专利名称：一种新的华蟾素冻干粉针及其制备方法和质量控制方法
技术领域：
本发明是涉及一种新的华蟾素冻干粉针及其制备方法和质量控制方法，属于医药技术领域。
背景技术：
华蟾素冻干粉针的主要成份水溶性吲哚类生物碱是中药干蟾皮的主要药效成份。华蟾素系由传统药材中华大蟾蜍阴干全皮为主要原料提取的水溶性吲哚类生物碱。蟾皮，始载于《本经逢原)》，又名虾蟆皮。为蟾蜍科动物中华大蟾蜍的全皮。全国各地均产，鲜用或干用。本品之性味为辛凉，甘平，有毒，其功用为破症结、行水湿、化毒、定痛。主治症瘕、积聚、鼓胀、水肿等病症。现代医学研究表明，华蟾素主要在抗中、晚期肿瘤、乙型肝炎及其病毒携带者等抗病毒和免疫调节方面有显著疗效。目前华蟾素有口服液，片剂，胶囊，注射液等制剂。
经研究表明，华蟾素注射液常温放置90天，含量下降明显，由于质量不稳定而影响疗效，同时水针存在的固有缺陷就是稳定性问题和携带、储存、运输时容易破碎，带来很多麻烦。
同时研究表明提示干蟾皮在水提取过程中毒性降低(吴建军等.华蟾素对麻醉犬正常心脏血流动力学影响的初步观察.徐州医学院学报.1997，17(3)285)，说明干蟾皮水提取能有效的降低其毒性；专利(申请号20041008994.4)一种华蟾素的冻干粉针，其有效成份是醇提取物，由于华蟾素醇提物毒性较大，不适合在临床使用。
同时活性成份以干蟾皮的水提取物制备冻干粉针未见任何报道。

发明内容
本发明的目的是提供毒性低、质量更稳定的华蟾素冻干粉针制剂。
本发明的另一个目的提供上述冻干粉针制剂的制备方法和质量控制方法。
本发明的目的是通过如下方案实现的华蟾素的冻干粉针制剂由干蟾皮的活性成份和/或药学上可接受的载体构成，其中所述的活性成份为干蟾皮的水提取物。
其所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。优选甘露醇或乳糖。
(一)本发明制成冻干粉针的制备方法通过以下步骤1、华蟾素的水提取；
2、加入活性炭吸附剂和药用载体；3、搅拌加热、溶解、过滤、除热源、灭菌、灌装；4、冷冻干燥，即得。
具体如下其中步骤(1)所述的提取为取干蟾皮，洗净，加水4～10倍，煎煮1～4次，合并煎液，滤过，温度在70～90℃，滤液浓缩至相对密度为1.0～1.5，冷却至20～60℃，加乙醇使含醇量达50～80％，搅匀，静置12～48小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加入乙醇使含醇量达70～90％，搅匀静置24～72小时，滤过，回收乙醇至无醇味，相当于生药2～6g/ml，冷藏12～48小时。其中步骤(2)所述加入药用载体的量为0.1～10％和活性炭吸附剂的量为0.1～1％。其中步骤(3)加热煮沸10～40分钟；除热源为采用孔径为0.08～0.9微米的微孔滤膜过滤。
其中优选制备方法如下取干蟾皮，洗净，加水5～6倍，煎煮二次，第一次45分钟，第二次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.0～1.5(85±5℃)，冷却至40℃，加乙醇使含醇量达60％，搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加入乙醇使含醇量达85％，搅匀静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味，相当于生药4g/ml，冷藏24小时，滤过，药液用注射用水调节至含生药1g/ml，加入2％甘露醇和0.3％活性炭，煮沸15分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干即得冻干粉针。
(二)本发明冻干粉针的质量控制方法为质量控制方法中的鉴别方法选自下述方法中的一种或几种1、取本品，加甲醇2ml使溶解，取滤液加对二甲氨基苯甲醛固体少许，滴加浓硫酸，即显紫红色；2、取本品，加水2ml使溶解，加茚三酮试液2～3滴，摇匀，在沸水浴上加热5分钟，即先蓝紫色；3、取本品加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取干蟾皮对照药材1g，剪碎，加氯仿30ml加热回流30分钟，滤过，弃去氯仿液，药渣蒸干加甲醇30ml，加热回流约1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。取五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品2mg，加甲醇2ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(3-5∶0.5-2∶1-8)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％对二甲氨基苯甲醛浓盐酸液，吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
优选以下方法取本品加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取干蟾皮对照药材1g，剪碎，加氯仿30ml加热回流30分钟，滤过，弃去氯仿液，药渣蒸干加甲醇30ml，加热回流约1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。取五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品2mg，加甲醇2ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％对二甲氨基苯甲醛浓盐酸液，吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点质量控制方法中的含量测定为吲哚类总生物碱的含量测定(以5-羟色胺计)精密称取于五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品适量，加水溶解，制成每ml含0.04mg对照品溶液；取取本品2瓶，分别加水2ml溶解，定量转移至10ml的量瓶中，荡洗药瓶3次并转移至容量瓶中，加水至刻度，得供试液；取供试液、对照品溶液各5ml置10ml量瓶中，加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液(2→3)至刻度，摇匀，放置30分钟。照分光光度法，以水为空白，在555nm的波长处测定吸收度，计算，即得。
(三)制剂中的吲哚类总生物碱含量实验方法参照以上方法对华蟾素注射液(安徽金蟾药业总公司)，华蟾素冻干粉针(本公司提供)进行含量测定。
结果如下吲哚类总生物碱含量(以5-羟色胺计)组别 吲哚类总生物碱含量(mg/支)一个月内三个月后华蟾素注射液 3.382.63本发明华蟾素冻干粉针 3.953.89以上结果表明，本发明的华蟾素冻干粉针比华蟾素注射液制剂更稳定，疗效更强。
(四)华蟾素两种粉针制剂的毒性比较本发明的华蟾素水提取物，华蟾素的醇提取物按专利(专利号200410083994.4)制备。实验方法取小鼠60只，随机三组，各20只，禁食12小时后，剂量为400g/kg(按生药量计)一次性灌胃给药。三组按等同量(按生药量计)给药。结果如下组别出现死亡数量对照组 1华蟾素醇提取物 5本发明华蟾素水提取物 2
以上结果表明，本发明的华蟾素冻干粉针制剂毒性更低，适合临床应用。
具体实施例方式
实施例1组分 量(克/支)华蟾素提取物(以生药计) 2支架剂(甘露醇) 0.002实施例2组分 量(克/支)华蟾素提取物(以生药计) 2支架剂(甘露醇) 0.02实施例3组分 量(克/支)华蟾素提取物(以生药计) 2支架剂(甘露醇) 0.01实施例4组分 量(克/支)华蟾素提取物(以生药计) 2支架剂(甘露醇) 0.2实施例5组分 量(克/支)华蟾素提取物(以生药计) 2支架剂(乳糖)0.03以上实施例华蟾素冻干粉针的制备工艺为取干蟾皮1000g，洗净，加水5～6倍，煎煮二次，第一次45分钟，第二次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.1～1.2(85±5℃)，冷却至40℃，加乙醇使含醇量达60％，搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加乙醇使含醇量达85％，搅匀，静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味得华蟾素提取物，加水、活性碳适量煮沸，滤过，加入甘露醇或乳糖，加水调整至总量1000ml，搅匀，静置，滤过，灌封于5ml安剖瓶，灭菌，-20℃预冻24小时，于-50～60℃真空冷冻72小时，即得。得华蟾素冻干粉针半成品，质量检测合格后贴签、包装，即得华蟾素冻干粉针成品。
实施例6本发明冻干粉针质量控制方法鉴别1、取本品，加甲醇2ml使溶解，取滤液加对二甲氨基苯甲醛固体少许，滴加浓硫酸，即显紫红色2、取本品，加水2ml使溶解，加茚三酮试液2～3滴，摇匀，在沸水浴上加热5分钟，即先蓝紫色。
3、取本品加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取干蟾皮对照药材1g，剪碎，加氯仿30ml加热回流30分钟，滤过，弃去氯仿液，药渣蒸干加甲醇30ml，加热回流约1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。取五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品2mg，加甲醇2ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％对二甲氨基苯甲醛浓盐酸液，吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
含量测定吲哚类总生物碱的含量测定(以5-HT计)精密称取于五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品适量，加水溶解，制成每ml含0.04mg对照品溶液；取取本品2瓶，分别加水2ml溶解，定量转移至10ml的量瓶中，荡洗药瓶3次并转移至容量瓶中，加水至刻度，得供试液；取供试液、对照品溶液各5ml置10ml量瓶中，加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液(2→3)至刻度，摇匀，放置30分钟。照分光光度法，以水为空白，在555nm的波长处测定吸收度，计算，即得。
权利要求
1.一种华蟾素冻干粉针，它是由干蟾皮的活性成份和/或药学上可接受的载体构成，其特征在于所述的活性成份为干蟾皮的水提取物。
2.根据权利要求1所述的华蟾素冻干粉针，其特征是所述的药学上可接受的载体是木糖醇、甘露醇、乳糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化钠、葡萄糖酸钙或磷酸钙中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的华蟾素冻干粉针的制备方法，其特征在于它采取以下步骤(1)华蟾素的水提取；(2)加入活性炭吸附剂和药用载体；(3)搅拌加热、溶解、过滤、除热源、灭菌、灌装；(4)冷冻干燥，即得。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其中步骤(1)所述的提取为取干蟾皮，洗净，加水4～10倍，煎煮1～4次，合并煎液，滤过，温度在70～90℃，滤液浓缩至相对密度为1.0～1.5，冷却至20～60℃，加乙醇使含醇量达50～80％，搅匀，静置12～48小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加入乙醇使含醇量达70～90％，搅匀静置24～72小时，滤过，回收乙醇至无醇味，相当于生药2～6g/ml，冷藏12～48小时。其中步骤(2)所述加入药用载体的量为0.1～10％和活性炭吸附剂的量为0.1～1％。其中步骤(3)加热煮沸10～40分钟；除热源为采用孔径为0.08～0.9微米的微孔滤膜过滤。
5.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为取干蟾皮，洗净，加水5～6倍，煎煮二次，第一次45分钟，第二次30分钟，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.0～1.5(85±5℃)，冷却至40℃，加乙醇使含醇量达60％，搅匀，静置24小时，取上清液回收乙醇至无醇味，加入乙醇使含醇量达85％，搅匀静置48小时，滤过，回收乙醇至无醇味，相当于生药4g/ml，冷藏24小时，滤过，药液用注射用水调节至含生药1g/ml，加入2％甘露醇和0.3％活性炭，煮沸15分钟，滤过，药液用0.2微米的微孔滤膜过滤，灭菌，灌装，冻干，即得冻干粉针。
6.根据权利要求2所述的华蟾素冻干粉针，其特征是所述的药学上可接受的载体是甘露醇或乳糖。
7.根据权利要求1所述制成冻干粉针的质量控制方法，其特征在于该方法中的鉴别方法包括如下鉴别中的一种或几种(1)取本品，加甲醇2ml使溶解，取滤液加对二甲氨基苯甲醛固体少许，滴加浓硫酸，即显紫红色(2)取本品，加水2ml使溶解，加茚三酮试液2～3滴，摇匀，在沸水浴上加热5分钟，即先蓝紫色。(3)取本品加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取干蟾皮对照药材1g，剪碎，加氯仿30ml加热回流30分钟，滤过，弃去氯仿液，药渣蒸干加甲醇30ml，加热回流约1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。取五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品2mg，加甲醇2ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(3-5∶0.5-2∶1-8)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％对二甲氨基苯甲醛浓盐酸液，吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
8.根据权利要求7所述(3)，其特征在于质量控制方法中的鉴别方法为取本品加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取干蟾皮对照药材1g，剪碎，加氯仿30ml加热回流30分钟，滤过，弃去氯仿液，药渣蒸干加甲醇30ml，加热回流约1.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。取五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品2mg，加甲醇2ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20％对二甲氨基苯甲醛浓盐酸液，吹干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
9.根据权利要求1所述制成冻干粉针的质量控制方法，其特征在于该方法的含量测定方法吲哚类总生物碱的含量测定(以5-HT计)精密称取于五氧化二磷真空干燥器至恒重的5-羟色胺对照品适量，加水溶解，制成每ml含0.04mg对照品溶液；取本品2瓶，分别加水2ml溶解，定量转移至10ml的量瓶中，荡洗药瓶3次并转移至容量瓶中，加水至刻度，得供试液；取供试液、对照品溶液各5ml置10ml量瓶中，加15％对二甲氨基苯甲醛盐酸溶液(2→3)至刻度，摇匀，放置30分钟。照分光光度法，以水为空白，在555nm的波长处测定吸收度，计算，即得。
全文摘要
本发明是涉及一种新的华蟾素冻干粉针及其制备方法，它是由干蟾皮的活性成分和/或药学上可接受的载体制备而成，其中的活性成分为干蟾皮的水提取物；同时本发明还提供了此冻干粉针的质量控制方法；研究表明此冻干粉针具有疗效更强、毒性低、质量更稳定及携带方便等特点。
文档编号G01N30/02GK1785212SQ200510061288
公开日2006年6月14日 申请日期2005年10月28日 优先权日2005年10月28日
发明者陈长谭, 王安行 申请人:杭州豪迈医药科技有限公司, 海南豪创药业有限公司