专利名称：一种治疗咳嗽药物的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗咳嗽的中药药物，特别是涉及该药物的质量控制方法。
背景技术：
止嗽青果丸系咳嗽类用药，用于风寒束肺引起的咳嗽痰盛，胸膈满闷，气促作喘，口燥咽干。止嗽青果丸现执行标准收录于卫生部药品标准中药成方制剂第十册中。在该质量标准中制定了以下内容。I)取本品，置显微镜下观察:纤维素周围薄壁细胞中含草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙簇晶分布于叶肉细胞中，直径2-10um。淀粉粒卵圆形，直径35-48um，脐点点状、人字状或马蹄状，位于较小端，层纹细密。花粉粒淡黄色，呈类球形，直径28-40um，具3孔哑铃状。不规则片状结晶无色，有平直纹理。内果皮组织顶面观呈类多角形，界限不分明，胞腔星状，可见复盖的扁平细胞的细纹理。草酸钙针晶较多，随处散在，或成束存在于椭圆形粘液细胞中，针晶纤细，长20-144um。石细胞淡黄色或棕黄色，类圆形或类方形，壁较厚，层纹明显，含晶细胞的壁不均匀木化增厚，内含草酸钙方晶或棱晶。纤维淡黄色，梭形，壁厚，孔沟细。2)取本品6g,切碎,加娃藻土 6g,研勻，加三氯甲烧40ml。超声处理10分钟,滤过，滤液挥至2ml，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯(17:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。上述质量标准存在着比较严重的缺陷:首先，该标准对于主要药物未进行有效成分含量的定量测定；其次，50%以上的组成药物均未进行化学鉴别。中药制剂质量稳定、可控和具有生产可重复性是药物具有药理和临床结果可重复性的前提保证，中药质量能否得到控制以及中药质量标准是否科学化，是影响中药产业化的重要制约因素。质量可控性是药品评价的重要指标，质量标准则是药品质量可控性的具体体现。

发明内容
本发明的目的是提供一种上述治疗咳嗽药物的质量控制方法，以确保生产的药品质量稳定可控。本发明提供的治疗咳嗽药物的质量控制方法适合于由以下原料药制备而成的药物:西青果、麻黄、炒苦杏仁、石膏、炒紫苏子、制半夏、浙贝母、制桑白皮、紫苏叶、黄岑、甘草、款冬花、冰片。所述质量控制方法包括鉴别方法和含量测定方法。其中，所述鉴别方法包括如下鉴别: 1)取所述药物6g，加硅藻土3g，研匀，加三氯甲烷40ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥至2ml，作为供试品溶液；另取冰片对照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=17:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点；
2)取所述药物6g，加硅藻土3g，研匀，加乙酸乙酯30ml，水浴加热回流提取I小时，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加Iml乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取西青果对照药材0.5g，加乙酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品液与对照药材溶液各5 μ I,分别点于同一娃胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1为展开剂,展开,取出，晾干，喷以氨制硝酸银试液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3)取所述药物5g，加硅藻土 3g，研匀，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取麻黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品液10 μ 1，对照药材2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:浓氨水=20:5:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；
4)取所述药物5g,加娃藻土3g,研勻,加无水乙醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液回收溶剂至干,残渣加乙酸乙酯2ml使溶解,作为供试品溶液；另取桑白皮对照药材Ig,力口无水乙醇30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10 μ 1，对照药材溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60-90°C石油醚:甲苯:三氯甲烷=20:5:4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
5)取所述药物6g,加娃藻土3g,研勻,加乙酸乙酯:甲醇=3:1的混合溶液30ml,加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:甲酸=10:3:1:2为展开齐U，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 所述含量测定方法包括盐酸麻黄碱含量的测定。本发明具体以下述高效液相色谱法测定所述盐酸麻黄碱的含量:
1)色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈:含有0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液=5:95为流动相；检测波长210nm ;理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于2000 ；
2)对照品溶液的制备:取经五氧化二磷减压干燥的盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含42μ g的对照品溶液；
3)供试品溶液的制备:取研细的所述药物lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入1%盐酸50ml，功率250W、频率33kHz超声处理30分钟，提取液移至离心管中离心10分钟，取上清液置分液漏斗中，沉淀再用1%盐酸洗涤2次，每次5ml，洗液并入同一分液漏斗中，用氨水调节pH值至9-10，加三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，离心消除乳化层，合并三氯甲烷液，低温挥去三氯甲烷，残渣用甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
4)分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定即得。本发明建立了治疗咳嗽药物的质量控制方法，所建立的方法中，药材的鉴别方法成熟可行，专属性强，阴性无干扰，含量测定方法操作容易，精密度高，重现性好，使用本发明的质量控制方法能够精确、稳定地控制止嗽青果丸的药物质量，以适应药物的工业化稳
定生产。
具体实施例方式实施例1:冰片的薄层鉴别。取止嗽青果丸6g,加娃藻土 3g,研勻,加三氯甲烧40ml,超声处理10分钟,滤过,滤液挥至2ml，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯(17:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。实施例2:西青果的薄层鉴别。取止嗽青果丸6g，加硅藻土 3g，研匀，加乙酸乙酯30ml，水浴加热回流提取I小时，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加Iml乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液。另取西青果对照药材0.5g，加乙酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品液与对照药材溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以氨制硝酸银试液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。该方法色谱效果理想，西青果阴性样品无干扰。经三批样品验证，色谱重现性良好。
实施例3:麻黄的薄层鉴别。取止嗽青果丸5g,加娃藻土 3g,研勻，加甲醇20ml,超声处理30分钟,滤过,滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液。另取麻黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品液10 μ 1，对照药材2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷一甲醇-浓氨水(20:5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。本方法实验结果色谱效果理想，麻黄阴性样品无干扰。经三批样品验证，色谱重现性良好。
实施例4:桑白皮的薄层鉴别。取止嗽青果丸5g,加娃藻土 3g,研勻,加无水乙醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液回收溶剂至干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取桑白皮对照药材lg，加无水乙醇30ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液10μ 1，对照药材溶液2μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90°C)-甲苯-三氯甲烷(20:5:4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。本方法试验色谱效果理想，桑白皮阴性样品无干扰。经三批样品验证，色谱重现性良好。实施例5:黄芩的薄层鉴别。取止嗽青果丸6g,加娃藻土 3g,研勻,加乙酸乙酯一甲醇(3:1)的混合溶液30ml,加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇5ml使溶解,取上清液作为供试品溶液。另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯一乙酸乙酯一甲醇一甲酸(10:3:1:2)为展开剂，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。该方法色谱效果理想，黄芩阴性样品无干扰。经三批样品验证，色谱重现性良好。实施例6:盐酸麻黄碱含量的测定。止嗽青果丸由西青果、麻黄、苦杏仁等组成，其中麻黄具有发汗散寒，宣肺平喘，利水消肿之功效，在制剂中起着重要的作用。麻黄中麻黄碱含量较高，文献报道较多，方法较成熟，故选择盐酸麻黄碱含量作为质量控制方法。1、仪器与试药。美国安捷伦公司高效液相色谱仪、Agilent 1100 series色谱工作站；KQ5200DE超声波清洗器(昆山超声仪器厂)；BS223S千分之一电子天平、CP22 十万分之一电子天平(德国赛多利斯)；离心机LXJ-1I B (上海安亭科学仪器厂)；乙腈为色谱纯(Brudick&Jackson ),其他试剂均为分析纯；盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号 171241-200506)。止嗽青果丸(山西开元制药厂，批号080919，080920，080921)。2、色谱条件。色谱柱:kromasil-C18(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流动相:乙腈-0.1% 磷酸(内含 0.1%三乙胺)溶液(5:95);检测波长210nm,流速0.8ml/min。理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于2000。3、对照品溶液的制备。取经五氧化二磷减压干燥的盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含42.72 μ g的溶液，即得。4、供试品溶液的制备。取止嗽青果丸，研细，取约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入1%稀盐酸50ml，超声处理(功率250W，频率33kHz )30分钟，提取液移至离心管中，离心(转速为每分钟4500转)10分钟，取上清液，置分液漏斗中，沉淀再用1%稀盐酸洗涤2次，每次5ml，洗液并入同一分液漏斗中，用氨水调节PH值至9-10，加三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，必要时离心消除乳化层，合并三氯甲烷液，低温挥去三氯甲烷，残渣用甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。5、盐酸麻黄碱含量的测定。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。制剂每g含麻黄以盐酸麻黄碱(CltlH15N0.HCl)计，不得少于0.220mg。6、阴性样品试验。按止嗽青果丸制剂处方比例，模拟工艺制法制备去掉麻黄的阴性对照样品。精密称取阴性对照样品1.0g，按供试品溶液制备方法制得阴性供试品溶液。在确定的色谱条件下，分别记录麻黄碱对照品、供试品及阴性对照品的色谱图，图谱结果表明:在与麻黄碱保留时间的相对应处，阴性对照品色谱图中无色谱峰出现，即在确定的测定条件下，制剂处方中其他药味对麻黄碱的测定无干扰。7、线性关系的考察。分别精密吸取浓度为42.72 μ g/ml的麻黄碱对照品溶液2μ1、4μ1、6μ1、8μ1和10μ1注入色谱仪，在确定的色谱条件下测得峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，麻黄碱进样量(μ g)为横坐标，得到回归方程为y=2600.2x-4.49，r=0.9998 ;证明麻黄碱在
0.085-0.4272 μ g范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系，见表I。
权利要求
1.一种治疗咳嗽药物的质量控制方法，所述治疗咳嗽药物是由以下原料药制备而成的药物:西青果、麻黄、炒苦杏仁、石膏、炒紫苏子、制半夏、浙贝母、制桑白皮、紫苏叶、黄岑、甘草、款冬花、冰片，其特征在于所述质量控制方法中的鉴别方法包括如下鉴别: 1)取所述药物6g，加硅藻土3g，研匀，加三氯甲烷40ml，超声处理10分钟，滤过，滤液挥至2ml，作为供试品溶液；另取冰片对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯=17:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钥酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点； 2)取所述药物6g，加硅藻土3g，研匀，加乙酸乙酯30ml，水浴加热回流提取1小时，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加Iml乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；另取西青果对照药材0.5g，加乙酸乙酯20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加乙酸乙酯.1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品液与对照药材溶液各.5 μ l,分别点于同一娃胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:甲酸=5:4:1为展开剂,展开,取出，晾干，喷以氨制硝酸银试液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 3)取所述药物5g，加硅藻土3g，研匀，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麻黄对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品液10μ 1，对照药材2μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷:甲醇:浓氨水=20:5:0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点； 4)取所述药物5g,加娃藻土3g,研勻,加无水乙醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液回收溶剂至干,残渣加乙酸乙酯2ml使溶解,作为供试品溶液；另取桑白皮对照药材Ig,力口无水乙醇30ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10 μ 1，对照药材溶液2 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60-90°C石油醚:甲苯:三氯甲烷=20:5:4为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； 5)取所述药物6g,加娃藻土3g,研勻,加乙酸乙酯:甲醇=3:1的混合溶液30ml,加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇5ml使溶解，取上清液作为供试品溶液；另取黄芩对照药材lg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯:乙酸乙酯:甲醇:甲酸=10:3:1:2为展开齐U，预饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.根据权利要求1所述的治疗咳嗽药物的质量控制方法，其特征在于所述质量控制方法中的含量测定方法是以下述高效液相色谱法测定盐酸麻黄碱的含量: 1)色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈:含有.0.1%三乙胺的0.1%磷酸溶液=5:95为流动相；检测波长210nm ;理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于2000 ； 2)对照品溶液的制备:取经五氧化二磷减压干燥的盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含42μ g的对照品溶液； 3)供试品溶液的制备:取研细的所述药物lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入1%盐酸50ml，功率250W、频率33kHz超声处理30分钟，提取液移至离心管中离心10分钟，取上清液置分液漏斗中，沉淀再用1%盐酸洗涤2次，每次5ml，洗液并入同一分液漏斗中，用氨水调节pH值至9-10，加三氯甲烷振摇提取3次，每次20ml，离心消除乳化层，合并三氯甲烷液，低温挥去三氯甲烷，残渣用甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 4)分别吸取对照品溶液与供 试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定即得。
全文摘要
本发明公开了一种治疗咳嗽药物的质量控制方法，分别以薄层色谱法鉴别药物中的冰片、西青果、麻黄、桑白皮和黄芩，以液相色谱法测定药物中的盐酸麻黄碱含量。本发明建立的质量控制方法中，药材鉴别方法成熟可行，专属性强，阴性无干扰，含量测定方法操作容易，精密度高，重现性好，使用本发明的质量控制方法能够精确、稳定地控制药物的质量，以适应药物的工业化稳定生产。
文档编号G01N30/90GK103175938SQ20131011068
公开日2013年6月26日 申请日期2013年4月1日 优先权日2013年4月1日
发明者王六贵, 吕建英 申请人:山西振东开元制药有限公司