专利名称：人血铜锌超氧化物歧化酶彩色免疫测定板的制作方法
技术领域：
本发明是用于测定人血红细胞中铜、锌一超氧化物歧化酶(CuproZinc-SuperoxideDismutase，Cu、Zn-SOD)含量的彩色免疫板。
目前测定Cu、Zn-SOD的方法有联大茴香胺法、化学发光法等，都是利用SOD歧化超氧化物阴离子自由基(O-2)生成过氧化氢和氧这一原理，间接地测定有活性部分SOD含量，不能测定SOD总含量。而用免疫学方法测定SOD总含量，测定程序复杂，流程长，只限于实验室使用，推广困难。
为了解决这个问题，使SOD测定做为诊断和辅助诊断的检查手段应用到临床医院，制成用指示剂衬托沉淀环位置的彩色免疫板，但由于血样品为溶血液而非无色的血清，血红蛋白干扰测定的问题未能消除。
本发明的目的在于提供一种人血SOD彩色免疫测定板。它能简便、快速而准确的测定人血Cu、Zn-SOD的含量，消除了血红蛋白对测定的干扰，省略了常规方法浸洗、染色、脱色等繁琐步骤。
本发明是这样实施的在灌制彩色免疫板的溶液中加入某些蛋白染料，如丽春红、氨基黑等，它可以使彩色免疫板中的抗原、抗体被特异染色，在扩散结合成抗原-抗体复合物后，形成颜色深于彩色免疫板底色的沉淀环;还加入了一定浓度的中性盐，使沉淀环通过盐析作用显露出来，使该板颜色柔和，结果清晰，观察清楚。
本发明实施例，SOD彩色免疫板的制作在1%琼脂糖一巴比妥盐酸缓冲液中(离子强度0.025，PH8.2)加入氨基黑染液、指示剂酚酞、防腐剂叠氮钠和中性盐氯化钠，加热溶解后，再加入高效价抗人Cu、Zn-SOD血清，铺在5×10厘米的特制塑料板上，冷却凝固。该塑料板上有三排横向刻度，根据板上刻度按标记打孔，每横排6孔，共18孔，每孔直径3毫米，放置4℃待用。
测定方法取人耳垂血20微升，加入40微升蒸馏水中，使其充分溶血制成溶血液，放置4℃待测。测定时，分别在测定孔中加入标准SOD溶液和待测溶血液各10微升，将该板在室温下放置15小时，可直接读取沉淀环直径，通过计算获得SOD含量，以SOD微克/每克血红蛋白表示。
由于提供这种人血超氧化物歧化酶彩色免疫测定板，使Cu、Zn-SOD的测定可以应用到临床检查。仅用微量耳血，就能快速、准确地测定SOD含量。与其它方法相比，该方法简便，不用特殊试剂和仪器，不受血中其它物质干扰，易于广大医疗，科研单位推广使用，特别是条件较差的基层单位或大量普查时使用更为方便。
权利要求
1.人血铜锌超氧化物歧化酶彩色免没测定板，是利用抗原抗体反应测定人血超氧化物歧化酶总含量的测定板，其特征在于使用纯化的人铜锌超氧化物歧化酶作为抗原制备的高效价抗血清和琼脂糖混合，铺在塑料板上制成。
2.根据权利要求1所说的彩色免疫板，其特征在于制作彩色免疫板的溶液中加入蛋白染料(如氨基黑、丽春红等)，使免疫测定板中的蛋白抗原、抗体被特异染色，在扩散结合成抗原抗体复合物后，形成颜色深于彩色免疫板底色的沉淀环。
3.根据权利要求2所说的彩色免疫测定板，其特征在于制作彩色免疫板的溶液中加入中性盐氯化钠，使沉淀环通过盐析作用显露出来，更为清晰。
4.人血铜锌超氧化物歧化酶彩色免疫板，其特征在于使用方法为采取的微量耳血，加至蒸馏水中充分溶血，制成放置4℃待测的溶血液与标准SOD溶液各10微升，分别置入测定孔中，在室温下放置15小时，直接读取沉淀环直径，经计算获得Cu、Zn-SOD总含量。
全文摘要
人血铜锌超氧化物歧化酶彩色免疫测定板，是用于测定人血红细胞Cu、Zn-SOD总含量的专用测定板。该板用含有蛋白染料、指示剂和中性盐以及高效价抗人Cu、Zn-SOD血清的1％离子琼脂糖灌制而成。消除了血样品中血红蛋白对测定的干扰，省略了常规方法的繁琐步骤。采血量少，反应结果清晰，容易观察，方法简便，适于各医疗、科研单位使用。
文档编号G01N33/49GK1039657SQ8710142
公开日1990年2月14日 申请日期1987年11月21日 优先权日1987年11月21日
发明者王惠媛, 耿梅 申请人:中国人民解放军海军总医院