专利名称：一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法
技术领域：
本发明属于氯霉素滴眼液的检测方法，特别属于含有大豆异黄酮的氯霉素 滴眼液的检测方法。
技术背景氯霉素滴眼液是一种眼部常用的药品，曾经作为OTC甲类药品在市场上流 通使用，其主要成份为氯霉素、缓冲液、抑菌剂、水，也有在氯霉素滴眼液中 加入玻璃酸钠、甘油以增强粘度，改善在眼部的保留时间。《中国药典》2005年 版二部中第778页公幵了氯霉素滴眼液的检测方法，检测项目包括性状项、鉴 别项、检査项、含量测定项、类别项、规格项、贮藏项，在检查项中包括PH值 项、有关物质项、其它项的检测，在鉴别项中所提供的两种鉴别方法均为主药 氯霉素的鉴别方法，方法l为颜色反应，方法2为高效液相色谱法。药品通常的有效期或保质期为2年，而氯霉素滴眼液的保质期只能达到8 一12个月，这是由于氯霉素滴眼液中氯霉素容易分解成氯霉素二醇物、对硝基 苯甲酸，氯霉素二醇物及对硝基苯甲醛对眼睛有较强的刺激性，影响患者的使 用。通过研究发现，通过对氯霉素滴眼液中物质成份进行调整，可以使氯霉素 滴眼液的保质期提高至2年以上，这些物质成份直接影响氯霉素滴眼液的保质 期，对氯霉素滴眼液的质量起着重要作用，有些物质成份还有一定的辅助治疗 作用，但目前中国药典所记载的氯霉素滴眼液的检测方法中对这些物质没有进 行鉴别或者含量测定，存在着一定的缺陷。 发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种完整的保质期长的氯霉素滴眼液检测方法。本发明解决技术问题的技术方案为 一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测 方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了大豆 异黄酮的鉴别方法。所述的大豆异黄酮的鉴别方法，可以为紫外分光光度法，也可为薄层色谱 法，所述的薄层色谱法为取氯霉素滴眼液1一5毫升，用无水甲醇稀释10 — 20 倍，作为样品溶液，另取大豆异黄酮对照品加无水甲醇制成每毫升溶液含有10 Ug的溶液，作为标准溶液，按照中国药典附录中薄层色谱法规定，吸取样品溶 液及标准溶液适量，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10: 0.5 一l的氯仿、无水甲醇为展开剂，展开，晾干，置于波长为254nm的紫外灯下 检视，在氯霉素滴眼液样品溶液色谱与标准品溶液色谱相应的位置上，有相同 颜色的荧光斑点。由于大豆异黄酮是从大豆中分离提取的主要活性成分，主要包括染料木素、 大豆素、大豆黄素，其在氯霉素滴眼液中的重量浓度为0.03%左右，为了更好的 对氯霉素滴眼液中大豆异黄酮的用量进行控制，还可利用高效液相法、紫外分 光光度法、高效液相色谱一质谙法、气相色谱法、毛细管电泳法来测定大豆异 黄酮的含量。所述的高效液相法为取氯霉素滴眼液适量，用无水甲醇稀释成每毫升溶液 中约含有大豆异黄酮20 ug的溶液，注入高效液相色仪，记录色谱图，色谱条 件为以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为体积比为20: 80:O.l的乙腈、水、乙酸溶液，柱温为4(TC，检测波长254nm;另取染料木素对照品、大豆素对照品、大豆黄素对照品适量，同法测量， 以外标法计算氯霉素滴眼液中大豆异黄酮的含量。当采用了高效液相色谱法测定大豆异黄酮的含量后，还可在氯霉素滴眼液 检测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具体为在含量测定项下的 大豆异黄酮的测定中，氯霉素滴眼液中的大豆异黄酮主峰保留时间应与染料木 素对照品、大豆素对照品、大豆黄素对照品的保留时间一致。为了避免大豆异黄酮检测过程中主药氯霉素的干扰，可以在检测方法中增 加预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼液，加入混合菌种，在30 一35"C保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯霉素滴眼液与混合菌种体 积比为100: 0.5-5。混合菌种可以选择性针对氯霉素滴眼液中氯霉素产生黄色沉淀，而不影响 氯霉素滴眼液中其它的物质成份。所述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CGMCC 1.794、 粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠±矣希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1232、其扩大培养液混合的体积比为6-10: 1-10: 5-8。申请人认为大豆异黄酮作为天然的抗氧化剂，具有很强的清除溶液中自由 基的作用，通过对氯霉素滴眼液中自由基的消除，能够使氯霉素滴眼液有效期 达到2年以上，同时还有一定的保健治疗作用，因此在中国药典的鉴别项中墻 加大豆异黄酮的鉴别方法，能够更加有效的提高中国药典中氯霉素滴眼液检测 的完整性。由于在氯霉素滴眼液中增加了大豆异黄酮能够提高氯霉素滴眼液的稳定 性，故可以将中国药典中氯霉素的标示量规定为85 — 115%，而不是现行规定的 标示量大于85%即为合格产品，从而避免部分生产厂家采用多加主药氯霉素的形 式使氯霉素滴眼液在8 — 12个月的有效期内标示量达标，但导致氯霉素滴眼液 的副作用加大。由于药品的有效期目前采取备案制度，不同厂家的相同产品的有效期经常不一致，从而使消费者产生困惑，为此，在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项中增加有效期项，并将有效期定为2年。本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的大豆异黄酮 检测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴 眼液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做详细的说明。所述的氯霉素滴眼液的样品通过以下方法进行制备。取氯霉素2.5克，硼酸1.5克，硼砂0.5克，氯化钠6.5克，纯度为9(m 的大豆异黄酮0.3克，用水加到1000毫升即可。所述的染料木素对照品、大豆素对照品、大豆黄素对照品均从中检所购买。实施例l:薄层色谱法鉴别取氯霉素滴眼液5毫升，用无水甲醇稀释10倍，作为样品溶液，另取大豆 异黄酮对照品加无水甲醇制成每毫升溶液含有10ug的溶液，作为标准溶液， 按照中国药典附录中薄层色谱法规定，吸取样品溶液及标准溶液各6y 1，分别 点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10: 0.5的氯仿、无水甲醇为展开 剂，展开，晾干，置于波长为254nm的紫外灯下检视，在氯霉素滴眼液样品溶 液色谱与标准品溶液色谱相应的位置上，有相同颜色的荧光斑点。实施例2:取氯霉素滴眼液2毫升，用无水甲醇稀释成每毫升溶液中约含有大豆异黄 酮20ng的溶液，注入高效液相色仪，记录色谱图，色谱条件为以十八烷基 硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为体积比为20: 80: 0. l的乙腈、水、 乙酸溶液，柱温为40。C，检测波长254nm;另取染料木素对照品、大豆素对照品、大豆黄素对照品适量，同法测量， 以外标法计算氯霉素滴眼液中大豆异黄酮的含量。 实施例3:a) 混合菌种的制备取多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1. 1232、其扩大培养液混合的体积比为6: 1: 5。(每毫升液体中含有2X107个 活性菌体以上)。b) 将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉 素滴眼液样品体积的P/。(V/V)加入，在30—35。C保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液5ml，作为氯霉素滴眼液样品，按实施例1的方法进行检测。实施例4:a) 混合菌种的制备为取多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyxa) CGMCC 1.794、粘质沙雷氏菌 (Serratiamarcescens) CGMCC 1.203、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli) CGMCC 1. 1232、其扩大培养液混合的体积比为1: h 0.8。(每毫升液体中含有2X107 个活性菌体以上)，b) 将混合菌种按照体积比1: 50用水稀释，将稀释好的混合菌种按照氯霉 素滴眼液样品体积的2y。(V/V)加入，在30—35'C保温搅拌30分钟，过滤黄色沉 淀，取滤清液，取滤清液2mL，按实施例2的方法进行检验。实施例3与实施例1相比，荧光斑点更加清晰易辨。实施例4与实施例2相比，由于没有原料氯霉素的影响，大豆异黄酮的几 个峰更容易分辨。上面结合实施例对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受 上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种非实质 性的改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均 在本发明的保护范围之内。
权利要求
1、一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，其特征在于在鉴别项中，增加了大豆异黄酮的鉴别方法。
2、 根据权利要求1所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的大豆异黄酮的鉴别方法为紫外分光光度法、薄层色谱法。
3、 根据权利要求2所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的薄层色谱法为取氯霉素滴眼液1一5毫升，用无水甲醇稀释IO 一20倍，作为样品溶液，另取大豆异黄酮对照品加无水甲醇制成每毫升溶液含 有10Ug的溶液，作为标准溶液，按照中国药典附录中薄层色谱法规定，吸取 样品溶液及标准溶液适量，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10: 0.5 — 1的氯仿、无水甲醇为展开剂，展开，晾干，置于波长为254mn的紫外灯 下检视，在氯霉素滴眼液样品溶液色谱与标准品溶液色谱相应的位置上，有相 同颜色的荧光斑点。
4、 根据权利要求1所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于在含量测定项中，增加大豆异黄酮含量的测定方法。
5、 根据权利要求4所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的大豆异黄酮含量的测定方法为高效液相法、紫外分光光度法、高效液相色谱一质谙法、气相色谱法、毛细管电泳法。
6、 根据权利要求5所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的大豆异黄酮含量的测定方法为高效液相法，所述的高效液相法 为取氯霉素滴眼液适量，用无水甲醇稀释成每毫升溶液中约含有大豆异黄酮 20Ug的溶液，注入高效液相色仪，记录色谱图，色谱条件为以十八垸基硅烷 键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相为体积比为20: 80: 0.1的乙腈、水、乙 酸溶液，柱温为40。C，检测波长254nm;另取染料木素对照品、大豆素对照品、大豆黄素对照品适量，同法测量， 以外标法计算氯霉素滴眼液中大豆异黄酮的含量。
7、 根据权利要求6所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在氯霉素滴眼液检测方法的鉴别项中增加高效液相色谱鉴别方法，具 体为在含量测定项下的大豆异黄酮的含量测定中，氯霉素滴眼液中的大豆异 黄酮主峰保留时间应与染料木素对照品、大豆素对照品、大豆黄素对照品的保 留时间一致。
8、 根据权利要求1所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于.*在检测方法中增加预处理步骤，所述的预处理步骤为取氯霉素滴眼液，加入混合菌种，在30—35'C保温搅拌不小于30分钟，过滤沉淀，即可，氯霉素滴眼液与混合菌种体积比为100: 0.5-5;所述的混合菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)CGMCC 1.794、 粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203、大月5埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1.1232、其扩大培养液混合的体积比为6-10: 1-10: 5-8。
9、 根据权利要求2所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特 征在于所述的氯霉素的标示量为85 — 115%。
10、 根据权利要求2所述的一种保质期长的氯霉素滴眼液的检测方法，其特征在于在中国药典的氯霉素滴眼液的检测项目中增加有效期项，并将有效 期定为2年。
全文摘要
本发明公开了一种保质期长氯霉素滴眼液的检测方法，包括中国药典中氯霉素滴眼液所有检测项目，在鉴别项中，增加了大豆异黄酮的鉴别方法。本发明与现有技术相比，将氯霉素滴眼液中对有效期有影响的大豆异黄酮检测出来，从而使氯霉素滴眼液的有效期能够达到2年以上，有利于氯霉素滴眼液的检测标准统一，便于厂家的生产、销售，以及消费者使用。
文档编号G01N33/15GK101216476SQ20081001919
公开日2008年7月9日 申请日期2008年1月16日 优先权日2008年1月16日
发明者南 方 申请人:南 方