专利名称：尿微量白蛋白检测方法、系统和试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于生物医药领域，具体而言涉及一种尿微量白蛋白检测方法、系统和试剂盒。
背景技术：
微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。尿微量白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。通常应用尿微量蛋白指标来监测肾病的发生。尿微量蛋白的检测是早期发现肾病最敏感、最可靠的诊断指标。尿微量白蛋白是评估肾脏受损程度:当发现尿微量白蛋白在20mg/L-200mg/L范围内，尿常规尿蛋白的显示为阴性(_)或(+_)，就属于微量白蛋白尿，这个时候说明肾脏已经损伤，如果患者能够经过规范的修复肾单位，逆转纤维化治疗，尚可彻底修复肾小球，消除蛋白尿。而当尿中微量白蛋白超过200mg/L时，尿常规测试尿蛋白阳性(+广(+++)，此时证明机体已有大量白蛋白漏出，可能出现低蛋白血症，如果不及时进行医治，就会进入尿毒症期。微量白蛋白尿也是整个血管系统改变的征象，并可认为是动脉病变的“窗口”，因为它是肾脏和心血管系统改变的早期指征。通过尿微量白蛋白的数值，结合发病情况、症状以及病史陈述就可以较为准确的诊断病情。判断病情进入了纤维化那个阶段。所以，定期检测尿微量白蛋白(U-MA)，普通人应当每年一次，而已增高的患者应每3个月测试一次。这样，对于肾病的预防及早期治疗都起的了积极作用。现有技术中测定尿微量白蛋白的方法主要有:放射免疫法、ELASA法等。放射免疫法最早用于测定尿微量白蛋白，随后免疫透射比浊法、酶联免疫测定等方法相继应用。但是，放射免疫利用放射性同位素作为示踪剂，影响操作人员的身体健康，并严重污染环境。其它的检测方法也具有仪器试剂条件等限制而难以推广的特点。

发明内容
本发明的目的:提供一种利用菁染料超分子体系检测尿微量白蛋白浓度的新方法，以及应用该方法配制而成的尿微量白蛋白浓度检测试剂盒。利用该试剂盒中的试剂，可通过检测溶液样本的荧光强度值测定样品中的尿微量白蛋白浓度。本发明的总体技术路线为:通过在样品中加入菁染料超分子体系使之与尿微量白蛋白作用，随之菁染料超分子体系的聚集形态发生转变，从而发生荧光强度变化，反映出尿微量白蛋白的浓度水平。本发明提供一种检测溶液中尿微量白蛋白浓度范围的方法，所述方法包括以下步骤:
(I)用pH5.0 8.2的含有钾离子或钠离子的缓冲溶液、尿微量白蛋白和菁染料配制尿微量白蛋白浓度不同的多个溶液样本，其中每个所述溶液样本中含有相同浓度的菁染料；(2)将所述多个溶液样本置于荧光光谱仪下，采用540至570nm的激发波长，检测采集波长处的荧光强度值；(3)以各个所述溶液样本的尿微量白蛋白浓度作为横坐标或纵坐标，以步骤(2)中测得的采集波长处的荧光强度值为纵坐标或横坐标作图，从而获得尿微量白蛋白浓度的标准曲线；(4)在待测液体样品中加入菁染料和含有钠离子或钾离子的缓冲溶液，以使待测液体样品中的菁染料浓度以及PH值与步骤(I)中的溶液样本一致，从而得到测试溶液，并记录待测液体样品被稀释的比例；(5)将步骤(4)中获得的测试溶液置于荧光光谱仪下，采用与步骤(2)相同的激发波长，检测所述采集波长处的荧光强度值；(6)利用步骤(5)中测得荧光强度值在步骤(3)中获得的尿微量白蛋白浓度标准曲线中找到对应的测试溶液的尿微量白蛋白浓度值，然后通过待测样品被的稀释比例计算出待测样品的尿微量白蛋白浓度；其中所述采集波长在550nm至650nm的范围。根据本发明的方法，其中所述含有钾离子或钠离子的缓冲液选自添加有水溶性钠盐或钾盐的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸钾-磷酸氢钾缓冲液、磷酸钠-磷酸氢钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、巴比妥钾-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、磷酸钠缓冲液或 者；所述缓冲液中缓冲剂的浓度范围在I 50mmol/L,优选10 30mmol/L。根据本发明的方法，其中所述水溶性钾盐或钠盐可选自氯化钾、溴化钾、碘化钾、硫酸钾、硝酸钾、氯化钠、溴化钠、碘化钠、硫酸钠或硝酸钠等，但可用于本发明的可溶性钠盐或钾盐不限于此，还要能够在水溶液中解离出钠离子或钾离子的盐都可以在本发明的方法中使用。根据本发明的方法，其中所述菁染料为下式I的化合物
权利要求
1.一种检测溶液中尿微量白蛋白浓度的方法，所述方法包括以下步骤: (1)用PH5.0 8.2的含有钾离子或钠离子的缓冲溶液、尿微量白蛋白和菁染料配制尿微量白蛋白浓度不同的多个溶液样本，其中每个所述溶液样本中含有相同浓度的菁染料； (2)将所述多个溶液样本置于荧光光谱仪下，采用540至570nm的激发波长，检测采集波长处的突光强度值； (3)以各个所述溶液样本的尿微量白蛋白浓度作为横坐标或纵坐标，以步骤(2)中测得的各溶液样本在采集波长处的荧光强度值为纵坐标或横坐标作图，从而获得尿微量白蛋白浓度的标准曲线； (4)在待测液体样品中加入菁染料、含有钾离子或钠离子的缓冲溶液，以使待测液体样品中的菁染料的浓度以及PH值与步骤(I)中的溶液样本一致，从而得到测试溶液，并记录待测液体样品被稀释的比例； (5)将步骤(4)中获得的测试溶液置于荧光光谱仪下，采用与步骤(2)相同的激发波长，检测所述采集波长处的荧光强度值； (6)利用步骤(5)中测得荧光强度值在步骤(3)中获得的尿微量白蛋白浓度标准曲线中找到对应的测试溶液的尿微量白蛋白浓度值，然后通过待测样品被的稀释比例计算出待测样品的尿微量白蛋白浓度； 其中所述采集波长在550nm至650nm的范围。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述菁染料为式I的化合物，
3.如权利要求2所述的方法，其中所述C1-C6的烷基选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基或异己基。
4.如权利要求2所述的方法，其中Rl选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、正己基、异己基、苯基、甲基苯基或二甲基苯基；R2、R3> R4和R5独立地选自甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戍基、异戍基、正己基或异己基。
5.如权利要求2所述的方法，其中所述5元至7元环结构为含有或不含有N或S原子的饱和或不饱和环结构。
6.如权利要求2所述的方法，其中Y选自氟、氯、溴、碘阴离子或三乙胺阳离子。
7.如权利要求2所述的方法，其中所述含有钾离子或钠离子的缓冲液选自添加有水溶性钾盐或钠盐的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸钾-磷酸氢钾缓冲液、磷酸钠-磷酸氢钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、巴比妥钾-盐酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、磷酸钠缓冲液；所述缓冲液中缓冲剂的浓度在I 50mmol/L范围。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述溶液样本中尿微量白蛋白浓度在(TlOOOmg/L的范围，优选在(T600mg/L的范围，进一步优选在(T400mg/L的范围。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述菁染料在所述溶液样本中的浓度在I至35 ymol/L的范围，优选在3 20ymol/L的范围。
10.如权利要求7所述的方法，其中所述水溶性钾盐或钠盐选自氯化钾、溴化钾、碘化钾、硫酸钾、硝酸钾、氯化钠、溴化钠、碘化钠、硫酸钠、硝酸钠；其中所述水溶性钾盐或钠盐在所述缓冲溶液中的浓 度在f300mmol/L的范围，优选在50 150mmol/L范围。
全文摘要
本发明涉及尿微量白蛋白检测方法、系统和试剂盒。一种检测溶液中尿微量白蛋白浓度的方法，包括(1)配制尿微量白蛋白浓度不同的多个溶液样本，其中每个所述溶液样本中含有相同浓度的菁染料；(2)检测采集波长处的荧光强度值；(3)获得尿微量白蛋白浓度的标准曲线；(4)在待测液体样品中加入菁染料、含有钾离子或钠离子的缓冲溶液，以使待测液体样品中的菁染料的浓度以及pH值与步骤(1)中的溶液样本一致，从而得到测试溶液，并记录待测液体样品被稀释的比例；(5)检测所述采集波长处的荧光强度值；(6)在标准曲线中找到对应的测试溶液的尿微量白蛋白浓度值，计算出待测样品的尿微量白蛋白浓度；其中所述采集波长在550nm至650nm的范围。
文档编号G01N21/64GK103115904SQ20131002750
公开日2013年5月22日 申请日期2013年1月24日 优先权日2013年1月24日
发明者孙红霞, 唐亚林, 杨千帆, 管爱娇 申请人:中国科学院化学研究所