专利名称：应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种生物芯片，特别涉及能筛选用于免疫组织化学染色 的分泌单克隆抗体的杂交瘤的培养上清的大间距组织芯片。
背景技术：
随着"人类基因组计划"的完成，人类已经进入"功能基因组计划"，蛋 白质组学是"功能基因组计划"的重要研究内容。蛋白质结构和功能的多样 性决定了蛋白质组学研究的复杂性，尤其是新基因所编码的蛋白质的表达分 布规律、结构和功能的揭示对生物学家来说是极富挑战性的。研究蛋白质的 表达分布规律最常用的方法是免疫组织化学染色技术，它是利用特异性抗体 在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行 定性、定位、定量测定的一项技术。单克隆抗体由于其识别表位的均一性和 特异性以及制备抗体质量的稳定性，在免疫组织化学染色中的应用越来越受 到重视。免疫组织化学染色技术把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧 妙地结合起来，借助显微镜(包括光学显微镜、荧光显微镜、电子显微镜)的 显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平检测目的蛋白质。免疫组织化学技术 中最为重要的是可特异识别目的蛋白质的第一抗体，最常用的组织切片是石 蜡切片。由于石蜡切片制备过程中需要经过福尔马林固定、脱水及浸蜡等过 程，蛋白质的空间构像常常发生改变，所以用酶联免疫吸附试验、流式细胞 术等方法筛选到的单克隆抗体常常不能识别这种改变的构像，故不能应用于免疫组织化学染色。因此，要获得能应用于免疫组织化学染色的单克隆抗体， 最好选用免疫组织化学染色的方法来筛选，而常规的大体切片的染色需要消 耗大量的人力和时间，远远不能满足单克隆抗体筛选的需要。 发明内容
为了克服上述现有技术不足，本实用新型的目的在于提供一种应用于单 克隆抗体筛选的大间距组织芯片，该芯片可大大提高免疫组织化学染色的效 率，大大减少染色需要的人力和时间，从而满足筛选分泌单克隆抗体的杂交 瘤的培养上清的需要。
本实用新型采取以下的技术方案 一种大间距组织芯片，包括32个来源 于相同组织的小组织样本，每个样本直径为1.5毫米，这些小组织样本构成
一个4行X8列的微阵列，在每行或每列中相邻组织样本之间的间距均为4
该组织芯片技术是将32个直径1.5毫米的小组织样本，以4x8阵列方式 包埋于一块25mmX50mm的石蜡蜡块中，然后进行切片。该实用新型可将 组织样本集中于一张芯片上，有利于实验条件的标准化，有效避免主观原因 造成的实验误差。
本实用新型明显减少每个组织样本的处理时间，使得在较短时间内完成 大量组织样本的免疫组织化学染色成为可能，从而使数量众多的、不同克隆 的单克隆抗体的筛选和阳性克隆的克隆化可以在同一天内进行；将免疫组织 化学染色条件包括抗原修复、温度、洗涤时间及所用试剂浓度均加以标准化， 保证了实验结果的准确可靠；由于每张芯片上有32个组织样本，可大大减少 组织切片管理的工作量；由于4行x8列的微阵列排列方式与单克隆抗体制备中使用的96孔板的布局相同，故96孔板中的单克隆抗体上清可以很方便地 加在芯片的相应的组织样本上，最大限度地减少样品间混淆的可能性。

图l是本实用新型大间距组织芯片结构示意图，A、组织样本，B、 4毫 米组织样本列间距，C、 4毫米组织样本行间距；
图2是用PAP疏水笔分隔每个组织样本的示意图，图中的标号为，D、 组织样本，E、 PAP疏水线；
图3是大间距组织芯片应用示意图，F、拟筛选的培养杂交瘤的96孔板， G、 32种(4列X8行)待测上清编号，H、加完待测上清后的大间距组织芯 片。
以下结合附图对本实用新型的内容作进一步的详细说明。
具体实施方式

参见图1、图2、图3所示，本实用新型的一种大间距组织芯片，包括 32个来源于相同组织的小组织样本，每个样本直径为1.5毫米，这些小组织 样本构成一个4行X8列的微阵列，在每行或每列中相邻组织样本之间的间 距均为4毫米，可以很方便的用PAP疏水笔分隔每个组织样本，使得一张芯 片足够检测32个不同的单克隆抗体待测上清。
大间距组织芯片可用于免疫组织化学染色的能分泌单克隆抗体的杂交瘤 的培养上清的筛选，其方法和步骤是
1) 将大间距组织芯片脱蜡至水并进行抗原修复，抗原修复完成后以PAP 疏水笔分隔每个组织样本(图2);
2) 0.3%甲醇-双氧水浸泡30分钟消除内源性过氧化物酶活性后用羊血清封闭30分钟；
3) 将96孔板中的待测杂交瘤上清移入一块新的96孔板，并依顺序加在 大间距组织芯片相应的位置(图3);
4) 依次滴加生物素标记的第二抗体和ABC复合物，DAB显色后用苏木 素衬染，中性树胶封片后显微镜下观察，确定阳性结果，将阳性克隆用有限 稀释法进行克隆化。
权利要求1.一种应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，包括一载玻片，其特征在于，在载玻片上分布有32个来源于相同组织的小组织样本，构成一个4行×8列的微阵列，每行中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。
2. 根据权利要求1所述的应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，其 特征在于，每列中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。
3. 根据权利要求1所述的应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，其 特征在于，每个小组织样本直径为1.5毫米。
专利摘要本实用新型公开了一种应用于单克隆抗体筛选的大间距组织芯片，该芯片包括一载玻片，在载玻片上分布有32个来源于相同组织的小组织样本，构成一个4行×8列的微阵列，每行中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。每列中相邻小组织样本之间的间距为4毫米。本实用新型可大大提高免疫组织化学染色的效率，大大减少染色需要的人力和时间，从而满足筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤的培养上清的需要。
文档编号G01N33/577GK201368876SQ20092003176
公开日2009年12月23日 申请日期2009年1月20日 优先权日2009年1月20日
发明者宋朝君, 琨 杨, 王福利, 金伯泉 申请人:中国人民解放军第四军医大学