专利名称：人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及免疫胶体金检测试剂盒，尤其涉及人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒。
背景技术：
人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin, HCG)是妇女受精卵着床后由胎盘绒毛膜细胞分泌的一种糖蛋白激素，可通过血液循环进入血液和尿液。正常妊娠后I周便可从血清或尿中检出HCG，HCG的浓度上升很快，到首次停经，浓度通常超过100mIU/ml，至10-12孕周，HCG浓度达到15000-200000mIU/ml顶峰。HCG在正常与异常妊娠期有一定的分泌规律，滋养细胞的数量和活力与HCG的分泌密切相关。因此HCG的定量 检测不仅有助于妊娠期的判断，而且对临床诊断早孕、异位妊娠、先兆流产以及治疗中和治疗后的随诊具有重要意义。妊娠妇女的HCG参考值见下表
妊娠周数HCG (mIU/mL)妊娠周数HCG (mIU/mL)
5-50250-500
3100-1000041000-30000
53500-1150006-812000-270000
1215000-220000HCG水平大于或等于25mIU/ml,表不妊娠阳性。目前，HCG的定量检测方法主要有放射免疫试验(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光法等，这些检测方法对实验室及检测人员有较高要求，而且检测复杂费时，成本高，不利于HCG定量检测的广泛开展。金标读数仪是采用反射光度法原理并与配套的金标试剂联合使用，用于临床定性、半定量、定量分析的专用金标诊断分析仪器，金标读数仪和金标试剂因原理简单易操作，已被广泛应用于HCG、MAU等人体代谢物的定量检测中。然而，现有的金标试剂盒在检测区只设有一条检测线，对样品中检测物的捕捉能力有限，往往造成检测结果与实际含量间存在较大差异，急需一种检测结果准确、稳定的胶体金定量检测试剂盒以提高HCG定量检测的准确度。

实用新型内容本实用新型的目的是从提高检测准确度出发，提供一种与金标读数仪配套使用的人绒毛膜促性腺激素(HCG)胶体金定量检测试剂盒。本实用新型采用了下述技术方案来解决上述技术问题一种人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，其中，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察口，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗HCG单克隆抗体I，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的两条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有抗HCG单克隆抗体II，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。进一步的，所述两条检测线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近免疫胶体金纸片端，质控线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近吸水纸端。进一步的，所述盒盖的加样孔位于所述试剂条的滤样纸之上，部分滤样纸裸露于所述加样孔之中，所述盒盖的观察口位于所述试剂条的免疫硝酸纤维素膜之上，所述免疫硝酸纤维素膜上的检测线与质控线完全或部分裸露于所述观察口之中。 进一步的，所述加样孔贯穿盒盖且为方形开口。进一步的，所述观察口贯穿盒盖且为方形开口。进一步的，所述盒盖与盒座的边缘相匹配且相互粘合，或者盒盖与盒座上设有对应的卡合或扣合连接部件，并可经所述连接部件相卡合或扣合。所述胶体金标记抗HCG单克隆抗体I可采用抗HCG单克隆抗体I常规方法标记胶体金获得。人绒毛膜促性腺激素(HCG)检测试剂盒(胶体金法)中试剂条的主要生产工艺过程包括I)胶体金标记抗HCG单克隆抗体I :用柠檬酸钠还原法制备胶体金，并用制备好的胶体金标记抗HCG单克隆抗体I ;2)免疫胶体金纸片的制备将胶体金-抗HCG单克隆抗体I稀释到一定浓度干燥在玻璃纤维素纸片上；3)免疫硝酸纤维素膜的制备将抗HCG单克隆抗体II溶液稀释到适宜浓度，微机自动点膜到硝酸纤维素膜上制备Ti、T2线；4)贴膜、切裁、干燥制得半成品将免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸、滤样纸粘贴在粘胶纸上，组成HCG检测试剂卡，将卡片分切成试剂条，干燥后即得。上述HCG胶体金检测试剂盒的工作原理，即是利用高度特异的抗体-抗原特异结合反应及免疫膜层析技术，通过双抗体夹金法来定性检测人尿液中出现的HCG。在试剂盒的纤维膜上检测线( \、Τ2线)包被有抗HCG单克隆抗体II，另一端包被有抗HCG单克隆抗体I胶体金复合物。检测时，被检样品首先与抗HCG单克隆抗I胶体金混合，并沿纤维膜向上层析依次通过T1线、T2线。如果样品中有HCG存在，HCG首先和抗HCG单克隆抗体I胶体金结合，形成“HCG-抗HCG单克隆抗体I胶体金复合物”，在层析至检测线时，会被另一抗HCG单克隆抗体II捕获，而在检测线处形成一条红色线条。检测线颜色的深浅与样品中HCG浓度成正比。如果样品中没有HCG，则不会在T线处形成线条。在试纸条上的质控区(C线)包被有羊抗鼠IgG，以指示试剂盒反应系统工作是否正常。质控线的出现与杜冷丁或其代谢物的存在无关。质控区色带的出现表明①样品加入量充足；②样品在纸条上运行正常。本发明试剂盒的使用方法为I.将试剂盒放置在水平台面上。[0026]2.用加样吸管吸取尿样，然后滴3滴(约120ul)尿样到试剂盒的加样孔中。每检测一份不同的样品注意要使用不同的吸管。3.观察结果在滴加样品后3-8分钟判读结果，显色稳定后插入金标读数仪插槽内进行定量检测。检测结果的 定性判断方法阴性在结果观察窗口内出现一条色带，即质控线(C线)位置出现一条红色线条，表不样品中无HCG存在。阳性在结果观察窗口的质控线(C线)位置出现一条红色线条，检测线(!^!^线)出现一条或两条线条，表示样品有HCG存在。无效质控线(C线)不出现。任何情况下，C线均应形成，表示加样和操作正确。C线未出现表明测试结果是不确定的，应重做。本实用新型提供的人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便省时，检测结果准确、稳定，适合定性及定量检测样本中的人绒毛膜促性腺激素。

图I :HCG胶体金定量检测试剂盒示意图图2 :去盒盖的HCG胶体金定量检测试剂盒示意图图3 :HCG胶体金定量检测试剂盒的试剂条侧视示意图
具体实施方式
如图1-3所示人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，包括盒座I、盒盖2和试剂条3，其中，试剂条3固定于盒座I中部且位于盒座I与盒盖2之间，盒盖上设有加样孔12与观察口 13。试剂条3包括底层与上层，底层为塑料薄片4，上层依次头尾相接排列有滤样纸5、免疫胶体金纸片6、免疫硝酸纤维素膜7和吸水纸8，免疫胶体金纸片6上包被有胶体金标记抗HCG单克隆抗体I，免疫硝酸纤维素膜7上设有平行的两条检测线9、10和一条质控线11，检测线9、10上包被有抗HCG单克隆抗体II，质控线11上包被有羊抗鼠IgG。进一步的，所述两条检测线9、10靠近免疫硝酸纤维素膜7的近免疫胶体金纸片端，质控线11靠近免疫硝酸纤维素膜7的近吸水纸端。进一步的，盒盖的加样孔12位于试剂条的滤样纸5之上，部分滤样纸裸露于加样孔12之中，盒盖的观察口 13位于试剂条的免疫硝酸纤维素膜7之上，免疫硝酸纤维素膜上的检测线9、10与质控线11完全或部分裸露于观察口 13之中。进一步的，加样孔12贯穿盒盖且为方形开口。进一步的，观察口 13贯穿盒盖且为方形开口。进一步的，盒盖2与盒座I的边缘相匹配且相互粘合。
权利要求1.一种人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察ロ，其特征在干，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗HCG单克隆抗体I，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的两条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有抗HCG单克隆抗体II，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。
2.如权利要求I所述人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述两条检测线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近免疫胶体金纸片端，质控线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近吸水纸端。
3.如权利要求2所述人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述盒盖的加样孔位于所述试剂条的滤样纸之上，部分滤样纸裸露于所述加样孔之中，所述盒盖的观察ロ位于所述试剂条的免疫硝酸纤维素膜之上，所述免疫硝酸纤维素膜上的检测线与质控线完全或部分裸露于所述观察ロ之中。
4.如权利要求3所述人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，其特征在干，所述加样孔贯穿盒盖且为方形开ロ。
5.如权利要求3所述人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述观察ロ贯穿盒盖且为方形开ロ。
6.如权利要求I所述人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述盒盖与盒座的边缘相匹配且相互粘合，或者盒盖与盒座上设有对应的卡合或扣合连接部件，并经所述连接部件相卡合或扣合。
专利摘要本实用新型涉及一种人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察口，其中，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗HCG单克隆抗体I，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的两条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有抗HCG单克隆抗体II，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。本实用新型的人绒毛膜促性腺激素胶体金定量检测试剂盒适合定性及定量检测样本中的人绒毛膜促性腺激素。
文档编号G01N33/76GK202383145SQ20112049962
公开日2012年8月15日 申请日期2011年12月5日 优先权日2011年12月5日
发明者张国华 申请人:上海凯创生物技术有限公司