专利名称：癌症快速尿检试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的肿瘤普查筛检用尿检测试剂，特别是癌症快速尿检试剂。
癌症的早期诊断是肿瘤二级预防中最关键的一步，只有在早期诊断的基础上才能进行早期治疗，降低死亡率，提高生存率。无症状人群的癌症普查筛检又是早期诊断的主要手段之一。尿中肿瘤标志物的检测是目前研究的热点之一。尿中肿瘤标志物主要分两大类一类是特异性蛋白质，如本一周氏蛋白、硫酸脂酶等；另一类则是肿瘤代谢产物，如核酸代谢产物多胺、氨基酸代谢产物5-羟吲哚乙酸、对羟基苯丙酮酸等。对后者的检测方法很多，其中包括含汞试剂。最近的相关技术专利为欧洲专利EP341803和中国专利《癌症显示剂》CN1096374A(申请号93106885.1)，它们分别提出了较为实用的含汞尿检试剂配方，其共同点是均采用了两种汞离子Hg22+和Hg2+，将二者按一定比例溶解在酸性溶液中，即得专利所述试剂。该试剂中的两种汞离子分别与尿中的不同成分反应，Hg22+与底物对羟基苯丙酮酸反应生成红色沉淀，Hg2+与其他阴离子反应(如Cl-、NO2-等)生成白色沉淀。中国专利CN1096374提出加入金属镍，用以稳定反应产生的红色沉淀。上述现有技术所提供的试剂在应用中有一定效果，特异性、灵敏度较高，但仍有不足之处，中国专利CN1096374所提供的试剂，其假阳性率偏高，大于10％，不适用于肿瘤的普查筛检，EP341803的标本检测数较少，因而统计学结果可靠性不强。
本发明的目的是针对现有技术的缺陷和不足，提出一种新配方的癌症快速尿检试剂，同时引入新组分，以提高试剂的稳定性、灵敏度及应用范围。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的。
一种癌症快速尿检试剂，它是硝酸和硫酸的混合酸性溶液，其中含有硝酸亚汞和硫酸汞，硝酸亚汞作为Hg22+的供体溶解于硝酸溶液中，硫酸汞作为Hg2+的供体溶解于硫酸溶液中，它还含有硝酸镍和/或醋酸镍，作为Ni2+供体，另外还含有α-亚硝基-β-萘酚，它们分别溶解于硝酸溶液中作为组分，Hg2+、Hg22+、Ni2+和α-亚硝基-β-萘酚四种组分的重量比为Hg2+∶Hg22+∶Ni2+∶α-业硝基-β-萘酚＝1～1.5∶1.2～1.8∶0.2～0.4∶0.05～0.1本发明将Hg2+、Hg22+、Ni2+和α-亚硝基-β-萘酚分别溶解于相应的酸溶液中，然后按一定比例混合，得到一种新的癌症快速尿检试剂。该试剂能与尿中色氨酸、酪氨酸的衍生物及含有此类氨基酸残基的变性蛋白发生具特异性颜色的沉淀反应，尿中这些氨基酸及其衍生物的代谢量随恶性肿瘤的有无及病情变化而不同，因此沉淀反应呈现不同颜色，颜色判断标准为根据大量实验资料制成的比色板。
本发明试剂中的Hg22+可与单羟基酚发生红色络合沉淀反应，Hg2+、Ni2+则优先与尿液中其他阴离子(如卤素离子、亚硝酸根离子)反应生成白色络合物沉淀，从而消除了这些离子对Hg22+的影响。新加入组分α-亚硝基-β-萘酚的作用主要是1.与色氨酸的代谢产物5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸发生反应而生成红色；2.与上述金属离子络合，以稳定试剂体系，这是因为Hg2+、Hg22+易水解，或随温度高低变化而使二者水解或加快氧化还原反应速度而使二者比例发生变化，影响试剂反应灵敏度。加入α-亚硝基-β-萘酚这一新组分后即可起到稳定上述体系的作用。
本发明试剂中以硝酸镍和/或醋酸镍作为Ni2+的供体，从而克服了CN1096374专利中将金属镍溶解于硝酸中带来的缺陷，因为金属镍与硝酸反应产生大量二氧化氮气体和氢气，对操作人员极为有害，且不安全，而利用硝酸镍和/或醋酸镍则可消除对操作人员的不良影响。
因此，本发明试剂的组分为硝酸亚汞作为Hg22+的供体溶解于12N硝酸溶液中，硫酸汞作为Hg2+的供体溶解于6N硫酸溶液中，硝酸镍和/或醋酸镍与α-亚硝基-β-萘酚分别溶于硝酸溶液中，以上四种组分的重量比为Hg2+∶Hg22+∶Ni2+∶α-亚硝基-β-萘酚＝1～1.5∶1.2～1.8∶0.2～0.4∶0.05～0.1通过调节上述比例，可调节该试剂的敏感性和特异性。
本发明的效果癌症快速尿检试剂应用于肿瘤普查筛检快速、简便、无创伤、无痛苦，且价格低。既可用于大规模肿瘤普查，也可用于肿瘤高危人群的家庭自检，真正做到早筛查、早预防、早诊断、早治疗。用本试剂检测各类已确诊的恶性肿瘤患者216例，阳性176例，阳性率为81.5％。用本试剂筛查一般人群306例，阳性6例，阳性率为1.96％。按统计学原理对上述结果进行数据处理可得敏感率＝81.5％、特异性＝98.0％、诊断效率＝79.9％、粗符合率＝91.2％、校正符合率＝91.1％(《当代肿瘤学杂志》)，1995，2(2)P84～85)。本试剂用于家庭自检时的辅助作用是还可定性检测出下限1mg的尿中尿胆元及尿中胆红素，如使用本试剂后尿液样本呈灰色或灰黑色至绿色沉淀，则提示被测者肝胆功能异常，需进一步检查。
实施例称取140～180克HgSO4溶于1000m 16N的硫酸溶液，为A液；称取320～380克Hg2(NO3)2·2H2O溶于500ml 12N的硝酸溶液，为B液；称取1.5～3克Ni(NO3)2·6H2O溶于50ml 12N的硝酸溶液，为C液；称取1.2～2克α-亚硝基-β-萘酚溶于50ml 6N的硝酸溶液，为D液。
将上述四种液体按如下体积比仔细混合，即得到符合四种组分重量比的癌症快速尿检试剂VA∶VB∶VC∶VD＝7.5∶2.4∶0.05∶0.05检测方法取尿液2～3ml，加入本试剂0.4ml，振匀后静置2分钟，观察沉淀及上清液颜色，与比色板对照，红色或褐红色为阳性，淡黄色或白色为阴性。
权利要求
1.一种癌症快速尿检试剂，它是硝酸和硫酸的混合酸性溶液，其中含有硝酸亚汞和硫酸汞，硝酸亚汞作为Hg22+的供体溶解于硝酸溶液中，硫酸汞作为Hg2+的供体溶解于硫酸溶液中，其特征在于它还含有作为Ni2+供体的硝酸镍和/或醋酸镍，以及α-亚硝基-β-萘酚，它们分别溶解于硝酸溶液中作为组分，Hg2+、Hg22+、Ni2+和α-亚硝基-β-萘酚四种组分的重量比为∶Hg2+∶Hg22+∶Ni2+∶α-亚硝基-β-萘酚＝1～1.5∶1.2～1.8∶0.2～0.4∶0.05～0.1。
全文摘要
本发明涉及一种新的肿瘤普查筛检用尿检测试剂,特别是癌症快速尿检试剂,它是硝酸和硫酸的混合酸溶液,其中含有硝酸亚汞和硝酸汞,还含有硝酸镍和/或醋酸镍,以及α－亚硝基－β－萘酚,Hg
文档编号G01N21/78GK1174329SQ9610918
公开日1998年2月25日 申请日期1996年8月16日 优先权日1996年8月16日
发明者史宗洁, 王耀明 申请人:施瑞生物技术(深圳)有限公司