专利名称：三七总皂苷注射剂的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种三七总皂苷制剂的检测方法，具体涉及三七总皂苷注射剂的质量控制方法。
背景技术：
三七的活性成分中，皂苷是三七主要有效活性成分，也是研究的较为系统的化学物质。现已从三七的不同部位分离得到54种单体皂苷成分，如三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、人参皂苷Rbl、人参皂苷Rd，其次还含有20 (s)-三七皂苷R2、20 (S)-人参皂苷Rg2、20 (S)-人参皂苷Rhl等，这些单体皂苷成分大多数为达玛烷型的20 (s)-原人参二醇型和20-(s)原人参三醇型。三七的地下部分既有20 (S)-原人参二醇型皂苷，也含20 (s)原人参三醇型皂苷。三七总皂苷制剂，如注射用血塞通、注射用血栓通、三七总皂苷注射液等，广泛用于治疗冠心病、心绞痛、心脑血栓，提高机体适应能力等，其主要成分为达玛烷型四环三萜皂苷。近年来，三七总皂苷制剂在医院的应用越来越广泛，占心血管药物的市场份额也连年增长。所以提高产品的质量及安全性，减少不良反应已经成为首要问题，也因此，必须提高药品的质量标准，以保证百姓的用药安全。目前，三七总皂苷制剂的含量测定方法有很多，有光谱法和色谱法，其中HPLC由于对相似结构的化合物分离度高，定量分析精度高，但大多数方法就只能同时检测三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、人参皂苷Rbl、人参皂苷Rd这五种主要皂苷成分，或者是检测其中的一种成分。夏泉等公开了一种HPLC检测三七总皂苷注射液的方法(夏泉等，三七总皂苷注射液HPLC指纹图谱的比较分析，《中成药》，2004年5月第26卷，第5期，345-348)，其色谱分析条件为:ZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱,(Analystical 4.6cm*2.5cm);乙臆-水二兀梯度洗脱，0_6min,乙臆 20%— 30% ;6_14min,乙臆 30%^- 40% ； 14_25min,乙臆 40%— 30% ；
25-30min,乙腈30%- 20% ;流速为1.0ml/min，检测波长为203nm ;进样量为20 μ 1，柱温为 40。。。广州中医药大学的硕士论文，题目为“三七总皂苷HPLC方法研究及其应用”，公开了如下信息:1)色谱柱的选择，分离三七皂苷或人参皂苷的HPLC色谱柱，常见的填充剂有氨基硅烷键合硅胶和十八烷基硅烷键合硅胶，偶见辛烷基键合硅胶，十八烷基硅烷键合硅胶柱由于寿命长、分离效能稳定，因而应用更为广泛，作为注定质量标准的应用，选择十八烷基硅烷键合硅胶柱是更适宜的；2)流动相的选择，分离三七皂苷的RP-HPLC C18流动相条件，优于需要分离的皂苷成分多、极性分布较大，均需要进行梯度洗脱，流动相的种类有机相均采用乙腈，水相有醋酸铵溶液、醋酸铵-氨水溶液，磷酸溶液或水等，参考三七系列注射液现行国家标准及美国草药典西洋参 的梯度条件，在满足分离需要的条件；3)检测方法的选择:三七皂苷的HPLC的常见检测方法为，紫外检测，蒸发光散射检测。其中紫外检测法简便、成熟、稳定，线性范围广，蒸发光散射检测器近年来新兴的通用型质量检测器，灵敏度高、不受溶剂影响，但线性范围窄，一起尚在继续完善之中，测定的重现性尚不能与紫外检测器相比，三七皂苷仅有紫外末端吸收、响应灵敏度不高、需要梯度洗脱而存在基线漂移等情况，因而相当一部分研究选用了蒸发光散射检测，但是，优于三七系列注射剂中的三七皂苷纯度高、浓度高，供试品不仅不需要纯化、浓缩处理，反倒需要进行适当的稀释才能进行测定，而且优于浓度高响应值高，梯度洗脱的基线漂移也不明显，因此，三七系列注射剂的质量标准选用HPLC紫外检测法是简便可行、更适合于作为法定质量标准的。中国医学科学院药用植物研究所的发明名称为“一种含有微量三七总皂苷的样品的检测方法”(申请号:200410004783.7)，采用液相色谱-质谱联测定法测定酸水解三七总皂苷产物，其液相色谱条件为:液相色谱仪=AgilentllOO series,色谱柱:(:18，511111，2.111111^5.0011;流动相:乙腈:甲醇:1-5%的醋酸(磷酸)水溶液(20-40): (35-55): (20-30)，流速为0.2ml/min，进样量为20 yl ;质谱条件:离子源为Turbo 1nspray，喷射电压为4000V，扫描方式为多反应检测(MRM)，正离子检测，用于检测的离子为人参三醇的二级离子m/z477.4 — 423.4。三七总皂苷注射剂中皂苷类成分较多，而且性质大多相似，检测过程中有些成分峰不能分离出来或者分离出来的成分峰分离效果不好，流动相的选择及洗脱程序的设定都直接影响各成分峰的分离程度及峰型，现有的大多数方法只是同时检测三七皂苷R1、人参皂苷Rgl、人参皂苷R e、人参皂苷Rb 1、人参皂苷Rd这五种主要皂苷成分，或者是检测其中的一种成分。为了保证百姓的用药安全，必须提高药品的质量标准，应该对除了上述五种主成分以外的皂苷也进行检测。因而，有必要发明一种三七总皂苷注射剂的质量监控方法，能够一次进样同时测定三七总皂苷注射剂中除三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人参皂苷Re、人参皂苷Rb 1、人参皂苷Rd五种主成分以外其它皂苷的检测方法，来控制产品的质量。

发明内容
本发明的目的是提供一种三七总皂苷注射剂的质量控制方法。本发明提供的一种三七总皂苷注射剂的质量控制方法，该方法包含色谱条件、检测方法，其中色谱条件为:使用高效液相色谱作为检测系统，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为0.005% -0.02%乙酸水与0.005% -0.02%乙酸乙腈、0.005% -0.02%磷酸水与0.005% -0.02%磷酸乙腈，流速为0.95-1.0ml/min ;检测波长为203nm ;柱温为26-280C ;进样量为 20u 10上述方法中:所述梯度洗脱是按照下表进行的:
权利要求
1.一种三七总皂苷注射剂的质量控制方法，该方法包含色谱条件、检测方法，其特征在于，色谱条件为:使用高效液相色谱作为检测系统，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为0.005%-0.02%乙酸水与0.005%-0.02%乙酸乙腈、0.005%-0.02%磷酸水与0.005%-0.02%磷酸乙腈，流速为0.95-1.0ml/min ;检测波长为203nm ;柱温为26-28°C ;进样量为20 μ I。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述梯度洗脱是按照下表进行的:
3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述色谱条件为:使用高效液相色谱作为检测系统，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为203nm，流动相:为0.005%-0.02%乙酸水与0.005%-0.02%乙酸乙腈组合、0.005%-0.02%磷酸水与0.005%-0.02%磷酸乙腈的组合，线性梯度洗脱程序见下表:
4.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述质量控制方法包括以下步骤: I)对照品的制备:分别取20 (S)-三七皂苷R2、20 (S)-人参皂苷Rg2、20 (S)-人参皂苷RhU20 (R)-人参皂苷Rhl、人参皂苷Rb2、人参皂苷F1、七叶胆苷X VI1、人参皂苷F2、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rh4、人参皂苷Rkl、人参皂苷Rg5对照品适量，精密称定，加70%甲醇-水溶液溶解，制成每Iml约含20 (S)-三七皂苷R2、20 (S)-人参皂苷Rg2、20 (S)-人参皂苷Rh 1、20 (R)-人参皂苷Rh 1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Fl、七叶胆苷X VI1、人参皂苷F2、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rh4、人参皂苷Rkl、人参皂苷Rg5对照品分别为0.55mg、0.40mg、0.55mg、.0.090mg、0.25mg、0.070mg、0.40mg、0.10mg、0.20mg、0.75mg、0.035mg、0.15mg 的混合对照品储备液，精密量取混合对照品储备液适量，加浓度为50%甲醇-水的溶液稀释，制成浓度为含对照品储备液25%的溶液，即得对照品溶液； 2)供试品溶液的制备:取相当于三七总皂苷约50mg的三七总皂苷注射剂于5.0ml量瓶中，精密称定或量取，加入50%甲醇-水溶液至近刻度，超声溶解5min，冷却至室温，加50%甲醇-水溶液定容至5.0ml，混匀，即得供试品溶液； 3)使用高效液相色谱作为检测系统，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为203nm，流动相:0.005%-0.02%乙酸水与0.005%-0.02%乙酸乙腈组合或0.005%-0.02%磷酸水与0.005%-0.02%磷酸乙腈的组合，线性梯度洗脱程序见下表:
5.根据权利要求1-4任一项所述的质量控制方法，其特征在于，所述三七总皂苷注射剂为三七总皂苷冻干粉针或三七总皂苷注射液。
6.根据权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于，所述三七总皂苷注射剂为注射用血塞通、注射用血栓通、血塞通注射液或血栓通注射液。
7.根据权利要求1-4任一项所述的质量控制方法，其特征在于，所述流动相为0.005%-0.02% 乙酸水和 0.005%-0.02% 乙酸乙腈。
8.根据权利要求7所述的质量控制方法，其特征在于，所述流动相为0.01%乙酸水和0.01%乙酸乙臆。
9.根据权利要求1-4任一项所述的质量控制方法，其特征在于，所述0.005%-0.02%乙酸水是指每IOOOml水中含有0.05-0.2ml乙酸。
10.根据权利要求1-4任一项所述的质量控制方法，其特征在于，所述步骤2)供试品溶液的制备中，注射液的量取是根据三七总皂苷的含量为基础进行的，如注射液的规格是5ml:50mg，那么量取5ml的注射液即符合“取相当于三七总皂苷约50mg的三七总皂苷注射剂”的标准。
全文摘要
本发明涉及一种三七总皂苷注射剂的质量控制方法，该方法包含色谱条件、检测方法，色谱条件为使用高效液相色谱作为检测系统，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为0.005%-0.02%乙酸水与0.005%-0.02%乙酸乙腈、0.005%-0.02%磷酸水与0.005%-0.02%磷酸乙腈，流速为0.95-1.0ml/min；检测波长为203nm；柱温为26-28℃；进样量为20μl。与现有方法比，本发明提供的质量控制方法设定了一个梯度洗脱条件能同时检测三七总皂苷注射剂中的十二种皂苷成分，且分离效果好，通过此方法的测定能有效的计算出十二种皂苷的含量，节省实验时间及费用。
文档编号G01N30/02GK103235050SQ20131012730
公开日2013年8月7日 申请日期2013年4月12日 优先权日2013年4月12日
发明者方同华 申请人:黑龙江珍宝岛药业股份有限公司