专利名称：一种稳定的液体单试剂血糖试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及医学检验领域中的一种分析试剂，具体涉及一种用于测定葡萄糖含量 的葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂。
背景技术：
本发明糖尿病是以持续高血糖为基本生化特征的一种综合病症。目前全球糖尿病 患者已超过1. 2亿人，我国患者人群规模也已超过5000万，占总人口的4%左右。由于糖尿病是终身性疾病，对于已确诊糖尿病的患者，为控制和延缓病情的发展、 减少并发症的发生，必须定期、不定期测量血糖，作为医院血常规项目之一，如何快速、准确 检测血液中葡萄糖含量有着积极意义。血液中葡萄糖含量酶法测定方法主要有己糖激酶法、葡萄糖脱氢酶法、氧化酶 法、酶电极、血糖仪等。应用酶学方法测定血液葡萄糖是临床化学中的主流方法。最常用的 酶学方法有葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法。其特点是具有较高的灵敏度、准确度和精密度， 使用温和的反应条件，操作简单方便，适用于自动分析仪，其中，己糖激酶法、葡萄糖脱氢酶 法试剂存在价格昂贵(氧化酶法的2-3倍)的问题。葡萄糖氧化酶法的测定方法有极谱分析法和比色法两类。但二者的初始反应都 是在葡萄糖氧化酶的催化下，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，同时消耗溶液中的氧，产生过氧化 氢。极谱分析法使用氧电极检测溶液中氧的消耗量。氧消耗量与葡萄糖浓度呈正比。比色 分析法使用葡萄糖氧化酶和辣根过氧化物酶的偶联反应系统。初始反应中过氧化氢的生成 量与葡萄糖浓度呈正比。在辣根过氧化物催化下，过氧化氢和各种色原反应，生成有色化合 物，可进行比色测定。该法的缺点如下1、易受还原性物质如抗坏血酸干扰。(参考《全国临床检验操作规程》)第三版， P359，卫生部医政司编制，东南大学出版社2006年11月出版；检验医学与临床2008年8月 第5卷第15期，P946，维生素C对血糖检测的影响)2、常见的以苯酚为色原的葡萄糖氧化酶法混合试剂很不稳定，酶酚混合剂在冰箱 只能存放1个月(参考《全国临床检验操作规程(第3版)))，P360-361卫生部医政司编 制，东南大学出版社2006年11出版)。3、有医院反映，血糖为医院血常会项目之一，试剂的需求量很大，未使用的试剂要 放在4度冰柜里，试剂存放时如有贴冰箱壁的时间长了试剂会被冻，在复融后会出现试剂 中部分酶失活，使试剂不能再使用。冬季向我国东北部寒冷地区的医院送货过程中试剂也 会被冻，复融后也会出现酶失活现象，试剂不能使用。使得在经济上造成损失，在运输过程 中也造成了不便。

发明内容
本发明的目的是解决原有技术存在的缺陷，发明的目的在于提供一种可以简便快 捷并可以快速检验血清或血浆中血糖含量的液体单试剂血糖试剂盒。采用该试剂盒中的试剂，能够利用紫外、可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪测定出血清、血浆中血糖 含量，测定过程中不受血清中Vc的干扰。稳定性强，测定速度快。准确度高，便于运输及存 放。所应用的检测原理为葡萄糖氧化酶法
GOD
β-D-葡萄糖+ H2O + O2...........H2O2 + D-葡萄糖酸
POD
H2O2+4-氨基安替比林+苯酚..........醌亚胺(红色)+H2Oo现有技术中的酶法试剂基本不使用阴离子、阳离子以及两性表面活性剂，认为这 些对试剂中的部分酶有影响，会影响酶活，导致测值不准确。但是，发明人发现在试剂盒中 采用了非离子表面活性剂和两性表面活性剂的组合使得试剂在抗胆红素干扰方面比较突 出；试剂盒中还可添加VC氧化酶，在抗VC效果上比较突出。在试剂中加入了两种表面活性 剂以及抗VC氧化酶可能会影响试剂稳定性，因此还可加入稳定剂使得试剂稳定。发明人还 发现本发明的试剂盒既解决了抗冻，又保证了空白吸光度、定标吸光度稳定性及测值准确 性。因此，本发明一方面提供一种稳定的液体单试剂血糖试剂盒，包括50mmol/ l-300mmol/l, PH = 6-9的缓冲液、葡萄糖氧化酶3ku_40ku、过氧化物酶0. 8ku_40ku、4-氨 基安替比林0. l-30mmol/l、色原0. lmmol/l-30mmol/l、防腐剂0. 01 % _5%、防止冻融后出 沉淀并抗干扰的稳定剂A和稳定剂B。本发明中使用的稳定剂A包括非离子表面活性剂和两性表面活性剂的组合物。优选地，本发明中使用的非离子表面活性剂选自月桂醇、胆酸钠、正辛基葡萄糖 苷、聚乙二醇单十二醚、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯十二烷基醚中的一种或几种，其重量百 分含量为0. -10%。优选地，本发明中使用的两性表面活性剂选自烷基二甲基胺醋酸甜菜碱、烷基羟 磺基甜菜碱、月桂酸酰胺丙基甜菜碱、烷基羧甲基羟乙基咪唑甜菜碱中的一种或几种，其重 量百分含量为0.01% -5%。优选地，本发明中使用的稳定剂B选自蛋白类稳定剂、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、甘 氨酸盐、组氨酸盐、葡萄糖酸盐中的一种或几种。优选地，稳定剂B选用谷氨酸盐、甘氨酸 盐、葡萄糖酸盐、牛血清蛋白中的的两种或两种以上组合使用。稳定剂B的重量百分含量可 以是 0. 5% -5%0优选地，本发明的试剂盒中还可含有l-100ku/l的抗坏血酸氧化酶。由于酶反应需要合适的PH的、有一定离子缓冲能力的缓冲液。优选地，本发明中 使用的缓冲液选自Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、GOOD’ S缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中的一种或几种。最适PH在6-9之间。优选地，本发明中使用的防腐剂选自迭氮钠，迭氮锂、PC300、烷基糖苷、MIT中的一 种，浓度为0.01% -5%o优选地，本发明中使用的色原为苯酚。其浓度在0. lmmOl/l-30mmOl/l，最优推荐浓 度为0. 3-10mmol/lo苯酚的价格要比一些高敏色原便宜很多，在试剂的性能上使用苯酚作为色原也可以达到高敏色原所能达到的性能，灵敏度可以达到进口试剂标准。试剂使用苯 酚作为色原可以在成本上有很大降低，这也使得病人在做此项检测时费用降低，减轻了经 济压力。本发明具有下列一方面或多方面的优点1、抗干扰效果可采用非离子表面活性剂和两性表面活性剂的组合使得试剂在抗 胆红素干扰方面比较突出。2、可加入了 VC氧化酶，消除了 Vc的干扰，解决了血清中Vc使测值偏低，临床判断 不准确问题。3、本发明加入稳定剂后是试剂稳定剂得到了改善，可以在4度存放18个月，开盖 再试机舱中可放置一个月无需重新定标。4、本发明解决了放置或运输过程中试剂冻融后不能使用的问题，减少了经济损失。5、可采用价格低廉的苯酚作为色原，试剂灵敏度可以达到进口试剂标准，降低了 试剂成本上，使病人减少了经济负担。6、本发明为单试剂，节省仪器试剂位，提高了仪器的利用率。


图1 本发明试剂盒的开盖稳定性。图2 本发明试剂与对照试剂冻融三次测值比较低值质控比较结果。图3 本发明试剂与对照试剂冻融三次测值比较高值质控比较结果。图4 本发明试剂与市售A、市售B试剂相关性实验结果。A，与市售A相关性实验 结果；B，与市售B相关性实验结果。图5:研发试剂高值线性。图6 研发试剂低值线性。图7:市售A高值线性。图8:市售A低值线性。图9:市售B低值线性。图10:市售B高值线性。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明技术方案作进一步说明。这些例子仅是一些应用范 例。不能理解为对本发明权利要求保护范围的一种限制。本发明中使用的缩略语含义为4-AAP 4-氨基安替比林；GOD 葡萄糖氧化酶；POD 过氧化物酶；ASO 抗坏血酸氧化酶；MIT:甲基异噻唑啉酮。实施例1 成分浓度苯酚5mmol/l〔0047〕4-AAP
〔0048〕6003虹
〔0049〕？008坟
〔0050〕八 3031^/1
〔0051〕磷酸缓冲液 60讓0171，？!I 二 6-9
〔0052〕迭氮钠 0.5 ^
〔0〇53〕谷氨酸盐2(^/1
^00543葡萄糖酸盐15^/1
^00553聚氧乙烯烷基醚0.5 ^
^00563烷基二甲基胺醋酸甜菜碱0丨
〔0057〕实施例2
〔0〇58〕成分浓度
〔0059〕苯酚511111101/1
〔0060〕4-八八？311111101/1
〔0061〕6003坟 11/1
〔0062〕？00 8^/1
〔0063〕八 3051^/1
〔0064〕缓冲液 6011111101/1 ？ ？!I ^ 6-9
〔0065〕1110.5^
^00663牛血清蛋白3(^/1
〔0〇67〕甘氨酸盐丨细/!
〔0〇68〕正辛基葡萄糖苷01-0(^7181此(^丨如)5^
^00693烷基羟磺基甜菜碱0丨5 ^
^00703实施例3
〔0〇71〕成分浓度
〔0072〕苯酚511111101/1
〔0073〕4-八八？311111101/1
〔0074〕60010^/1
〔0075〕？0010^/1
〔0076〕八 3030^/1
〔0077〕碳酸钠缓冲液 6011111101/1，？!I 二 6-9
〔0078〕迭氮锂 0.5 ^
〔0079〕牛血清蛋白3(^/1
^00803葡萄糖酸盐15^/1
^0081〕聚氧乙烯十二烷基醚5 ^
^00823烷基羧甲基羟乙基咪唑甜菜碱0丨
〔0083〕实施例4
〔0〇84〕成分浓度
〔0085〕苯酚511111101/10094]月桂醇5%0095]月桂酸酰胺丙基甜菜碱0096]实施例5 0097]成分浓度0098]苯酚5mmol/l0099]4-AAP3mmol/l0100]GOD10ku/l0101]POD10ku/l0102]ASO30ku/l0103]碳酸钠缓冲液60mmol/l, PH = 6-90104]迭氮锂0. 5%0105]天门冬氨酸盐30g/l0106]葡萄糖酸盐15g/l0107]聚乙二醇单十二-醚(Polidocanol) 5%0108]烷基羧甲基羟乙基咪唑甜菜碱0. 5%0109]适用本发明在奥林帕斯AU400机器上操
权利要求
1.一种稳定的液体单试剂血糖试剂盒，包括50mmOl/l-300mmOl/l，PH = 6-9的缓冲 液、葡萄糖氧化酶3ku-40ku、过氧化物酶0. 8ku-40ku、4-氨基安替比林0. l-30mmol/l、色原 0. lmmol/l-30mmOl/l、防腐剂0.01% -5%、防止冻融后出沉淀并抗干扰的稳定剂A和稳定 剂B。
2.根据权利要求1所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中稳定剂A为非离子表面 活性剂和两性表面活性剂的组合物。
3.根据权利要求2所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中非离子表面活性剂选自 月桂醇、胆酸钠、正辛基葡萄糖苷、聚乙二醇单十二醚、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯十二烷基 醚中的一种或几种，其重量百分含量为0. 1% -10%。
4.根据权利要求2所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中两性表面活性剂选自烷 基二甲基胺醋酸甜菜碱、烷基羟磺基甜菜碱、月桂酸酰胺丙基甜菜碱、烷基羧甲基羟乙基咪 唑甜菜碱中的一种或几种，其重量百分含量为0. 01 % -5 %。
5.根据权利要求1所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中稳定剂B选自蛋白类稳 定剂、天冬氨酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、组氨酸盐或葡萄糖酸盐。
6.根据权利要求1所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中稳定剂B选用谷氨酸 盐、甘氨酸盐、葡萄糖酸盐、牛血清蛋白中的两种或两种以上组合使用，其重量百分含量为 0. 5% -5%。
7.根据权利要求1所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，还含有Ι-lOOku/l的抗坏血酸氧化酶。
8.根据权利要求1-7任一项所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中缓冲液选自 Tris缓冲液、磷酸盐缓冲液、GOOD’ S缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、碳酸钠_碳酸氢钠 缓冲液中的一种或几种。
9.根据权利要求1-7任一项所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中防腐剂选自迭 氮钠，迭氮锂、PC300、烷基糖苷、MIT中的一种。
10.根据权利要求1-7任一项所述的稳定的液体单试剂血糖试剂盒，其中色原为苯酚。
全文摘要
本发明公开了一种稳定的液体单试剂血糖试剂盒。本发明提供的试剂盒包括50mmol/l-300mmol/l，PH＝6-9的缓冲液、葡萄糖氧化酶3ku-40ku、过氧化物酶0.8ku-40ku、4-氨基安替比林0.1-30mmol/l、色原0.1mmol/l-30mmol/l、防腐剂0.01％-5％、防止冻融后出沉淀并抗干扰的稳定剂A和稳定剂B，其中稳定剂A可以是非离子表面活性剂和两性表面活性剂的组合物。本发明具有抗Vc干扰，开盖存放1个月不用定标以及抗冻等优点。
文档编号G01N33/66GK102141568SQ20101061500
公开日2011年8月3日 申请日期2010年12月30日 优先权日2010年12月30日
发明者刘希, 果玮, 蔡华雅 申请人:北京九强生物技术股份有限公司