专利名称：检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒及其方法
技术领域：
本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种检测试剂盒，特别是一种采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测人血清中和关节腔液中补体Clq浓度的试剂盒及其方法。
背景技术：
补体Clq是补体系统Cl的第一组成成份，是一个巨分子量糖蛋白，一个Clq分子由18个多肽链成，化学组成为胶原性蛋白分子量410KD。现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定补体Clq浓度，但是其步骤复杂，准确性不高。

发明内容
本发明的目的在于提供一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒及其方法，所述的这种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒及其方法要解决现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定补体Clq浓度过程复杂，准确性不高的技术问题。本发明提供了一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒，包括两种试剂，I试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA2和TX-100组成，在所述的I试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量浓度为28. 6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量浓度为2. 7g/L，所述的PEG6000的质量浓度为50g/L，所述的EDTA-NA2的质量浓度为lg/L，所述的TX-100的体积浓度为0. 2ml/L，II试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA2, TX-100和补体Clq抗血清或者补体Clq单克隆抗体组成，在所述的II试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量浓度为28. 6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量浓度为2. 7g/L，所述的PEG6000的质量浓度为50g/L，所述的EDTA-NA2的质量浓度为lg/L，所述的TX-100的体积浓度为0. 2ml/L，所述的补体Clq抗血清或者补体Clq单克隆抗体的体积浓度为300ml/L。进一步的，所述的补体Clq抗血清为羊抗人补体Clq抗血清、或鼠抗人补体Clq抗血清，所述的补体Clq单克隆抗体为鼠抗人补体Clq单克隆抗体。进一步的，所述的TX-100的纯度为100%。进一步的，所述的兔抗人补体Clq抗血清的效价为I : 64。本发明还提供了一种检测人血清中补体Clq浓度的方法，采用上述的试剂盒，包括一个将样本采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将样本采用生化分析仪测定的步骤中，将样品加入I试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点样本Al，加入II试剂R2，37°C 孵育5min，读测第2点样本A2，样本A =样本A2-样本Al ;还包括一个将校准品采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将校准采用生化分析仪测定的步骤中，将校准加入I试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点校准Al，加入II试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点校准A2，校准A =校准A2-校准Al ；样本A2-样本Al
补体Clq浓度(mg/L) =_X校准品浓度(mg/L)
校准A2-校准Al上述测定的参数为温度37°C，主波长340nm、546nm、600nm，副波长700nm，样本或校准品3-4 u I, R1 :240 iil，R2 :60 yl，反应时间为10分钟。本发明的羊抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq单克隆抗体可以在市场购买，也可以通过常规的免疫方法制备。本发明的试剂盒和方法是采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法的测定原理，SP利用补体Clq抗原和兔抗人补体Clq抗血清、羊抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq抗血清、鼠抗人补体Clq单克隆抗体相结合，形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，其浊度高低，即透光度减少、吸光度增加反映人血清样本中补体Clq的浓度，补体Clq的浓度可由校准品所作的剂量反应曲线算出。采用本发明的试剂盒和方法测得的Clq的浓度可以作为科研和教学使用。本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明的试剂盒和方法用于测定补体Clq浓度的过程简单方便，准确性高。


图I是由校准品所作的补体Clq浓度和吸光度的剂量反应曲线图。
具体实施例方式实施例I免疫透射比浊法当一束入射光照射液相中的IC时，一部分光被IC粒子吸收，一部分光透过，还有一部分光被IC粒子散射。利用比浊仪在光源的光路方向上测量透射光强度与入射光强度的比值或吸光值，来判断待测抗原的量，此法称为透射比浊法。I. I适用仪器半自动、全自动生化分析仪。I. 2分析方法免疫透射比浊法。I. 3性能要求I. 3. I试剂外观Rl :无色澄清透明液体；R2 :淡黄色澄清液体。
、
1.3.2试剂空白吸光度(A)吸光度(A): + ( 0. 04A(在温度 37 °C ;主波长 340nm(副波长 700nm))。I. 3. 3 精密度I. 3. 3. I批内精密度CVS 10%。I. 3. 4批间精密度
相对极差≤10%。1. 3. 5 准确度不准确度±10%的范围以内。1.3.6分析灵敏度吸光度⑷> 0. 04A。1. 3. 7 线性在50mg/L_400mg/L 范围内，相关系数(Y)≥0. "00。1. 3. 8 稳定性试剂在2°C -8°C避光贮存至有效期末前后两个月，进行检测，其质量符合上项的规定。2. I检测条件2. I. I生化分析仪(以下简称仪器)日立7060自动生化分析仪。2. I. 2工作环境温度室温15-32 °C。室内湿度45-85% RH。2. I. 3主要测定参数及操作步骤温度370C ;主波长340nm(副波长700nm)，样本或校准品3-4 u I :240 u I ；R2 60iU，反应时间10分钟。方法类型二点终点法。样本或校准品加试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点(Al)，加入试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点(A2)，样本A = A2-A1。结果计算
样本A2-样本Al
补体Clq浓度(mg/L) =_X校准品浓度(mg/L)
校准A2-校准Al2. I. 4 校准品本标准中所用校准品为浙江省玉环县南方试剂厂生产的标准品。2. 2试剂外观光下目测试剂盒，Rl :无色澄清透明液体；R2 :淡黄色澄清液体。2. 3试剂空白吸光度值取^240 u 1，加蒸懼水 I,置 37°C孵育 5min 后,加入 R260 u l,g 37°C孵育 5min后，在7060自动生化分析仪上，用340nm波长，测定其吸光度值应符合实施例I中I. 3. 2项的规定。2. 4精密度2. 4. I批内精密度试验方法在仪器正常工作条件下，用同一批试剂，连续测试(约200mg/L)样本20次，计算其测量值的平均值(X )和标准差(SD)，再按以下公式计算变异系数(CV%)的值，其结果应符合实施例I中I. 3. 3. I项的规定。n SD = { E (Xi-X)2/(N-I)}1/2I = ICV= SD/XX100%式中SD-标准偏差；CV-变异系数；X -n次测定值的均值；Xi-第i次的测定值；n_测量次数。2. 4. 2批间精密度试验方法在仪器正常工作条件下，取三个批号试剂，每个批号取一套。分别测定(约200mg/L)样本各3次。然后计算每批测定结果的均值h、x2, UP三批试剂测定结果的总均值(Xt )。按照下列公式求出三个批号试剂的测定均值的相对极差(％)，其结果应符合实施例I中I. 3. 4项的规定。
相对极差(%) = (Xmax-Xmin) /Xt X 100%式中J(Inax)Sx^ X2> x3中最大值，又(min)为x X2> X3中最小值。2. 5准确度在仪器正常工作条件下，试剂用浙江玉环南方试剂厂生产的标准品经定标后，测定已知浓度的样本，重复测定10次，其测量结果的均值的相对偏差应符合实施例I中I. 3. 5项的规定。RE %=绝对偏差/TVX 100%绝对偏差=检测结果均值-标准品靶值式中TV-测定标准品的靶值2. 6分析灵敏度R1 试剂 240iil，加入 50mg/L 样本 4iil，置 37°C 孵育 5min 后，加入 R260 iil，置 37°C孵育5min后，在7060自动生化分析仪上，用340nm主波长(副波长700nm)，测吸光度，其结果应符合实施例I中I. 3. 6项的规定。2. 7线性试验样本或校准品选用按实施例3配制的1#、2#、3#、4#、和5#各测试浓度样本或校准品。测定步骤在仪器正常工作条件下，经定标后，用试剂测定以上五个浓度样本或校准品，每一浓度样本或校准品分别测定3次，取均值为实测值Yi。计算按以下公式计算相关系数Y，其结果应符合实施例I中I. 3. 7项的规定。
权利要求
1.一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒，包括两种试剂，其特征在于I试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA2和TX-IOO组成，在所述的I试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量浓度为28. 6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量浓度为2. 7g/L，所述的PEG6000的质量浓度为50g/L，所述的EDTA-NA2的质量浓度为lg/L，所述的TX-100的体积浓度为0.2ml/L，II试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA2、TX-100和补体Clq抗血清或者补体Clq单克隆抗体组成，在所述的II试剂中，所述的磷酸氢二钠的质量浓度为28. 6g/L，所述的磷酸二氢钾的质量浓度为2. 7g/L，所述的PEG6000的质量浓度为50g/L，所述的EDTA-NA2的质量浓度为lg/L，所述的TX-100的体积浓度为0. 2ml/L，所述的补体Clq抗血清或者补体Clq单克隆抗体的体积浓度为300ml/L。
2.如权利要求I所述的一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒，其特征在于所述的补体Clq抗血清为羊抗人补体Clq抗血清、或鼠抗人补体Clq抗血清，所述的补体Clq单克隆抗体为鼠抗人补体Clq单克隆抗体。
3.如权利要求I所述的一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒，其特征在于所述的TX-100的纯度为100%。
4.如权利要求I所述的一种检测人血清中补体Clq浓度的试剂盒，其特征在于所述的兔抗人补体Clq抗血清的效价为1:64。
5.一种检测人血清中补体Clq浓度的方法，其特征在于采用权利要求I所述的试剂盒，包括一个将样本采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将样本采用生化分析仪测定的步骤中，将样品加入I试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点样本Al，加入II试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点样本A2，样本A=样本A2-样本Al ;还包括一个将校准品采用生化分析仪测定的步骤，在所述的一个将校准采用生化分析仪测定的步骤中，将校准加入I试剂Rl后，37°C孵育5min，读测第I点校准Al，加入II试剂R2，37°C孵育5min，读测第2点校准A2，校准A=校准A2-校准Al ； 样本A2-样本Al 补体Clq浓度(mg/L)=_X校准品浓度(mg/L) 校准A2-校准Al 上述测定的参数为温度37°C，主波长340nm、546nm、600nm，副波长700nm，样本或校准品3-4 u !,R1 240u !,R2 :60 yl，反应时间为10分钟。
全文摘要
本发明属于生物工程领域，提供了一种检测血清中补体Clq浓度的试剂盒，解决了现有技术中采用免疫扩散法和ELISA双抗体夹心技术测定补体C1q浓度步骤复杂，准确性不高、重复性差的技术问题。包括两种试剂，Ⅰ试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA2和TX-100组成，Ⅱ试剂由磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、PEG6000、EDTA-NA2、TX-100、补体C1q抗血清或补体C1q单克隆抗体组成。本发明还提供了采用上述的试剂盒检测人血清中补体Clq浓度的方法，本发明的试剂盒和方法用于测定补体C1q浓度的步骤简单方便，准确度高、重复性好，用于自动化分析仪。
文档编号G01N33/68GK102636654SQ201210133619
公开日2012年8月15日 申请日期2012年4月28日 优先权日2012年4月28日
发明者刘颖冰, 刘颖成, 张瑞镐, 朱慧琳, 王泉龙 申请人:上海北加生化试剂有限公司