专利名称：麝香酮的检测方法
麝香酮的检测方法技术领域
本发明属于药物检测领域，涉及一种麝香酮的检测方法。
技术背景
麝香属名贵香料与名贵中药，其芳香气味主要来源于其中所含的麝香酮。药理研 究表明，麝香酮是天然麝香中的重要生理活性成分，该成分的检测是评价麝香药材质量的 重要指标之一。
现有麝香酮检测法主要有气相色谱法、薄层色谱法、柱前衍生化高效液相色谱法、 高效液相色谱法-质谱联用技术测定及比色法等。
应用气相色谱法检测麝香酮为中国药典2005年版采用方法，其分析的准确性毋 庸质疑，但因在分析中使用高压、可燃性气体等，安全性要求较高。
应用薄层色谱法检测麝香酮时，因该法应用手工制备薄层板，较开放的展开方式 及显色方法，定性检测尚可，定量检测重现性较差。
应用柱前衍生高效液相色谱法检测麝香酮，即在进样分析前将样品及对照品与2， 4-二硝基苯胼反应生成苯腙，利用苯腙的吸收峰进行检测，该法操作繁琐。
应用高效液相色谱法-质谱联用技术检测麝香酮，该法是一种较好的检测方法， 但仪器昂贵，不易普及。
应用比色法检测麝香酮，因该法必须先将样品分离纯化再显色测定，其操作更加 繁琐。
本领域急需一种操作简便、专属性强、稳定重复性好的方法用于检测麝香酮。 发明内容
本发明所解决的技术问题为提供一种新的麝香酮的检测方法，该方法无需柱前衍生化。
本发明检测方法采用高效液相色谱法测定，具体地，检测条件及方法如下
1、色谱条件与系统适用性试验
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(90-95 5-10)或乙腈-水 (90-95 5-10)为流动相；检测波长为280-286nm。理论板数按麝香酮峰计算应不低于 16000。
其中，根据检测波长确定麝香酮在有最大紫外吸收峰，但考虑到因仪器需 校正等因素的偏差，故可设定麝香酮的检测波长为^0j86nm，使用时可根据各仪器的实际 情况确定该仪器最适合的检测波长。
2、测试溶液制备
(1)对照品溶液的制备精密称取麝香酮对照品适量，以乙腈或甲醇溶解麝香酮 即可；
具体地，可制成乙腈或甲醇每Iml含麝香酮ang。
(2)供试品溶液的制备
以麝香为检测对象时，供试品溶液的制备方法如下取麝香粉末约0. 2g，精密称 定，以乙醚超声提取或索氏提取后，取提取液，溶剂挥至近干，加乙腈溶解，定容，摇勻，滤 过，即得。
其中，超声提取的制备方法为取麝香粉末约0. 2g，精密称定，置离心管中，密塞， 乙醚超声提取3次，每次加乙醚溶剂:3ml，超声15min，离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加 乙腈或甲醇溶解，并定容至anl，摇勻，滤过，即得。
其中，索氏提取的制备方法为取麝香粉末约0.2g，精密称定，置索氏提取器中， 加乙醚适量，提取8小时，取提取液置水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，并定容至anl，摇 勻，滤过，即得。如乙醇、甲醇、乙腈等溶剂也可以作为麝香供试品的提取溶液。
以含天然麝香或人工麝香的制剂为检测对象时，供试品溶液的制备方法为取含 天然麝香或人工麝香的制剂适量，加乙醚或石油醚进行超声或索氏提取，直至麝香酮提取 完全，提取液置水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，定容摇勻，滤过，即得。
3、测定法
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即可。
应用本发明检测方法检测麝香、含麝香或人工麝香的制剂时，无需柱前衍生化，样 品制备简单，设备条件要求不高，专属性强，稳定且重复性好，且便于操作。


图 1 色谱柱选择 diamonsil (钻石)C18 5 μ m 200*4. 6mm。
图 2 色谱柱选择 diamonsil (钻石)C18 5 μ m 250*4. 6mm。
图 3 色谱柱选择 Agilent Tc-C18 5 μ m 250*4. 6mm。
图4流动相选择供试品甲醇-水(90 10)。
图5流动相选择麝香酮对照品甲醇-水(90 10)。
图6流动相选择供试品乙腈-水(90 10)。
图7流动相选择麝香酮对照品乙腈-水(90 10)。
图8流动相比例考察供试品甲醇-水(90 10)。
图9流动相比例考察供试品甲醇-水(90 10)。
图 10 流速考察 0. 5ml/min。
图 11 流速考察 0. 8ml/min。
图 12 流速考察 1. Oml/min。
图13柱温的影响15°C。
图14柱温的影响25°C。
图15柱温的影响;35°C。
图16麝香酮紫外光谱图。
图17空白样品色谱图。
图18麝香酮对照品色谱图。
图19供试品色谱图。
图20线性关系图。
具体实施方式
以下通过检测条件的筛选试验说明本发明检测方法的有益效果。
1、仪器、材料和试剂
仪器Agilentl200高效液相色谱仪；(UV-8500)紫外-可见分光光度计(中国上 海天美公司)；BP211D型电子分析天平(Max :210g，d = 0. Img ；北京赛多利仪器系统有限公 司)；KQ-600DE超声波清洗器GOKHZ昆山市超声仪器有限公司)。
材料麝香为林麝(Moschus berezovskii Flerov.)成熟雄体香囊中的干燥 分泌物，购自四川养麝研究所，批号为080403;麝香酮对照品(供含量测定用)批号为 110719-200409，中国药品生物制品检定所提供。
试剂甲醇(色谱纯，Fisher)，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
2、方法与结果
2. 1色谱条件
注考察色谱条件时，所用对照品溶液及供试品溶液为按照2. 2和2. 3确定的方法 进行制备。
2. 1. 1不同色谱柱比较
考察了 diamonsil( 占石)Q8 5ym 250*4. 6mm 禾口 Agi lent Tc-C18 5 μ m250*4. 6mm, 分离度相当。试验结果见图1-3。
2. 1.2流动相的选择
分别考察了甲醇-水及乙腈-水系统。两系统分离度相当。试验结果见图4-图 7。因甲醇-水系统价格较低，故试验以其为主。
2. 1.3流动相比例的考察
分别考察了甲醇-水(90 10)和甲醇-水(95 5)，试验结果见图8_图9。由 图8-图9可见甲醇-水(90 10)对麝香酮峰分离度较好。
2. 1.4流速考察
考察了0. 5ml/min、0. 8ml/min和 1. Oml/min，测定结果相当，但0. 5ml/min、0. 8ml/ min麝香酮峰较宽，因此采用1. Oml/min作为测定流速。试验结果见图10-图12。
2. 1. 5柱温的影响
考察了柱温15°C、25°C及35°C。柱温为15°C时柱压较高，麝香酮峰较宽，理论塔板 数降低，柱温为25°C及35°C所测麝香酮含量相当，暂定25°C作为测定温度。试验结果见图 13-15。
2. 1.6测定波长的选择
通过紫外分光光度计对麝香酮对照品的乙腈溶液，在190-400nm波长范围内进行 扫描，结果发现麝香酮在处有最大紫外吸收峰，试验结果见图16。因此，选择 作为含量测定的检测波长。
综上，色谱条件为色谱柱为Agilent C18柱Q50mmX4. 6mm，5 μ m)；甲醇-水 (90 10)为流动相；检测波长为283nm ；流速1. Oml/min ；柱温25°C;进样量10 μ 1。理论 塔板数按麝香酮峰计不少于16000。
2. 2对照品溶液的制备
精密称取麝香酮对照品适量，加乙腈制成每Iml含麝香酮2. 041mg,即得。
2. 3供试品溶液的制备
2. 3. 1提取方法考察
超声提取取麝香粉末约0. 2g，精密称定，置离心管中，密塞，超声提取3次，每次 加乙醚溶剂:3ml，超声15min，离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加乙腈溶解，并定容至^il, 摇勻，滤过，即得。
索氏提取取麝香粉末约0. 2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，提取8小 时，取提取液置水浴挥至近干，加乙腈溶解，并定容至ani，摇勻，滤过，即得。
两供试液依2. 1确定的色谱条件测定，试验结果见表1。结果表明，两提取方法提 取率相当。
2. 3. 2提取溶剂的考察
取麝香粉末约0. 2g，精密称定，分别以乙醇、乙醚为提取溶剂，超声提取，制备供试 品溶液，依2. 1确定的色谱条件测定，试验结果见表1。结果表明，乙醚提取率较高。
2. 3. 3超声提取次数的考察
取麝香粉末约0. 2g，精密称定，以乙醚为提取溶剂，考察超声提取次数，制备供试 品溶液，依2. 1确定的色谱条件测定，试验结果见表1。结果表明，提取2次已基本提取完全。
表1供试品溶液制备考察
制备方式t香酮含量12均值提取方法索氏提取1. 501. 551. 53超声提取1. 561. 511. 54提取溶剂乙醇1. 371. 391. 38乙醚1. 561. 511. 54提取次数11. 231. Ξ71. Ξ521. 531. 511. 5231. 571. 541. 55
综上，供试品溶液制备方法为取麝香粉末约0. 2g，精密称定，置离心管中，密塞， 超声提取3次，每次加乙醚溶剂:3ml，超声15min，离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加乙腈 溶解，并定容至anl，摇勻，滤过，即得。
2. 4空白样品溶液的制备
于离心管中加乙醚溶剂:3ml，按照供试品溶液制备方法制得空白样品溶液。
2. 5专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、空白样品溶液各10μ 1，采用2. 1确定的 色谱条件注入高效液相色谱仪，HPLC图谱见图17-图19。结果表明空白样品溶液对麝香酮 的含量测定无干扰。
2. 6线性范围
精密吸取麝香酮对照品溶液2. 0μ 1、4. 0μ 1、6. 0μ 1、8. 0μ 1、10. 0μ 1、12. 0μ 1， 依选定色谱条件，测定各自峰面积值，以对照品进样量(mg)为横坐标，峰面积值为纵坐标， 求得线性方程为 y = 6954. 7χ-0· 1348，R = 0. 9995 结果表明在 0. 004082mg-0. 024490mg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。试验结果见图20及表2。
表2线性范围试验结果
权利要求
1.麝香酮的检测方法，它是采用高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供 试品溶液注入液相色谱仪，测定，即可；其特征在于色谱条件是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水或乙腈-水为流动相；检 测波长为280-286nm ；流动相中甲醇与水的体积比为90-95 5-10,乙腈与水的体积比为 90-95 5-10；制备对照品溶液精密称取麝香酮对照品适量，以乙腈或甲醇溶解麝香酮，即得。
2.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于所述检测波长为283nm。
3.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于色谱条件中柱温为 15-；35 "C。
4.根据权利要求3所述的麝香酮的检测方法，其特征在于色谱条件中柱温为25°C。
5.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于色谱条件中流速为 0. 5-1. Oml/min。
6.根据权利要求5所述的麝香酮的检测方法，其特征在于色谱条件中流速为1.Oml/min0
7.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于流动相中甲醇或乙腈与水 的体积比为90 10。
8.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于制备对照品溶液使乙腈或 甲醇每Iml含麝香酮ang。
9.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于以麝香为检测对象时，供试 品溶液的制备方法如下取麝香粉末约0. 2g，精密称定，以乙醚超声提取或索氏提取后，取 提取液，溶剂挥至近干，加乙腈溶解，定容，摇勻，滤过，即得；以含天然麝香或人工麝香的制剂为检测对象时，供试品溶液的制备方法如下取含天 然麝香或人工麝香的制剂适量，加乙醚或石油醚进行超声或索氏提取，直至麝香酮提取完 全，提取液置水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，定容摇勻，滤过，即得。
10.根据权利要求9所述的麝香酮的检测方法，其特征在于以麝香为检测对象时，超声提取制备供试品溶液的方法如下取麝香粉末约0. 2g，置离心管中，密塞，乙醚超声提取3次，每次加乙醚溶剂:3ml，超声 15min,离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，并定容至anl，摇勻，滤过，即 得；以麝香为检测对象时，索氏提取制备供试品溶液的方法如下取麝香粉末约0. 2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，提取8小时，取提取液置 水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，并定容至anl，摇勻，滤过，即得。
全文摘要
本发明属于药物检测领域，涉及一种麝香酮的检测方法，本发明所解决的技术问题为提供一种操作简便、专属性强、稳定且重复性好麝香酮的检测方法。本发明检测方法采用高效液相色谱法测定，检测条件及方法如下色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(90-95∶5-10)或乙腈-水(90-95∶5-10)；检测波长为283nm。制备对照品溶液精密称取麝香酮对照品适量，以乙腈或甲醇溶解麝香酮；以麝香或含麝香的制剂为检测对象制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，测定，即可。本发明检测方法无需柱前衍生化，样品制备简单，设备条件要求不高，专属性强，稳定且重复性好，且便于操作。
文档编号G01N30/36GK102028707SQ20091030794
公开日2011年4月27日 申请日期2009年9月29日 优先权日2009年9月29日
发明者万德光, 吴纯洁, 夏厚林, 孟宪丽, 张廷模, 彭成, 曾南, 李祖伦, 王建, 石战英, 董晓萍, 董重 申请人:成都中医药大学