专利名称：标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液的制作方法
标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液本发明涉及ー种医药试剂，具体的说是ー种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液。该稀释液能够稳定标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，并可通过冷冻干燥的方法来长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，大大提升了碱性磷酸酶在免疫体外诊断行业的应 用。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)是ー种广泛存在于动物、植物、微生物中的酶。临床体外诊断经常用到的碱性磷酸酶主要从小牛肠粘膜及大肠杆菌中获得，两种酶均可在市场购买如Roche、Sigma等。碱性磷酸酶可以催化多种底物显色，所以它在临床免疫体外诊断行业有着广泛的应用。标记了碱性磷酸酶的抗原抗体试剂是临床免疫体外诊断试剂盒的重要组成部分。免疫体外诊断试剂的原理主要通过抗原抗体的特异性结合，然后通过酶催化底物显色，来达到定量诊断的效果，所以保证稳定的标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性至关重要。国内以酶作为放大系统的厂家，用到的酶多是辣根过氧化物酶，主要原因是该酶便宜且标记试剂储存较稳定，但辣根过氧化物酶标记试剂灵敏度较碱性磷酸酶低。而碱性磷酸酶没有被广泛应用的原因在于性磷酸酶标记试剂的稳定性。本发明为了克服现有技术的不足，发明提供了ー种稳定标记了碱性磷酸酶抗原抗体的稀释液，它能够稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，该稀释液亦可通过冷冻干燥的方法来长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性。为了实现上述目的，本发明设计了ー种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于由如下物质组成，磷酸盐缓冲液，多羟基类有机化合物，氨基酸及蛋白质类化合物，金属离子，非离子型表面活性剤，防腐剤。所述磷酸盐缓冲液，由如下物质组成NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H20 2. 9g ；KH2PO4O. 2g ；调PH 至 7· 4，加 DDW 定容至 1000mL。所述多羟基类有机化合物为多糖类化合物或多元醇类化合物。所述多糖类化合物为蔗糖、果糖、麦芽糖、葡聚糖、半乳糖、乳糖或海藻糖中的ー种或多种混合物。所述多元醇类化合物为甘油、甘露醇、肌醇、PEG6000、PEG8000、PEG1000或PEG20000中的ー种或多种混合物。
所述氨基酸及蛋白质类化合物为甘氨酸、缬氨酸、牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶中的ー种或多种混合物。所述金属离子为镁离子、锌离子、钙离子或铁离子中的ー种或多种混合物。所述非离子型表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温_80、Triton X-20、Triton X-100或Triton X-300中的一种或多种混合物。所述防腐剂为叠氮钠、Proclin-300或庆大霉素中的ー种或多种混合物。本发明同现有技术相比，能够稳定标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，且将稀释液加入碱性磷酸酶标记的抗原抗体通过冷冻干燥法，制备成冻干品，这样能够长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性。
具体实施方式
]下面结合具体实施例，进ー步阐述本发明。应理解这些实施例仅用于说明本发明不用于限制本发明的范围。实施例I :本发明稀释液由如下物质配置而成。磷酸盐缓冲液NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H202. 9g ；KH2PO4O. 2g ；调PH 至 7· 4，加 DDW 定容至 1000mL。多羟基类有机化合物甘露醇30. 0g。氨基酸及蛋白质类化合物BSA (牛血清白蛋白) 10. Og ;甘氨酸20. 0g。金属离子MgCl2ImM ；ZnC120. ImM ；非离子型表面活性剂Tween X-200. 5ml0防腐剂NaN3 (叠氮钠)0. 90g。将标记了碱性磷酸酶的AFP抗体浓溶液，按I : 4000用稀释液稀释，获得酶标试齐U，将该试剂分成两份，一份置于37°c恒温箱内进行加速试验，另ー份置于2-8°C冰箱内保存。37°C加速7天后，取出酶标试剂，以2-8°C的酶标试剂作为对照，分别加入包被了 AFP抗体的ELISA板孔内，加入AFP抗原，抗原抗体37で反应Ih，洗板，最后以PNPP显色，终止反应测吸光度。37°C加速7天后其活性剩余99. 72%。亦可将稀释后的酶标抗体，分装成1.0ml每管，置于冷冻干燥机内，进行冷冻干燥。冷冻干燥后，该酶标稀释液可长期保存。实施例2
磷酸盐缓冲液NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H202. 9g ；KH2PO4O. 2g ；调PH 至 7· 4，加 DDW 定容至 1000mL。多羟基类有机化合物蔗糖25. 0g。氨基酸及蛋白质类化合物BSA (牛血清白蛋白) 10. Og ;缬氨酸20. Og。金属离子MgC12ImM ；ZnC12O. ImM ；非离子型表面活性剂Tween X-1000.5ml。防腐剂Procl in-3000.5ml。将标记了碱性磷酸酶的こ肝表面抗体浓溶液，按I : 2000用稀释液稀释，获得酶标试剂，将该试剂分成两份，一份置于37°C恒温箱内进行加速试验，另ー份置于2-8°C冰箱内保存。37°C加速7天后，取出酶标试剂，以2-8°C的酶标试剂作为对照，分别加入包被了こ肝表面抗体的ELISA板孔内，加入こ肝表面抗原，抗原抗体37で反应lh，洗板，最后以PNPP显色，终止反应测吸光度。37°C加速7天后其活性剩余98. 67%。亦可将稀释后的酶标抗体，分装成1.0ml每管，置于冷冻干燥机内，进行冷冻干燥。冷冻干燥后，该酶标稀释液可长期保存。实施例3 磷酸盐缓冲液NaCl8. Og ；KClO. 2g ；Na2HPO4. 12H202. 9g ；KH2PO4O. 2g ；调PH 至 7· 4，加 DDW 容 1000mL。多羟基类有机化合物蔗糖25. 0g。半乳糖20. Og氨基酸及蛋白质类化合物BSA (牛血清白蛋白) 10. Og ;
酪蛋白10. 0g。金属离子MgC 12ImM。非离子型表面活性剂Tween X-1000.5ml。防腐剂Procl in-3000.5ml。将标记了碱性磷酸酶的こ肝核心抗体浓溶液，按I : 12000用稀释液稀释，获得酶标试剂，将该试剂分成两份，一份置于37°C恒温箱内进行加速试验，另ー份置于2-8°C冰箱内保存。37°C加速7天后，取出酶标试剂，以2-8°C的酶标试剂作为对照，分别加入包被了乙肝核心抗原的ELISA板孔内，加入こ肝核心抗体竞争，抗原抗体37°C反应lh，洗板，最后以PNPP显色，终止反应测吸光度。37°C加速7天后其活性剩余99. 16%。亦可将稀释后的酶标抗体，分装成O. 5ml每管，置于冷冻干燥机内，进行冷冻干燥。冷冻干燥后，该酶标稀释液可长期保存。
权利要求
1.一种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于由如下物质组成，磷酸盐缓冲液，多羟基类有机化合物，氨基酸及蛋白质类化合物，金属离子，非离子型表面活性剂，防腐剂。
2.根据权利要求I所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述磷酸盐缓冲液，由如下物质组成 NaCl8. Og ； KCl0. 2g ；Na2HPO4. 12H20 2. 9g ； KH2PO40. 2g ； 调PH至7. 4，加DDff定容至IOOOmL0
3.根据权利要求I所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述多羟基类有机化合物为多糖类化合物或多元醇类化合物。
4.根据权利要求3所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述多糖类化合物为蔗糖、果糖、麦芽糖、葡聚糖、半乳糖、乳糖或海藻糖中的一种或多种混合物。
5.根据权利要求3所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述多元醇类化合物为甘油、甘露醇、肌醇、PEG6000、PEG8000、PEG1000或PEG20000中的一种或多种混合物。
6.根据权利要求I所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述氨基酸及蛋白质类化合物为甘氨酸、缬氨酸、牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶中的一种或多种混合物。
7.根据权利要求I所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述金属离子为镁离子、锌离子、钙离子或铁离子中的一种或多种混合物。
8.根据权利要求I所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述非离子型表面活性剂为吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80、Triton X-20、Triton X-100或Triton X-300中的一种或多种混合物。
9.根据权利要求I所述的标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液，其特征在于所述防腐剂为叠氮钠、Proclin-300或庆大霉素中的一种或多种混合物。
全文摘要
本发明涉及一种医药试剂，具体的说是一种标记了碱性磷酸酶抗原抗体稀释液。其特征在于由如下物质组成，磷酸盐缓冲液，多羟基类有机化合物，氨基酸及蛋白质类化合物，金属离子，非离子型表面活性剂，防腐剂。本发明同现有技术相比，能够稳定标记碱性磷酸酶的抗原抗体的活性，且将稀释液加入碱性磷酸酶标记的抗原抗体通过冷冻干燥法，制备成冻干品，这样能够长期稳定标记了碱性磷酸酶的抗原抗体的活性。
文档编号G01N33/535GK102628863SQ20121011754
公开日2012年8月8日 申请日期2012年4月19日 优先权日2012年4月19日
发明者李子樵, 饶啊文 申请人:上海蓝怡科技有限公司