治疗，迫在眉睫。关子女性生殖道感染的微生态学，目前，国内外很多学者都很关注，但发表的文献中，尚未提出一套完整的阴道微生态评价体系。只有1991年，NugentPR,KrohnMA和HillerSL通过大量精确的对比实验对阴道菌群提出了Nugent评分，用来诊断BV，现成为实验室诊断BV的金标准，但对其它阴道炎症的诊断未见明确指导意义。就国内现状而言，几乎没有临床医院真正应用Nugent评分，指导临床工作。因此，制定阴道微生态评价标准，指导临床医师在疾病最初诊断及治疗中、治疗后对阴道微生态进行全面评价重要而迫切。因此，为了指导妇产科临床医师从微生态角度重新审视妇科感染性疾病，正确、客观、全面的评价感染及治疗后的阴道微生态状况，本发明的发明人将基础微生态的一些理论应用到临床工作中，建立阴道微生态评价体系，旨在通过描述阴道菌群的密集度、多样性、优势菌、机体炎性反应、原因菌五方面并结合阴道PH值及检测阴道分泌物中过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞脂酶对阴道微生境进行全面评价，协助诊断治疗。
发明内容本发明的发明人为了解决上述问题提出并完成了本发明。本发明的召的为提供一种新的阴道微生态评价体系。本发明的另一目的为提供一种用于测评阴道微生态的试剂盒。根据本发明的阴道微生态体系包括以下阴道微生态测评项目1)菌群密集度；2)菌群多样性；3)优势菌；4)原因菌。根据本发明的阴道微生态评价体系可以进一步结合阴道内pH情况和在过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞脂酶方面的功能测定进行分析，所述pH值范围为《4.5为正常，>4.5为异常。过氧化氢功能测定能够帮助了解阴道微生态环境。过氧化氢由阴道内正常生态优势菌群乳酸杆菌产生，当H202浓度》2nmol/L时，表明阴道内的微生态环境正常。唾液酸苷酶功能测定能够帮助了解有无引发BV的病原体进居和繁殖。唾液酸苷酶由BV的主要致病菌加德纳菌、游动弯曲杆菌、厌氧菌和支原体等可以产生，当正常阴道微生态平衡受到破坏，这些产唾液酸苷酶的病原菌大量繁殖。唾液酸苷酶》7U/ml时，支持临床BV的诊断。白细胞脂酶能够帮助了解阴道清洁度的指标。白细胞脂酶活性《9U/L时，表明阴道内无炎症。根据本发明的阴道微生态评价体系，其中，所述菌群密集度测评项目分为IIV级使用油镜、放大100倍观察，每视野平均细菌数1个9个为I级(记为"+");使用油镜、放大100倍观察，每视野平均细菌数10个99个为II级(记为"++");使用油镜、放大100倍观察，每视野平均细菌数在100个以上，光镜下观察细菌满视野为III级(记为"+++")光镜下观察细菌聚集成团、或密集覆盖粘膜上皮细胞为IV级(记为"++++")。根据本发明的阴道微生态评价体系，其中，所述菌群多样性测评项目分为IIV级能辨别13种细菌为I级(记为"+");能辨别46种细菌为II级(记为"++");能辨别710种细菌为III级(记为"+++");能辨别11种以上细菌为IV级(记为"+++")。根据本发明的阴道微生态评价体系，其中，所述优势菌为革兰阳性球菌(记作G+c)、革兰阳性小杆菌(记作G+b(s))、革兰阳性大杆菌(记作G+b(L))、革兰阴性小杆菌(记作G—b(s))、革兰阴性大杆菌(记作GbW)、和/或革兰阴性弧形菌(记作G—v)。根据本发明的阴道微生态评价体系，其中，所述原因菌为真菌和/或滴虫。根据本发明的用于测评阴道微生态的试剂盒包括1)菌群密集度观测仪器，所述仪器为用于菌群密集度观测的常规仪器，如各种显微镜；2)菌群多样性观测仪器，所述仪器为用于菌群多样性观测的常规仪器，如各种显微镜；3)优势菌检测试剂，所述试剂为用于检测优势菌的常规试剂；以及4)原因菌检测试剂，所述试剂为用于检测各种原因菌的常规试剂。上述试剂盒进一步包括过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞脂酶功能测定试剂。本发明的体系通过描述阴道菌群的密集度、多样性、优势菌、机体炎性反应、原因菌五方面并结合阴道菌群的功能测定对阴道微生境进行全面评价，不仅可以一次性快速诊断临床常见的三大阴道炎症BV、VVC、滴虫，还可以发现阴道炎症患者阴道微环境存在的问题。最重要的是，还可以对目前临床上有白带增多、外阴瘙痒等症状而无特殊病原菌的现有方法难以诊断的阴道炎症患者进行微生态评价，指导临床用药，评估预后，从而达到指导临床治疗的目的。同时，本发明提供的试剂盒可以实现上述体系的快速、稳定、便捷应用。根据本发明的阴道微生态评价体系可以指导妇产科临床医师从微生态角度重新审视妇科感染性疾病，全面评价感染及治疗后的阴道微生态状况，指导临床以达到恢复阴道微生态环境正常这一最终目标。阴道微生态评价体系适用范围广泛，包括各种原因引起的阴道不适，操作方法简便，具有无创性，反馈结果快速，诊断明确，可行性及推广性强。使用本发明的试剂盒，标本取样简单对病人无创伤性。不仅可一举诊断临床常见的三大阴道炎症，还可以对目前临床上有白带增多、外阴瘙痒等症状而无特殊病原菌的现有方法难以诊断的阴道炎症患者进行微生态评价，反馈结果快速，诊断明确，可指导临床有针对性治疗，意义重大，可行性及推广性强。综上所述，本发明具有以下优点(1)解决了以往试剂盒诊断BV的不可靠性，另一方面，减少了对病人多次取样分别诊断不同阴道炎症的繁琐操作，在临床诊断上有很强的实用性。(2)可以快速诊断常见的三大阴道炎症BV、VVC、滴虫，还可以对有白带增多、外阴瘙痒而无特殊病原菌的阴道炎症患者进行微生态评价，指导临床治疗。(3)标本取样及镜下评价操作简单，可行性强。(4)通过涂片直观地对病人进行微生态评价，增加诊断疾病的可靠性，增强病人配合治疗的依从性，大大提高就诊治疗的效益性和正确性。阴道微生态评价体系的重大意义在于，它超越了现有阴道感染性疾病的诊治理念，即以杀灭微生物为主要的治疗方法变为增加益生菌、恢复阴道正常微生态环境为目的的新型治疗理念。该评价体系具有国际领先水平，它的实施推广，将给现有阴道炎症的诊断带来革命性的进步。具体实施例方式实施例1测试样本分别进行以下三方面的评价一、菌群情况1、正常菌群以革兰阳性大杆菌为优势菌，密集度为+++，多样性为+++。2.菌群失调要根据密集度、多样性、优势菌以及临床表现综合考虑。具体地，(1)菌群抑制所有细菌减少，表现为没有优势菌，密集度为+，多样性为+;(2)以革兰阳性球菌为优势菌密集度和多样性为+++++，如无症状，可恢复阴道酸性环境，帮助乳酸杆菌生长为主，密集度和多样性如为+++++++且有一定的症状，应用针对革兰阳性球菌为主的抗生素治疗；(3)革兰阳性小杆菌为优势菌密集度和多样性为+++++，如无症状，可恢复阴道酸性环境，帮助乳酸杆菌生长为主，密集度和多样性如为+++++++且有一定的症状，应用针对革兰阳性杆菌的抗生素治疗，如为细菌性阴道病(BV)，治疗以甲硝唑或克林霉素类抗生素为主；或者(4)以革兰阴性杆菌或革兰阴性弧菌为优势菌密集度和多样性为+++++，如无症状，可恢复阴道酸性环境，帮助乳酸杆菌生长为主，密集度和多样性如为+++++++且有一定的症状，应用针对革兰阴性杆菌为主的抗生素治疗；3、特殊病原体感染(1)滴虫感染可见滴虫，治疗以甲硝唑类抗生素为主；或者(2)念珠菌看见念珠菌孢子考虑为念珠菌的定植状态，如有念珠菌假菌丝，考虑念珠菌具有一定的繁殖能力，结合临床决定是否需要进一步抗真菌治疗。二、Nugent评分03分为正常46分临界范围》7分为BV三、功能测定1、过氧化氢(阴道乳酸杆菌标志物)阴性乳酸杆菌正常阳性乳酸杆菌减少2、唾液酸苷酶(加德纳菌，游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物)阴性未检测出BV致病菌阳性检测出BV致病菌3、白细胞脂酶(炎性细胞的标志物)阴性未检测出炎性细胞阳性炎性细胞以上三项指标检测结果参考以下表1。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>权利要求1、一种新的阴道微生态评价体系，其特征在于，所述体系包括以下阴道微生态测评项目1)菌群密集度；2)菌群多样性；3)优势菌；以及4)原因菌。2、如权利要求1所述的阴道微生态评价体系，其特征在于，所述体系的测评项目进一步包括阴道内pH测定，所述正常阴道pH值范围为3.84.5。3、如权利要求1所述的阴道微生态评价体系，其特征在于，所述体系的测评项目进一步包括在过氧化氢、唾液酸酶和白细胞脂酶方面的功能测定。4、如权利要求l所述的阴道微生态评价体系，其特征在于，所述菌群密集度测评项目分为IIV级，其中，使用油镜、放大100倍观察，每视野平均细菌数1个9个为I级；油镜下、放大100倍观察，每视野平均细菌数10个99个为II级；油镜下、放大IOO倍观察，每视野平均细菌数在IOO个以上，光镜下观察细菌满视野为III级；光镜下观察细菌聚集成团、或密集覆盖粘膜上皮细胞为IV级。5、如权利要求l所述的阴道微生态评价体系，其特征在于，所述菌群多样性测评项目分为IIV级，其中，能辨别13种细菌为I级；能辨别46种细菌为II级；能辨别710种细菌为III级；能辨别11种以上细菌为IV级。6、如权利要求1所述的阴道微生态评价体系，其特征在于，所述优势菌为革兰阳性球菌、革兰阳性小杆菌、革兰阳性大杆菌、革兰阴性小杆菌、革兰阴性大杆菌、和/或革兰阴性弧形菌。7、如权利要求1所述的阴道微生态评价体系，其特征在于，所述原因菌为真菌和/或滴虫。8、一种用于测评阴道微生态的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括1)菌群密集度观测仪器；2)菌群多样性观测仪器；3)优势菌检测试剂；以及5)原因菌检测试剂。9、如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括过氧化氢、唾液酸苷酶和白细胞脂酶功能测定试剂。全文摘要本发明涉及医学微生态领域，尤其涉及一种新的阴道微生态评价体系，以及一种用于测评阴道微生态的试剂盒。本发明的阴道微生态体系包括以下测评项目菌群密集度、菌群多样性、优势菌、以及原因菌。使用本发明的体系可以一次性快速诊断临床常见的三大阴道炎症BV、VVC、滴虫，还可以发现阴道炎症患者阴道微环境存在的问题。最重要的是，还可以对目前临床上有白带增多、外阴瘙痒等症状而无特殊病原菌的现有方法难以诊断的阴道炎症患者进行微生态评价，指导临床用药，评估预后，从而达到指导临床治疗的目的。文档编号G01N33/50GK101294952SQ20071009861公开日2008年10月29日申请日期2007年4月23日优先权日2007年4月23日发明者刘朝晖,廖秦平申请人:廖秦平;刘朝晖