专利名称：大蒜或其制品中氟氯苯菊酯的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种食品中农药残留的测定方法，具体涉及一种大蒜或其制品中氟氯苯菊酯的测定方法。
背景技术：
氟氯苯菊酯是一种合成拟除虫菊酯类杀畜体外寄生虫药。目前，该药物已作为杀螨剂广泛用于蜜蜂饲养过程中[1]，以及农业中的杀虫剂。但这类农药在蜂蜜及农产品中的残留会对人体造成一定的危害，因而引起了人们广泛的关注。国内外对于蜂产品(如蜂蜜、蜂皇浆和蜂花粉)中的氟氯苯菊酯残留检测已有较多的文献[2_5]及标准[6_8]。检测方法也有多种，如气相色谱法&12]、液相色谱法[13]和气相色谱一质谱法[+15]，但在农产品中和大蒜及其产品中的检测尚未见文献报道。

发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种大蒜或其制品中氟氯苯菊酯的测定方法。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案一种大蒜或其制品中氟氯苯菊酯的测定方法，它包括以下步骤(I)提取称取鲜大蒜并放于容器中于微波炉中微波处理，或称取大蒜制品放于容器中，向容器中加入体积比为1:1的正己烷二氯甲烷，经均质和/或离心处理，静置后体系分为有机相和无机相，将有机相用氮气吹干，残渣用正己烷溶解，待净化；(2)净化将氨基柱依次用丙酮和正己烷预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入步骤(I)制得的待净化溶液，接收洗脱液，并用体积比为1:1的正己烷二氯甲烷洗脱，得净化液；净化液用氮气吹干，残渣用体积比为10:90的丙酮正己烷溶解，过
0.22um滤膜待上机测定；(3)检测净化液用气相色谱法或气相色谱/串联质谱法测定大蒜或其制品中的
氟氯苯菊酯。所述大蒜制品是指盐溃蒜、蒜泥、脱水蒜片/粉/粒等。作为本发明进一步优选，步骤(I)中所述大蒜的提取过程是称取鲜蒜样品20. 00g，精确到0. Olg，置于150mL锥形瓶中，于微波炉中640w微波40-60s后，剪碎，准确加A 50. OmL体积比为1:1的正己烧:二氯甲烧，18000r/min均质提取3min.提取液滤入预先放有5-10gNaCl的比色管中，盖上塞子，剧烈振摇lmin，静置30min，有机相和水相分层后，准确移取25mL有机相于25mL比色管中，50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，待净化。步骤(I)中所述大蒜制品为干样制品时的提取过程是称取大蒜干样制品10. 00g，精确到O.Olg，置于IOOmL塑料离心管中，加入20mL体积比为1:1的正己烷:二氯甲烧18000r/min均质,3000r/min离心5min,提取液滤入50mL比色管中，残洛再用20mL体积比为I: I的正己烷二氯甲烷提取一次，提取液一并滤入比色管中，样液于50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，待净化。步骤(I)中所述大蒜制品为湿样制品时的提取过程是称取大蒜湿样制品20. 00g，精确到O.Olg，置于150mL锥形瓶中，准确加入50. OmL体积比为1:1的正己烷:二氯甲烧，18000r/min均质提取3min.样液滤入预先放有5_10gNaCl的比色管中，盖上塞子，剧烈振摇lmin，静置30min，有机相和水相分层后，准确移取25mL有机相于25mL比色管中，50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，待净化。步骤(2)中净化的具体步骤是将氨基柱依次用3. OmL丙酮和5mL正己烷预淋洗，使之活化，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用IOmL尖形离心管接收洗脱液，用3. OmL正己烷二氯甲烷(1+1)洗脱，并重复一次。净化液于50°C水浴中氮吹至近干，准确加入I. OmL丙酮+正己烷(10+90，v/v)溶解残渣后，过O. 22um滤膜上机测定。 步骤(3)中当用气相色谱法测定时的色谱条件是GC/ μ E⑶色谱柱ΗΡ-5弹性石英毛细管柱，30mX0. 32mm i. d. , O. 25μπι;载气:高纯氮气(99. 999%);流速1. 5ml/min ;进样方式不分流进样；柱温初始180°C (Imin)以10°C /min程序升温至300°C (15min)；进样口温度280°C ;检测器温度310°C ;进样量I. Oy L。步骤(3)中当用气相色谱/串联质谱法时的色谱条件是GC/MS/MS:色谱柱HP-5MS(30mX0. 25mm i. d.，O. 25 μ m)弹性石英毛细管柱；载气:高纯氦气(99. 999%);碰撞气:高纯氮(99. 999%);流速:1. 0ml/min ;进样方式不分流进样；柱温初始180°C (Imin)以10°C /min程序升温至300°C (15min);进样口温度280°C ;进样量I. OyL;离子源EI源；离子源温度230°C ;四级杆温度150°C ;色谱-质谱接口温度280°C ;溶剂延迟5min ；扫描方式多反应监测模式(MRM)，母离子239，子离子为203，168，159，碰撞能量为15ev。实验例I仪器与试剂Agilent6890气相色谱仪，配有电子捕获检测器；Agilent7890/7000B三重四级杆气相色谱/串联质谱仪(GC-MS/MS);均质器；2. OmL注射器；50mL比色管；氮吹仪；150mL锥形瓶；25mL比色管；10mL尖头离心管。二氯甲烷色谱纯；丙酮色谱纯；正己烷色谱纯；氟氯苯菊酯有证标准物质；溶剂丙酮+正己烷(10+90，v/v);洗脱液正己烷二氯甲烷(1+1)2标准溶液配制标准储备液准确称取适量氟氯苯菊酯(精确到0. OOOlg)，用丙酮溶解，配置成浓度为500 μ g/mL的储备液，在0-4°C冰箱避光、密封保存，保存期为一年。准确移取适量标准溶液，用丙酮+正己烷(10+90，v/v)稀释成50，100，200，500，1000ng/mL标准工作液,现配现用。3样品提取与净化3. I 提取鲜蒜样品称取约20. 00g(精确到0. 01g)，置于150mL锥形瓶中，于微波炉中640w微波40-60s后，剪碎，准确加入50. OmL正己烷二氯甲烷(1+1)，18000r/min均质提取3min.样液滤入预先放有5-10gNaCl的比色管中，盖上塞子，剧烈振摇lmin，静置30min，有机相和水相分层后，准确移取25mL有机相于25mL比色管中，50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，待净化。大蒜干样制品(脱水蒜片/粉/粒等):称取约10. OOg (精确到0. Olg),置于IOOmL塑料离心管中，加入2OmL正己烧二氯甲烧(1+1) 18000r/min均质，3000r/min离心5min,提取液滤入50mL比色管中，残渣再用20mL正己烷二氯甲烷(1+1)提取一次，提取液一并滤入比色管中，样液于50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，待净化。大蒜湿样制品(盐溃蒜/蒜泥等)称取约20. OOg (精确到0. Olg),置于150mL维形瓶中，准确加入50. OmL正己烧二氯甲烧(1+1), 18000r/min均质提取3min.样液滤入预先放有5-10gNaCl的比色管中，盖上塞子，剧烈振摇lmin，静置30min，有机相和水相分层后，准确移取25mL有机相于25mL比色管中，50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，待净化。3. 2 净化
将氨基柱依次用3. OmL丙酮和5mL正己烷预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用IOmL尖形离心管接收洗脱液，用3. OmL正己烷二氯甲烷(1+1)洗脱，并重复一次。净化液于50°C水浴中氮吹至近干，准确加入I. OmL丙酮+正己烷(10+90，v/v)溶解残渣后，过0. 22um滤膜上机测定。4色谱条件GC/ u ECD :色谱柱HP-5(30mX0. 32mm i. d. , 0. 25 u m)弹性石英毛细管柱；载气高纯氮气(99. 999%);流速1. 5ml/min ;进样方式不分流进样；柱温初始180°C (lmin)以10°C /min程序升温至300°C (15min);进样口温度280°C ;检测器温度310°C ;进样量
I.0 u L。GC/MS/MS :色谱柱HP-5MS (30mX0. 25mm i. d. , 0. 25 u m)弹性石英毛细管柱；载气高纯氦气(99. 999%);碰撞气高纯氮(99. 999%);流速1. Oml/min ;进样方式不分流进样；柱温初始180°C (lmin)以10°C /min程序升温至300°C (15min);进样口温度280°C;进样量LOiiL ;离子源EI源；离子源温度230°C ;四级杆温度150°C ;色谱-质谱接口温度2800C ;溶剂延迟5min ;扫描方式多反应监测模式(MRM)，母离子239，子离子为203，168，159，碰撞能量为15ev。5.结果与讨论5. I色谱条件的优化氟氯苯菊酯沸点较高，难于挥发，在检测过程中提高其起始柱温(180°C)，减少了检测时间，同时在检测过程中采用程序升温的方法，有效改善了峰形。进样口温度设为280°C，可以避免残留。气相色谱法分离100ng/mL氟氯苯菊酯色谱图如图I所示。气相色谱_串联质谱分离500ng/mL氟氯苯菊酯色谱图如图2a、图2b所示。5. 2前处理条件优化5.2. I提取溶剂比较了二氯甲烷-正己烷(1+1，体积比)、乙腈和丙酮的提取效果，采用“3. I提取”中的提取方法，替换不同的提取溶液进行试验。结果表明，利用二氯甲烷-正己烷作为提取溶剂，回收率更高。对比实验数据见表
表I不同提取溶剂对回收率(％)的影响
权利要求
1.一种大蒜或其制品中氟氯苯菊酯的测定方法，其特征在于，它包括以下步骤 (1)提取称取大蒜并放于容器中于微波炉中微波处理，或称取大蒜制品放于容器中，向容器中加入体积比为1:1的正己烷二氯甲烷，经均质和/或离心处理，静置后体系分为有机相和无机相，将有机相用氮气吹干，残渣用正己烷溶解，得待净化溶液； (2)净化将氨基柱依次用丙酮和正己烷预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入步骤(I)制得的待净化溶液，接收洗脱液，并用体积比为1:1的正己烷二氯甲烷洗脱，得净化液；净化液用氮气吹干，残渣用体积比为10:90的丙酮正己烷溶解，过O. 22um滤膜上机测定； (3)检测净化液用气相色谱法或气相色谱/串联质谱法测定大蒜或其制品中的氟氯苯菊酯。
2.如权利要求I所述的测定方法，其特征在于，步骤(I)中所述大蒜的提取过程是称取鲜蒜样品20. 00g，精确到O. Olg，置于150mL锥形瓶中，于微波炉中640w微波40_60s后，剪碎,准确加入50. OmL体积比为1:1的正己烧:二氯甲烧，18000r/min均质提取3min,提取液滤入预先放有5-10gNaCl的比色管中，盖上塞子，剧烈振摇lmin，静置30min，有机相和水相分层后，准确移取25mL有机相于25mL比色管中，50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，得待净化溶液。
3.如权利要求I所述的测定方法，其特征在于，步骤(I)中所述大蒜制品为干样制品时的提取过程是称取大蒜干样制品10. 00g，精确到O. 01g，置于IOOmL塑料离心管中，加入20mL体积比为1:1的正己烧:二氯甲烧18000r/min均质，3000r/min离心5min,提取液滤入50mL比色管中，残渣再用20mL体积比为1:1的正己烷二氯甲烷提取一次，提取液一并滤入比色管中，样液于50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，得待净化溶液。
4.如权利要求I所述的测定方法，其特征在于，步骤(I)中所述大蒜制品为湿样制品时的提取过程是称取大蒜湿样制品20. 00g，精确到0. 01g，置于150mL锥形瓶中，准确加入50. OmL体积比为1:1的正己烧:二氯甲烧，18000r/min均质提取3min,样液滤入预先放有5-10gNaCl的比色管中，盖上塞子，剧烈振摇lmin，静置30min，有机相和水相分层后，准确移取25mL有机相于25mL比色管中，50°C水浴氮气吹至近干，用2. OmL正己烷溶解残渣，得待净化溶液。
5.如权利要求I所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中净化的具体步骤是将氨基柱依次用3. OmL丙酮和5mL正己烷预淋洗，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用IOmL尖形离心管接收洗脱液，用3. OmL体积比为1:1的正己烷二氯甲烷洗脱，并重复一次；净化液于50°C水浴中氮吹至近干，准确加入I. OmL体积比为10:90的丙酮正己烷溶解残渣后，过0. 22um滤膜待上机测定。
6.如权利要求I所述的测定方法，其特征在于，步骤(3)中当用气相色谱法测定时的色谱条件是 GC/ μ ECD :色谱柱ΗΡ-5弹性石英毛细管柱，30mX0. 32mm i. d.，O. 25μπι ;载气高纯氮气；流速1. 5ml/min ;进样方式不分流进样；柱温初始180°C保持lmin,然后以10°C /min程序升温至300°C，保持15min ;进样口温度280°C;检测器温度310°C;进样量I. O μ L。
7.如权利要求I所述的测定方法，其特征在于，步骤(3)中当用气相色谱/串联质谱法时的色谱条件是GC/MS/MS :色谱柱:HP-5MS弹性石英毛细管柱，30mX 0.25mm i. d.，O. 25 μ m ;载气高纯氦气；碰撞气高纯氮；流速1. Oml/min ;进样方式不分流进样；柱温初始180°C保持Imin，然后以10°C /min程序升温至300°C，保持15min ;进样口温度280°C;进样量l.OyL;尚子源EI源；尚子源温度 230 C ；四级杆温度150 C ;色谱_质谱接口温度280 C ;溶剂延迟5min ;扫描方式多反应监测模式，母离子239，子离子为203，168，159，碰撞能量为15ev。
全文摘要
本发明提供了一种大蒜或其制品中氟氯苯菊酯的测定方法，它包括以下步骤(1)提取将大蒜或大蒜制品采用体积比为1:1的正己烷:二氯甲烷，经均质和/或离心处理，将有机相用氮气吹干，残渣用正己烷溶解，待净化；(2)净化将氨基柱条件化后，倒入待净化溶液，接收洗脱液，并用体积比为1:1的正己烷:二氯甲烷洗脱，得净化液；净化液用氮气吹干，残渣用体积比为10:90的丙酮:正己烷溶解，过0.22um滤膜；(3)检测净化液用气相色谱法或气相色谱/串联质谱法测定大蒜或其制品中的氟氯苯菊酯。本发明采用气相色谱检测或采用串联质谱确证。该方法操作简单，灵敏度高，重现性好，可广泛应用于大蒜或其制品中氟氯苯菊酯的残留检测。
文档编号G01N30/88GK102798682SQ20121029870
公开日2012年11月28日 申请日期2012年8月16日 优先权日2012年8月16日
发明者包海英, 高尧华, 李建勇, 李晓明, 王飞, 夏芳, 刘友清 申请人:济南出入境检验检疫局检验检疫技术中心