专利名称：注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法
技术领域：
本发明涉及一种注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法，属于药物分析检测领域。
背景技术：
头孢匹胺钠，其化学名为(6R，7R)-7-[(R)-2_(4-羟基-6-甲基_3_吡啶羰基氨 基)-2-(对羟基苯基)乙酰氨基]-3-[[(l-甲基-IH-四唑-5-甲基)硫]甲基]-8-氧 代-5-硫杂-1-氮杂双环[4，2，0]辛-2-烯-2-羧酸钠盐。是一种抗菌素类药物，用于葡 萄球菌属、消化球菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、流感杆菌、链球菌属等敏感菌引起的败血 症、烧伤、手术切口等继发性感染、咽喉炎、急慢性支气管炎、扁桃体炎、胆囊炎、胆管炎、腹 膜炎、脑膜炎、子宫内感染等。头孢匹胺钠是一种新药，在2005年药典中没有记录其研究方法，在文献中使用高 效液相色谱法进行测定。高效液相色谱法具有高效、高灵敏度、应用范围广、等优点，因此在 药物检测中普遍使用。但在注射用头孢匹胺的检测中，色谱柱采用C8柱，采用HPLC进行药 品检测，一般配备C18柱，C8柱需要另配，而且价格较贵，而且操作比较繁琐。

发明内容
本发明的目的在于提供了一种分析头孢匹胺钠药物有效成分含量的注射用头孢 匹胺钠的荧光测定方法，本方法简单，实用，高效，适合于投资成本不太高的检测。技术解决方案头孢匹胺钠的荧光测定方法，包括以下步骤(1)配制非离子表面活性剂TritonX-IOO贮备液将非离子表面活性剂 TritonX-IOO溶于水，加水定容，配制成浓度为0. 5 X IO"3 3. 0 X 10_3mol/L的贮备液；(2)对照品溶液的制备头孢匹胺钠标准品作为溶质，用浓度为1. 5X 10_3mol/L的 TritonX-IOO水溶液作为溶剂配制成浓度为8. 0 X 10_5mol/L头孢匹胺钠溶液；(3)以1. 5X 10_3mol/L的"TritonX-lOO水溶液作为溶剂，稀释步骤⑵制得对照 品溶液，得到浓度为8. 0 X 10_6 8. 0 X 10_5mOl/L待测液，混勻后室温放置5 他后制得待 测液；(4)将步骤(3)的待测液置于荧光光谱仪的Icm石英比色皿中，设定激发波长为 ^Onm,发射波长范围为四0 450nm，扫描速度为15 3000nm/min，激发狭缝和发射狭缝 宽度均为2. 5 20. Onm，测定荧光强度；(5)线性关系的确定以TritionX-IOO的荧光强度的对数为纵坐标、头孢匹胺钠 浓度为横坐标绘制标准工作曲线，两者呈线性关系，回归方程为InI = 8. 827-19921C，r = 0.9995。pH的影响pH < 6. 5时，随pH的增大，测试体系的荧光强度增强，当pH = 6. 5 7. 5时，测试体系的荧光强度达到最大并保持稳定，当pH > 7. 5时随pH的增大荧光强度 逐渐变弱，因此，本发明选用纯水作为溶剂，可以避免由于缓冲溶液造成的对荧光强度的影 响。3
TritonX-IOO浓度的影响固定头孢匹胺钠的浓度为4. 0 X 10_5mol/L， TritionX-IOO 的浓度分别为 0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5、3. 0X lO^nol/L，分别测其荧光强 度，TritonX-IOO的浓度大于2. OX 10_3mol/L时，其自身的荧光强度也开始猝灭，当其 浓度为1.5X10_3mOl/L时，猝灭前后的荧光强度差Δ I最大，所以选择曲拉通的浓度为1.5X 10_3mol/L时，有最佳的猝灭效果。放置时间的影响在1. 5X10_3mol/L的"TritonX-lOO储备液中加入头孢匹胺钠，使 其浓度为4. OX 10_5mOl/L，每隔2小时测定一次荧光强度，在4 他时，猝灭的荧光强度基 本达到稳定，6h以后荧光强度剧烈的下降，体系的稳定性变差，所以选择证为最佳的测定 条件。线性关系的确定取头孢匹胺钠标准品溶于水后配制成11组由浓度由低到 高的溶液，加入与供试液组成相同和含量相同的苯甲酸钠，在上述11组试管中加入 TritionX-100储备液，使其浓度为1. 5 X 10_3mol/L，并在相同的荧光条件下分别测定荧光 强度，绘制标准曲线。本发明方法检测限的确定选择不加头孢匹胺钠时，浓度为1.5X10_3mol/L的 TritionX-100溶液，在本发明的最佳条件下测定荧光强度，连续测定10次，按3 ο /K计算， 得到检测限为2. 02Χ 10_6mol/L，其中K为工作曲线的斜率为19921，σ为10次测得的荧光 强度计算得到的标准偏差为1. 34%。金属离子干扰试验在头孢匹胺钠和TritonX-100的浓度分别为4. 0X 10_5mol/L 和1.5X10_3mOl/L时，添加金属离子，采用本发明方法进行检测，考察多种常见金属离子对 体系荧光强度的影响，相对误差不大于士5%时，下列离子或者物质的允许量(XlO-6Hi0I/ L) :Cr(50000)、NCV(IOOO)、PO广(500)、CO32-(200)、S0:(1000)、Al3+(200)、Ca2+(IOOO)、 Mg2+(IOOO)、Zn2+ (50000)、Cu2+、Mn2+ (500)、Na2+ (50000)、K+(IOOOO)。相关物质干扰试验头孢匹胺钠中加入辅料苯甲酸钠作为稳定剂，在荧光分析过 程中发现加入苯甲酸钠后，TritonX-100的发射光谱几乎不变，说明对其荧光没有猝灭作 用。本发明所用的试剂均选用分析纯，所用的水均选用纯水或蒸馏水。本发明具有以下有益效果1、加入TritonX-100后，头孢匹胺钠能够有效的猝灭其荧光，检出限达到2.02Xl(T6mol/L。2、利用头孢匹胺钠对TritonX-100的荧光猝灭作用，实现了荧光光谱法对头孢匹 胺钠药物的测定。3、本发明方法简单、快速、准确，具有高的灵敏度与好的选择性，应用范围广泛，是 头孢匹胺钠注射液测定的理想方法。


图1为本发明的荧光光谱图；图2为本发明的标准工作曲线。
具体实施例方式实施例1参见图1，图1中曲线1表示1. 5X10_3mol/L的TritionX-100的荧光光谱 图，曲线2表示1中加入4.0X10_5mol/L的头孢匹胺钠的荧光光谱图，曲线3为加入 4. 0X10_5mol/L的苯甲酸钠的荧光光谱图。1.于一 IOOOml容量瓶中配置浓度为1. 5Xl(T3mol/L的TritonX-100贮备液，用 纯水定容至IOOOml后摇勻，制成溶液(1)。2.于一 IOOml容量瓶中加入头孢匹胺钠对照品，以上述TritonX-100贮备液为溶 剂配制溶液，用溶液⑴定容至IOOml后摇勻，配成浓度为8.0 X 10_5mol/L的头孢匹胺钠母 液，制成溶液O)，其中TritonX-100的浓度也保持为1. 5X 10_3mOl/L。3.于一 50ml的具塞锥形瓶加入5ml溶液(2)和5ml溶液(1)混勻后，配成 IOml配成浓度为4. 0X10_5mol/L的头孢匹胺钠溶液，其中TritonX-100的浓度也保持为 1. 5X10_3mol/L，制成溶液(3)。4.于一 50ml容量瓶中加入苯甲酸钠0. 0032g,以上述溶液(1)为溶剂配制溶液， 定容至IOOml后摇勻，配成浓度为4. OX 10_4mol/L的苯甲酸钠溶液，其中TritonX-100的浓 度也保持为1. 5X l(T3mol/L。5.于一 50ml的具塞锥形瓶加入Iml溶液(3)和9ml溶液(1)混勻后，配成IOml 配成浓度为4. OX 10_5mol/L的苯甲酸钠溶液，制成溶液(5)，其中TritonX-100的浓度也保 持为 1. 5Xl(T3mol/L。6.将溶液(1)、溶液C3)及溶液( 分别置于荧光光谱仪的Icm石英比色皿中，设 定激发波长为^Onm，发射波长范围为290 450nm，扫描速度为lOOOnm/min，激发狭缝宽度 和发射狭缝宽度均为lOnm，测定三者的荧光强度，荧光光谱图如图1，说明头孢匹胺钠能够 有效猝灭TritionX-100所发射的荧光，而作为头孢匹胺钠注射液稳定剂的苯甲酸钠则对 TritionX-100的荧光基本上没有干扰。7.根据标准工作曲线的绘制方法，取溶液(2)头孢匹胺钠对照品母液，用(1) TritionX-100贮备液作为溶剂将( 稀释成由低浓度到高浓度的头孢匹胺钠标准溶液浓 度为 8. OXIO—mol/L 至 8. 0Xl(rtiiol/L，以 8. 0 X l(T6mol/L 递增，共 19 个点，TritionX-100 的浓度也保持为1.5X10_3mOl/L。并在上述检测条件下分别测定荧光强度，以荧光强度的 常用对数值InI为纵坐标，头孢匹胺钠的浓度为横坐标绘制工作曲线，如图2。8.除了将4. OX 10_5mol/L浓度的头孢匹胺钠标准溶液替换成50. Oml山东罗欣药 业股份有限公司(批号091(^83)生产的头孢匹胺钠注射液外，其它操作同标准工作曲线 的处理方法，并且测定体系的中TritonX-100的荧光强度，通过图2的标准曲线得出头孢 匹胺钠注射液中的头孢匹胺钠的浓度，进一步计算头孢匹胺钠注射液中头孢匹胺钠的含量 (以质量浓度计)。测定结果见表1表 权利要求
1.注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法，其特征在于，包括以下步骤(1)配制非离子表面活性剂TritonX-IOO贮备液将非离子表面活性剂TritonX-IOO 溶于水，加水定容，配制成浓度为0. 5 ΧΙΟ"3 3. OX 10_3mol/L的贮备液；(2)对照品溶液的制备头孢匹胺钠标准品作为溶质，用浓度为1.5Xl(T3m0l/L的 TritonX-IOO水溶液作为溶剂配制成浓度为8. O X 10_5mol/L头孢匹胺钠溶液；(3)以1.5X10_3mol/L的TritonX-IOO水溶液作为溶剂，稀释步骤⑵制得对照品溶 液，得到浓度为8. OX 10_6 8. OX 10_5mOl/L待测液，混勻后室温放置5 8h后制得待测 液；(4)将步骤(3)的待测液置于荧光光谱仪的Icm石英比色皿中，设定激发波长为 280nm，发射波长范围为290 450nm，扫描速度为15 3000nm/min，激发狭缝和发射狭缝 宽度均为2. 5 20. Onm，测定荧光强度；(5)线性关系的确定以TritionX-IOO的荧光强度的对数为纵坐标、头孢匹胺钠浓 度为横坐标绘制标准工作曲线，两者呈线性关系，回归方程为InI = 8. 827-19921C，r = 0.9995。
全文摘要
本发明公开了一种注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法。包括保持非离子表面活性剂TritonX-100的浓度为1.5×10-3mol/L，在中性条件下，加入浓度范围为8.0×10-6～8.0×10-5mol/L的头孢匹胺钠供试品，混匀，放置5小时后测定荧光强度；设定激发波长为280nm，发射波长范围为290～450nm，扫描速度为15～3000nm/min，激发狭缝和发射狭缝宽度均为2.5～20.0nm，测定荧光强度。本发明利用头孢匹胺钠能够对TritonX-100的荧光进行有效猝灭，实现了注射用头孢匹胺钠供试品的检测，操作简便，快捷，灵敏。
文档编号G01N21/64GK102053078SQ201010555130
公开日2011年5月11日 申请日期2010年11月12日 优先权日2010年11月12日
发明者刘金彦, 廖永娟, 袁春华, 赫文秀 申请人:内蒙古科技大学