专利名称：检测禽流感病毒的蛋白质芯片的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种蛋白质芯片，特别涉及一种检测禽流感病毒的蛋白质芯片。
背景技术：
禽流感病毒(AIV)属于正黏病毒科(ort homy xoviridae)流感病毒属，是一种A 型流感病毒。根据血凝素(H)和神经氨酸酶(N)，可将A型流感病毒分为不同亚型，已发现 有16种血凝素H亚型(Hl H16)和9种神经氨酸酶N亚型(附 N9)[2]。A型流感病毒 感染人、猪、马、海豹、水貂、鲸及所有禽类。在正黏病毒科中A型流感病毒是唯一感染禽类 的病毒型。禽流感病毒呈世界性分布，绝大多数禽流感病毒为隐性感染，感染后可以表现为 轻度的呼吸道症状、消化道症状，死亡率较低；或表现为较严重的全身性、出血性、败血性症 状，死亡率较高。这种症状上的不同，主要是由禽流感病毒的毒力所决定的。根据禽流感病 毒致病性和毒力的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性 禽流感。研究表明，原本为低致病性禽流感病毒(H5N2、H7N7、H9N2)，可经6 9个月禽间 流行的迅速变异而成为高致病性禽流感病毒。高致病性禽流感病毒(HPAIV)感染动物具有 迅速传播和高致死性的特性，通常由H5、H7和H9亚型禽流感病毒引起，是严重危害养禽业 的重大传染病之一，甚至威胁着人类的健康。近年来AIV突破种间障碍，直接感染人并且致 人死亡。由于其病毒亚型众多，抗原性变异极快，毒株的致病性也相差很大，早期快速检测 禽流感病毒成了预防和控制禽流感的前提条件。目前用于禽流感检测的方法有禽流感病毒分离技术、琼脂扩散(AGP)试验、血凝 试验、血凝抑制(HI)试验、神经氨酸酶抑制(Ni)试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、病毒中 和试验(SN)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫荧光技术(IF)及核酸探针技术等。其 中血凝试验、血凝抑制试验和琼脂扩散试验是OIE推荐使用的方法。可以看出，上述禽流感 的检测方法都是较传统的技术，病毒分离培养及血凝试验、中和试验都需要2 3天方能完 成，且需要在复杂的技术操作和昂贵仪器的试验室进行。PCR、IF方法也需要一天时间并需 较高设备。ELISA法只能一次检出一个片断，连一个亚型都无法完整测出。由于禽流感的抗 原变异较大，由H1-H16、N1-N9之间的不同组合就能演变出几十甚至上百种亚型。因此，光 靠传统方法进行如此多型别的鉴定是费时费事的。

实用新型内容本实用新型的目的在于提供一种可同时检测人类和禽类禽流感病毒的蛋白质芯 片。本实用新型提供的检测禽流感病毒的蛋白质芯片，包括含有至少11个凹形腔室 的固体基质和设置在所述至少11个凹形腔室内的包被层；所述11个凹形腔室内的包被层分别是检测禽流感病毒的阳性质控蛋白、检测禽 流感病毒的阴性质控蛋白以及如下所示的检测禽流感病毒的9种抗原H1亚型抗原、H3亚 型抗原、H5亚型抗原、H7亚型抗原、H9亚型抗原、附亚型抗原、N2亚型抗原、NP亚型抗原和NSl亚型抗原；所述固体基质的所有凹形腔室经戊二醛处理使其表面带有活性醛基基团，所述所 有凹形腔室通过醛基与所述包被层的蛋白质的氨基发生缩合反应并形成共价键连接。上述固体基质为玻片、硅片、塑料或硝酸纤维膜。进一步，上述凹形腔室分布呈方阵阵列，所述方阵阵列为5X5、4X4或6X6的点阵。所述5X5点阵排布具体如下从上至下用A、B、C、D、E分别代表行，从左至右用1、2、3、4、5分别代表列；其中，腔 室A1、B1、C1、D1、E1的包被层是阳性质控蛋白，腔室E4、E5的包被层是阴性质控蛋白，腔室 A2、B2的包被层是Hl亚型抗原，A3、B3的包被层是H3亚型抗原，A4、B4的包被层是H5亚 型抗原，A5、B5的包被层是H7亚型抗原，C2、D2的包被层是H9亚型抗原，C3、D3的包被层 是附亚型抗原，C4、D4的包被层是N2亚型抗原，C5、D5的包被层是NSl亚型抗原，腔室E2、 E3的包被层是NP亚型抗原。本实用新型在使用时，直接将待测样品加入各腔室中，温育后加入二抗。当检测对 象为禽类时，向每腔室加入二抗为兔抗鸡IgG-HRP ；当检测对象为人时，则向每腔室加入二 抗SPA-HRP ；然后在37°C下温育30分钟后，向每腔室中加入显色剂即可。本实用新型检测禽流感病毒的蛋白质芯片能在很短的时间内检测出病毒结果，可 直观地了解禽流感病毒的感染情况，同时可用于对人类和禽类禽流感病毒抗体的快速鉴别 诊断，为禽流感的防治创造了良好的前提条件。

图1为本实用新型蛋白质芯片的结构示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本实用新型作进一步说明，但本实用新型并不限于以下实 施例。实施例1如图1所示，一种检测禽流感病毒的蛋白质芯片，包括含二十五个凹形腔室2的玻 片1和设置在二十五个凹形腔室2内的包被层。包被层包被的是蛋白质。玻片1经过戊二 醛处理使其表面带有活性醛基基团，玻片1通过醛基与包被层包被的蛋白质的氨基发生缩 合反应并形成共价键连接。具体地讲，25个凹形腔室2呈5X5点阵分布，该5X5点阵排布为从上至下用A、 B、C、D、E分别代表行，从左至右用1、2、3、4、5分别代表列；其中，腔室Al、Bi、Cl、Dl、El中 包被层是阳性质控蛋白(鸡IgG与人IgG的混合物)，腔室E4、E5包被层是阴性质控蛋白 (待测样品稀释液)，各双位点腔室A2、B2包被层是Hl亚型抗原，A3、B3包被层是H3亚型 抗原，A4、B4包被层是H5亚型抗原，A5、B5包被层是H7亚型抗原，C2、D2包被层是H9亚型 抗原，C3、D3包被层是附亚型抗原，C4、D4包被层是N2亚型抗原，C5、D5包被层是NSl亚 型抗原，腔室E2、E3包被层是NP亚型抗原。本实用新型提供的蛋白质芯片可以直接拿来使用，将待检测的血清稀释后加入该蛋白质芯片温育，然后加入二抗。当检测对象是禽类时，二抗为兔抗鸡IgG-HRP ；当检测对 象是人时，二抗为SPA-HRP。结果判断如下阴性标本不显色，即为背景色(背景色是指芯片基质的颜色、点与 点之间的部分为背景)，显色即为阳性。根据显色的深浅程度可以初略判定阳性的强与弱。本实用新型以双位点设计，若双位点中只有一个显色，另一位点未显色，则实验需重复。本实用新型检测禽流感病毒的蛋白质芯片能在很短的时间内检测出病毒结果，可 直观地了解禽流感病毒的感染情况，同时可用于对人类和禽类禽流感病毒抗体的快速鉴别 诊断，为禽流感的防治创造了良好的前提条件。以上所述之实施方式为本实用新型的实施案例之一，并非以此限制本实用新型的 实施范围，故凡依本实用新型之形状、构造及原理所做的等效变化，均应涵盖在本实用新型 的保护范围内。
权利要求一种检测禽流感病毒的蛋白质芯片，其特征在于所述检测禽流感病毒的蛋白质芯片包括含有至少11个凹形腔室的固体基质和设置在所述至少11个凹形腔室内的包被层。
2.根据权利要求1所述的检测禽流感病毒的蛋白质芯片，其特征在于所述凹形腔室 分布呈方阵阵列，所述方阵阵列为5X5、4X4或6X6的点阵。
专利摘要本实用新型公开了一种检测禽流感病毒的蛋白质芯片。所述蛋白质芯片包括含有至少11个凹形腔室的固体基质和设置在所述至少11个凹形腔室内的包被层；所述11个凹形腔室内的包被层分别是检测禽流感病毒的阳性质控蛋白、检测禽流感病毒的阴性质控蛋白以及如下所示的检测禽流感病毒的9种抗原H1亚型抗原、H3亚型抗原、H5亚型抗原、H7亚型抗原、H9亚型抗原、N1亚型抗原、N2亚型抗原、NP亚型抗原和NS1亚型抗原；所述固体基质的所有凹形腔室经戊二醛处理使其表面带有活性醛基基团，所述所有凹形腔室通过醛基与所述包被层的蛋白质的氨基发生缩合形成共价键连接。本实用新型的蛋白质芯片能在很短的时间内检测出病毒结果，可直观了解禽流感病毒的感染情况。
文档编号G01N33/543GK201740782SQ20102016944
公开日2011年2月9日 申请日期2010年4月20日 优先权日2010年4月20日
发明者刘春晓, 史蕾, 季明辉, 徐云庆, 李振良, 杨燕秋, 林连成, 滕娟, 赵纯中, 顾大勇, 黄彤文 申请人:深圳国际旅行卫生保健中心;深圳市赛尔生物技术有限公司