专利名称：快速检测胎膜早破的检测工具与检测盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于医用检测工具，特别涉及一种检测妊娠期妇女胎膜早破的检测工 具。
背景技术：
临产前的胎膜破裂称为胎膜早破(Premature Rupture of Fetal Membrane，简称 PROM)。胎膜早破是引起产科病人产前、产后并发症的主要因素，是导致胎儿早产和必须入 住新生儿重症监护室(NI⑶)的主要原因，所以，对胎膜早破患者的管理成本高、难度大。因 此，准确及时诊断孕妇是否发生胎膜早破至关重要。现有技术中，采用金标准是诊断胎膜早破的一种准确方法，即在孕妇羊膜腔内注 入染料(如美蓝)，若阴道内有被染料着色的液体流出即可诊断为胎膜早破，但采用金标准 检测临床很难操作，并且造成患者的痛苦，故临床很少使用。临床上通常采用询问病史、患 者自诉阴道有羊水流出、阴道液PH值变为偏碱性(正常阴道分泌液pH为4. 5 5. 5，而羊 水PH值为7. 0 7. 5)、显微镜下查见阴道分泌物涂片中出现羊水结晶等方法，这些方法虽 然操作简单，但准确性、敏感性均较低。
发明内容本实用新型的目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测胎膜早破的检测工具 和检测盒，使用所述检测工具和检测盒，不仅能实现无创检测，而且能快速获得准确的检测结果。本实用新型所述快速检测胎膜早破的检测工具以胰岛素样生长因子结合蛋白 1 (Insulin-like growth factor-binding protein 1，简称 IGFBP-1，下文中，以“IGFBP-1” 表示胰岛素样生长因子结合蛋白1)为检测指标，所述IGFBP-1是一种胰岛素和孕酮依赖蛋 白，分子量为25kDa，负责机体内胰岛素样生长因子的储存和转运。IGFBP-1主要由蜕膜细 胞、胎儿及成人肝脏、卵巢颗粒细胞合成并分泌，可出现于妊娠妇女的血清和羊水中，羊水 中IGFBP-1的质量浓度比血清中的质量浓度高出100 1000倍。IGFBP-1是妊娠3个月后 出现于羊水中的最主要的蛋白质。胎膜早破时将有羊水漏出，羊水中的IGFBP-1则会出现 在宫颈粘液中，用本实用新型所述检测工具检测妊娠妇女的阴道分泌物，即可判断是否发 生胎膜早破。本实用新型所述快速检测胎膜早破的检测工具，包括衬片，由上至下依次相接粘 贴在衬片上的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫；所述硝酸纤维素膜上设置有由兔抗 人IGFBP-1多克隆抗体包被形成的检测线和由羊抗鼠IGFBP-1多克隆抗体包被形成的控制 线，检测线位于控制线之下且相隔一间距，所述金标垫为包被有金标鼠抗人IGFBP-1单克 隆抗体结合物的吸水纤维且被样品垫部分覆盖。本实用新型所述快速检测胎膜早破的检测盒，由盒体和装入盒体内的上述检测工 具构成；所述盒体的内腔与检测工具的形状和尺寸相匹配，所述盒体的顶壁设置有检测工具插入孔，侧壁设置有加样孔和观察孔，所述加样孔的设置位置与检测工具装入盒体后其 样品垫的位置相对应，所述观察孔的设置位置与检测工具装入盒体后其检测线和控制线的 位置相对应。上述检测工具中，所述检测线和控制线的宽度优选0. 8mm 1mm ；所述检测线与控 制线之间的间距优选10mm 12mm。检测工具的形状无严格要求，从节约成本、方便制作的 角度考虑，其形状优选矩形条。所述吸水垫是由吸水纸制作的垫体，样品垫是由吸水纤维制 作的垫体，即为吸水纤维垫。本实用新型所述检测工具和检测盒具有以下有益效果1、使用本实用新型所述检测盒对确诊胎膜破裂组、确诊胎膜未破组和疑似胎膜破 裂组妊娠妇女进行采样检测，检测结果表明，准确率达100%。2、使用本实用新型所述检测盒，检测一个样品仅需5-10分钟，与现有方法相比， 检测速度大幅度提高。3、由于检测样品是妊娠妇女的阴道分泌物，因而是一种无创检测。4、使用本实用新型所述检测盒进行检测，操作简单，无论在妇产科诊所、医院或家 庭，均可获得同样准确的结果。5、本实用新型所述检测工具和检测盒结构简单，易于加工制作，生产成本低，便于 工业化生产。本实用新型所述检测工具和检测盒适用于所有妊娠期妇女，尤其是存在早产风 险、腹部受到损伤的妊娠期妇女。

图1是本实用新型所述快速检测胎膜早破的检测工具的一种结构示意图；图2是图1的左视图；图3是本实用新型所述快速检测胎膜早破的检测盒盒体的一种结构示意图；图4是图3的俯视图；图5是图3的A-A剖视图；图6是本实用新型所述快速检测胎膜早破的检测盒的一种结构示意图。图中， 1-衬片、2-吸水垫、3-控制线、4-检测线、5-硝酸纤维素膜、6-金标垫、7-样品垫、8-盒体、 9_观察孔、10-加样孔、11-检测工具插入孔；12-检测工具、13-待测样品中的IGFBP-1。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型所述检测工具和检测盒的结构、制作方法和使用方法 做进一步说明。实施例1本实施例中，快速检测胎膜早破的检测工具如图1、图2所示，其形状为矩形条，其 构造包括衬片1，由上至下依次相接粘贴在衬片上的吸水垫2、硝酸纤维素膜5、金标垫6和 样品垫7，所述金标垫6被样品垫部分覆盖。衬片1由医用塑料高白度PVC片材制作，上面 涂布压敏胶，对生物活性分子具有惰性；吸水垫2为吸水纸，硝酸纤维素膜5上设置有由兔 抗人IGFBP-1多克隆抗体(Santz Cruz公司)包被形成的检测线4和由羊抗鼠IGFBP-1多克隆抗体(上海派坤生物工程有限公司)包被形成的控制线3 (兔抗人IGFBP-1多克隆抗体 和羊抗鼠IGFBP-1多克隆抗体在硝酸纤维素膜上的包被方法见论文“AFP免疫层析测试条 的研制”，侯惠仁、吴冯波、陈键、刘一兵、贺佑丰，《同位素》，2000，13(3) 124-126)，检测线4 位于控制线3之下，它们的宽度均为1mm (或0. 8mm或0. 9mm)，它们之间的间距为10mm (或 11mm或12mm)，金标垫6为包被有金标鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体结合物的玻璃纤维膜或 聚酯纤维膜，样品垫7为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜。金标垫6的制备方法如下(1)胶体金的制备取0. Olg氯金酸溶解于100ml三蒸水中，形成氯金酸水溶液；将100ml氯金酸水溶 液加热至沸腾，在搅拌下加入浓度为10g/100ml的柠檬酸三钠水溶液1. 5ml，再煮沸至呈现 透明的橙红色(约7 10分钟)，冷却至室温后用浓度为0. 2mol/L的K2C03溶液调节其pH 至7. 0-7. 2，获胶体金；(2)金标鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体结合物的制备在步骤⑴制备的100ml胶体金中加入200 ii g鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体 (Thermoscientific公司)，搅拌混合均勻后加入250mg牛血清白蛋白(BSA,Roche公司)， 再搅拌混合均勻后加入浓度为10g/100ml的NaCl溶液，NaCl溶液的加入量以胶体金溶液 中NaCl的浓度达到lg/100ml为限。继后分别以2，000转/分、4，000转/分、10，000转/ 分的条件各离心10分钟，获得的分离产物即为金标鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体结合物，将 所述结合物溶于PH 7. 2的磷酸盐缓冲液(PBS，含0. 09%叠氮钠)中，4°C贮存备用；(3)金标垫的制备用浓度为0. 5g/100ml的牛血清白蛋白(BSA，Roche公司)溶液在22°C 25°C浸泡 玻璃纤维膜或聚酯纤维膜1小时后，将步骤(2)制备的金标鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体结 合物包被在玻璃纤维膜或聚酯纤维膜上(包被方法见论文“AFP免疫层析测试条的研制”， 侯惠仁、吴冯波、陈键、刘一兵、贺佑丰，《同位素》，2000，13(3) :124-126)，即获得金标垫。所述检测工具的制备，可将片状吸水垫2、硝酸纤维素膜5、金标垫6和样品垫7粘 在片状衬片上，然后切成矩形条。实施例2本实施例中，快速检测胎膜早破的检测盒的形状和构造如图6所示，由盒体8和装 入盒体内的检测工具12构成。所述检测工具12为实施例1所述形状和构造的检测工具。 所述盒体8用医用塑料制作，如图3、图4、图5所示，外形为长方体，内腔与检测工具的形状 和尺寸相匹配，其顶壁设置有检测工具插入孔11，其侧壁设置有加样孔10和观察孔9，所述 加样孔10的设置位置与检测工具装入盒体后其样品垫7的位置相对应，所述观察孔9的设 置位置与检测工具装入盒体后其检测线4和控制线3的位置相对应。所制作的检测盒用放 置有干燥剂的铝箔袋密封封装备用。所述检测盒的使用方法和检测原理如下将待测样品从盒体8的加样孔10加入检测工具的样品垫7，由于层析原理，待测 样品从样品垫7沿条状检测工具向上移动，当移动至金标垫6，将金标鼠抗人IGFBP-1单克 隆抗体结合物溶解，并带着金标鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体继续向上移动，当移动至硝酸 纤维素膜上的检测线4，如果样品中有IGFBP-1抗原存在，检测线4上的兔抗人IGFBP-1多 克隆抗体和金标鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体与样品中的IGFBP-1抗原将会在检测线上形成一条紫红色的夹心免疫复合物，检测线上可见一条清晰的紫红色线，此结果判为阳性；样品 中的IGFBP-1抗原含量越高，色线颜色越深。如果样品中没有IGFBP-1抗原，金标鼠抗人 IGFBP-1单克隆抗体则不会与检测线上的兔抗人IGFBP-1多克隆抗体形成复合物，检测线 上没有色线出现，此结果判定为阴性。当待测样品和金标鼠抗人IGFBP-1单克隆抗体继续 向上移动至控制线3时，控制线上的羊抗鼠IGFBP-1多克隆抗体将会与金标鼠抗人IGFBP-1 单克隆抗体结合，在控制线上形成一条红色或紫红色线，证明测试工具有效。检测结果通过 盒体上的观察孔9观察获得。
权利要求一种快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于包括衬片(1)，由上至下依次相接粘贴在衬片上的吸水垫(2)、硝酸纤维素膜(5)、金标垫(6)和样品垫(7)，所述硝酸纤维素膜(5)上设置有由兔抗人胰岛素样生长因子结合蛋白1多克隆抗体包被形成的检测线(4)和由羊抗鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1多克隆抗体包被形成的控制线(3)，检测线位于控制线之下且相隔一间距，所述金标垫(6)为包被有金标鼠抗人胰岛素样生长因子结合蛋白1单克隆抗体结合物的吸水纤维且被样品垫部分覆盖。
2.根据权利要求1所述的快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于所述检测线(4) 和控制线(3)的宽度为0. 8mm 1mm。
3.根据权利要求1或2所述的快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于所述检测线 ⑷与控制线⑶之间的间距为10mm 12mm。
4.根据权利要求1或2所述的快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于它的形状为 矩形条。
5.根据权利要求3所述的快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于它的形状为矩形^^ o
6.根据权利要求1或2所述的快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于所述吸水垫 (2)为吸水纸，样品垫(7)为吸水纤维垫。
7.根据权利要求3所述的快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于所述吸水垫(2) 为吸水纸，样品垫(7)为吸水纤维垫。
8.根据权利要求4所述的快速检测胎膜早破的检测工具，其特征在于所述吸水垫(2) 为吸水纸，样品垫(7)为吸水纤维垫。
9.一种快速检测胎膜早破的检测盒，由盒体(8)和装入盒体内的检测工具构成；所述 检测工具包括衬片(1)，由上至下依次相接粘贴在衬片上的吸水垫(2)、硝酸纤维素膜(5)、 金标垫(6)和样品垫(7)，所述硝酸纤维素膜(5)上设置有由兔抗人胰岛素样生长因子结合 蛋白1多克隆抗体包被形成的检测线(4)和由羊抗鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1多克隆 抗体包被形成的控制线(3)，所述检测线位于控制线之下且相隔一间距，所述金标垫(6)为 包被有金标鼠抗人胰岛素样生长因子结合蛋白1单克隆抗体结合物的吸水纤维且被样品 垫部分覆盖；所述盒体的内腔与检测工具的形状和尺寸相匹配，所述盒体的顶壁设置有检 测工具插入孔(11)，侧壁设置有加样孔(10)和观察孔(9)，所述加样孔(10)的设置位置与 检测工具装入盒体后其样品垫(7)的位置相对应，所述观察孔(9)的设置位置与检测工具 装入盒体后其检测线(4)和控制线(3)的位置相对应。
10.根据权利要求9所述的快速检测胎膜早破的检测盒，其特征在于所述检测工具的 形状为矩形条。
专利摘要一种快速检测胎膜早破的检测工具，包括衬片，由上至下依次相接粘贴在衬片上的吸水垫、硝酸纤维素膜、金标垫和样品垫；所述硝酸纤维素膜上设置有由兔抗人胰岛素样生长因子结合蛋白1多克隆抗体包被形成的检测线和由羊抗鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1多克隆抗体包被形成的控制线，检测线位于控制线之下且相隔一间距，所述金标垫为包被有金标鼠抗人胰岛素样生长因子结合蛋白1单克隆抗体结合物的吸水纤维且被样品垫部分覆盖。一种快速检测胎膜早破的检测盒，由盒体和装入盒体内的上述检测工具构成；盒体的内腔与检测工具的形状和尺寸相匹配，其顶壁设置有检测工具插入孔，侧壁设置有加样孔和观察孔。
文档编号G01N33/577GK201583543SQ20102003762
公开日2010年9月15日 申请日期2010年1月11日 优先权日2010年1月11日
发明者周容, 张 林, 王涛, 胡怀忠 申请人:四川大学华西第二医院