专利名称：干热灭菌内毒素指示剂试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型公开一种内毒素指示剂试剂盒，按国际专利分类表(IPC)划分属于检测试剂盒制造技术领域，尤其是涉及一种用于验证干热灭菌设备除内毒素(热原)效果的试剂盒。
背景技术：
除去细菌内毒素是制药与生物制品工业的一个重要问题。干热法除去热原是常用的手段。干热灭菌设备作为注射药品生产中的重要设备，根据药品生产规范的要求必须作设备验证。中国药典2010附录XVI灭菌法项目规定细菌内毒素灭活验证试验是证明干热灭菌除热原过程有效性的试验。一般将不小于1000单位的细菌内毒素指示剂加入待去热原的物品中，证明该去热原工艺能使内毒素效价下降1000倍以上，内毒素指示剂在干热灭菌过程前后效价的变化是通过鲎试剂来判断的，但目前还没有专门用于干热灭菌内毒素指示剂的试剂盒，并且采购的实验所用的细菌内毒素指示剂纯度不够，高温加热时炭化，从而影响到实验结果。
发明内容针对现有技术的不足，本实用新型提供了一种使用方便的干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，符合中国药典2010附录XVI灭菌法项目规定，使用时，将内毒素指示剂置于待验证的干热灭菌设备或加入到待除热原的物品中，干热灭菌前后用鲎试剂检测内毒素水平， 证明该去热原设备或工艺能使内毒素水平至少下降3个对数单位。为达到上述目的，本实用新型是通过以下技术方案实现的一种干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，包括盒体及其内的若干细菌内毒素指示剂瓶及鲎试剂瓶，其中细菌内毒素指示剂瓶，其内灌装高纯度内毒素，且内毒素的效价为100(T10000EU/ 瓶；鲎试剂瓶，其内灌装凝胶法鲎试剂或定量法鲎试剂。进一步，所述细菌内毒素指示剂瓶内的高纯度内毒素是从大肠杆菌0111 :B4或 055 :B5菌株提取的精致内毒素。进一步，所述的鲎试剂瓶为安瓿瓶，其内鲎试剂的装量为0. Iml0进一步，所述的细菌内毒素指示剂瓶与鲎试剂瓶的数量分别为二十支安瓿瓶和十支安瓿瓶。本实用新型中内毒素指示剂是从大肠杆菌0111 :B4或055 :B5等菌株提取的精致内毒素，经过特殊工艺干燥在玻璃安瓿中。内毒素指示剂的效价为每瓶100(T10000EU。 内毒素指示剂不含任何稳定剂、赋形剂和分散剂，防止在高温加热时炭化，影响实验结果。 由于玻璃容器内的固体内容物很少，所以看上去像一支空瓶。本实用新型使用时，将内毒素指示剂在最大负载状态下放置于干热灭菌设备的冷点区域，进行内毒素挑战实验。用试剂盒配套的鲎试剂采用凝胶法或定量法检测内毒素指示剂在干热灭菌程序开始前和干热灭菌程序结束后效价的变化情况，如果内毒素指示剂的效价下降至少1000倍，则该次干热灭菌达到药典规定的灭菌要求。本实用新型的优点是内毒素指示剂纯度高，效价稳定，不含稳定剂、赋形剂和分散剂，在高温灭菌时不炭化，不影响灭菌后的内毒素效价检测；另外由于本实用新型符合中国药典2010附录X VI灭菌法项目规定，使用简单方便。

图1是本实用新型结构示意图。
具体实施方式

以下结合附图对本实用新型作进一步说明实施例请参阅图1，一种干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，包括盒体1及其内的二十支细菌内毒素指示剂瓶11及十支鲎试剂瓶12，大肠杆菌0111 :B4提取的精致内毒素， 经过特殊工艺干燥在玻璃安瓿中制作细菌内毒素指示剂瓶，且内毒素指示剂的效价为每瓶 1000-10000EU,内毒素指示剂不含任何稳定剂、赋形剂和分散剂；凝胶法或定量法鲎试剂， 装量为0. Iml/支，灌装于无热原安瓿中，冷冻干燥封口。本实用新型的使用方法1.内毒素指示剂的挑战实验试验在干热灭菌设备最大装载条件下进行，在干热灭菌设备的各冷点位置分别放置1-2支未开启的内毒素指示剂。运行实际的干热除热原程序。干热灭菌过程结束后，取出各支内毒素指示剂；2.确定未经干热灭菌处理过的内毒素指示剂效价2. 1任取1-2支未经干热灭菌处理过的内毒素指示剂，用1. 0 ml细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上剧烈振摇15分钟；2. 2如果试剂盒中的鲎试剂为定量法鲎试剂，将步骤2. 1所得内毒素溶液稀释P/ Cffl倍，使其理论值在内毒素标准曲线线性范围内。其中，P为内毒素指示剂标示值，Cm为内毒素标准曲线线性范围内接近中间点的值。如内毒素标准曲线线性范围为0.01-100 EU/ ml, Cm取1.0 EU/ml ；如内毒素标准曲线线性范围为0. 1-1.0 EU/ml，Cm取0. 25 EU/ml或 0.5 EU/ml ；按《中华人民共和国药典》附录“细菌内毒素检查法”光度测定法确定未经灭菌处理过的内毒素指示剂效价；2. 3如果试剂盒中鲎试剂为凝胶法鲎试剂，将步骤2. 1所得溶液稀释Ρ/2λ、P/ λ、2Ρ/λ和4Ρ/λ倍。其中，P为内毒素指示剂标示值，λ为鲎试剂标示灵敏度。例如选用λ为0. 125EU/ml的鲎试剂来验证效价为1250EU/支的内毒素指示剂的活性单位。内毒素指示剂的稀释倍数为 Ρ/2 λ = 5000,P/λ = 10，000、2Ρ/λ = 20，000 和 4P/λ = 40, 000 倍；按《中华人民共和国药典》附录“细菌内毒素检查法”凝胶半定量试验的方法确定未经灭菌处理过的内毒素指示剂效价；[0026]3.确定干热灭菌处理过的内毒素指示剂效价3. 1将上述经干热灭菌处理过的内毒素指示剂用Iml细菌内毒素检查用水溶解， 在旋涡混合器上剧烈振摇15分钟；3. 2如果试剂盒配套的是定量法鲎试剂，将步骤3. 1所得内毒素溶液稀释P/ (1000 · Cffl)倍。P为内毒素指示剂标示值，Cm为内毒素标准曲线线性范围内接近中间点的值。若 P = 1250EU/支，C111=L 25EU/ml,则 P/(1000 · Cm) = 1250/(1000 X 1. 25)= 1.0 倍，即不用稀释。若 P = 1250EU/支，Cm=O. 25EU/ml,则 P/(1000 · Cm) = 1250/(1000 X 0. 25) = 5倍，即稀释5倍；按照《中华人民共和国药典》附录“细菌内毒素检查法”光度测定法确定干热灭菌处理过的内毒素指示剂效价3. 3如果试剂盒配套的是灵敏度为λ凝胶法鲎试剂，则需将步骤3. 1所得内毒素溶液分别稀释 P/ (1000 · 2 λ )，P/ (1000 · λ )，2Ρ/ (1000 · λ )，和 4Ρ/ (1000 · λ )倍;按照《中华人民共和国药典》附录“细菌内毒素检查法”凝胶半定量试验的方法确定干热灭菌过的内毒素指示剂效价；4.内毒素效价下降倍数的计算效价下降倍数=未经干热灭菌处理的内毒素指示剂效价平均值/经过干热灭菌处理过的内毒素指示剂的效价平均值。若效价下降倍数大于1000，该设备干热除热原效果符合标准，反之，不符合规定。以上所记载，仅为利用本创作技术内容的实施例，任何熟悉本项技艺者运用本创作所做的修饰、变化，皆属本创作主张的专利范围，而不限于实施例所揭示者。
权利要求1.一种干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，其特征在于包括盒体及其内的若干细菌内毒素指示剂瓶及鲎试剂瓶，其中细菌内毒素指示剂瓶，其内灌装高纯度内毒素，且内毒素的效价为100(T10000EU/瓶； 鲎试剂瓶，其内灌装凝胶法鲎试剂或定量法鲎试剂。
2.根据权利要求1所述的干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，其特征在于所述细菌内毒素指示剂瓶内的高纯度内毒素是从大肠杆菌0111 :B4或055 :B5菌株提取的精致内毒素。
3.根据权利要求1所述的干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，其特征在于所述的鲎试剂瓶为安瓿瓶，其内鲎试剂的装量为0. Iml0
4.根据权利要求1所述的干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，其特征在于所述的细菌内毒素指示剂瓶与鲎试剂瓶的数量分别为二十支安瓿瓶和十支安瓿瓶。
专利摘要本实用新型公开一种干热灭菌内毒素指示剂试剂盒，包括盒体及其内的二十支细菌内毒素指示剂瓶及十支鲎试剂瓶，其中内毒素指示剂为灌装在玻璃安瓿中的提纯的大肠杆菌O111B4或O55B5等菌株提取的精致内毒素干燥品，内毒素指示剂的效价为1000-10000EU/瓶，不含稳定剂、赋形剂和分散剂。使用时，将内毒素指示剂置于待验证的干热灭菌设备或加入到待除热原的物品中，干热灭菌前后用鲎试剂检测内毒素水平，证明该去热原设备或工艺能使内毒素水平至少下降3个对数单位，本实用新型符合中国药典2010附录ⅩⅥ灭菌法项目规定，使用简单方便。
文档编号G01N33/579GK202119776SQ201120213880
公开日2012年1月18日 申请日期2011年6月23日 优先权日2011年6月23日
发明者不公告发明人 申请人:厦门市鲎试剂实验厂有限公司