专利名称：检测用酵母试剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种检测红细胞免疫功能实验用的酵母试剂的制备方法。
近代免疫学理论认为，不仅白细胞有免疫功能，红细胞也有重要的免疫功能。目前对红细胞免疫的表现、机理、调节因子、检测方法进行研究，都是采用酵母菌和红细胞进行花环试验来检测红细胞的免疫功能，实验采用的酵母菌的制备目前都为实验室阶段，不仅不能满足大面积推广的需要，同时试验结果也不够稳定，重复可比性差，到目前还没见到有关制备方法的公开报导。
本发明的目的是提供一种供检测红细胞免疫功能试验用的酵母菌试剂的大规模制备方法，同时使用本发明方法制备的酵母菌试剂在试验使用时具有结果稳定、准确率高，可比性强等特点。
本发明的实施手段是从空气、人体分泌物、植物和食品中分离出酵母株，经过优选、培养、收集洗涤，加助剂补体致敏和真空冷冻干燥五个步骤得到酵母菌的冻干致敏、冻干未致敏及悬液试剂。
本发明的优点是制备方法系统完整，便于大规模制备推广，本试剂制备工艺科学合理，所得的酵母菌试剂特异形态少，细胞均一，分散均匀，保存使用期长，可达1～2年，使用时性能稳定，敏感性高，着色及分散度好，试验结果易于观察。
实施例本酵母菌制剂的制备方法共分五个步骤进行。
一、酵母株的优选把从空气、人体分泌物、植物和食品中分离的酵母菌接种于改良(少糖)沙氏培养基上，在28℃培养72小时，改良(少糖)沙氏培养基为1000毫升蒸馏水中加入蛋白胨10克，葡萄糖30克，然后选出菌体较大，形态为圆形或椭圆形，细胞规整、特异形态少的YS酵母株为优选酵母株。
二、酵母株的培养将优选出的YS酵母株接种在改良沙氏培养基中，在28℃培养66小时，以不出现芽胞为限。
三、酵母菌的收集和洗涤将培养好的酵母菌隔水煮沸10分钟，进行灭活，然后离心去掉上清液，将收集到的酵母菌经多次水洗配成1×108/ml，隔水煮沸30分钟，并加入防腐剂NaN3，即为悬液酵母试剂(补体未致敏)。
四、悬液酵母试剂加助剂和进行补体致敏将悬液酵母试剂加入赋形剂和保护剂脱脂牛乳;或将悬液酵母试剂加入等量的1∶10稀释豚鼠血清在37℃维持15分钟，水洗3次，加入赋形剂和保护剂脱脂牛乳。
五、真空冷冻干燥经四制备的补体未致敏或致敏的酵母菌制剂悬浮液进行冷冻干燥和真空封装，其操作条件是在0.03托真空条件下，经-40℃冷冻处理1小时，然后在30℃干燥14小时，使成品水份小于1%，进行真空封装，制成冻干补体未致敏和冻干补体致敏酵母试剂。
权利要求
1.一种供检测用酵母试剂的制备方法，其特征在于它是经过酵母株优选、培养、收集洗涤、加助剂补体致敏和真空冷冻干燥五个步骤进行一、酵母株的优选把从空气、人体分泌物、植物和食品中分离的酵母菌接种于改良沙氏培养基上，在28℃培养72小时，改良沙氏培养基为1000毫升蒸馏水中加入蛋白胨10克、葡萄糖30克，然后选出菌体较大，形态为圆形或椭圆形、细胞规整、特异形态少的Ys酵母株，为优选酵母株，二、酵母株的培养将优选出的Ys酵母株接种在改良沙氏培养基中，在28℃培养66小时，以不出现芽胞为限，三、酵母菌的收集和洗涤将培养好的酵母菌隔水煮沸10分钟，进行灭活，然后离心去掉上清液，将收集到的酵母菌经多次水洗配成1×108/ml，隔水煮沸30分钟，并加入防腐剂NaN3，即为悬液酵母未致敏试剂，四、悬液酵母试剂加助剂和进行补体致敏将悬液酵母试剂加入赋形剂和保护剂；或将悬液酵母试剂加入等量的1∶10稀释豚鼠血清在37℃维持15分钟，水洗3次，加入赋形剂和保护剂。五、真空冷冻干燥经四制备的补体未致敏或致敏的酵母菌制剂悬浮液进行冷冻干燥和真空封装，其操作条件是在0.03托真空条件下，经-40℃冷冻处理1小时，然后在30℃干燥14小时，使成品水份小于1%，进行真空封装，制成冻干补体未致敏和冻干补体致敏酵母试剂。
全文摘要
本发明公开了一种供检测红细胞免疫功能实验用的酵母试剂的制备方法，它是从空气、人体分泌物、植物和食品中分离出酵母株，经过优选、培养、收集洗涤、加助剂补体致敏和真空冷冻干燥五个步骤得到酵母菌的冻干致敏试剂。本试剂制备工艺科学合理，便于大规模推广制备，所得的酵母菌试剂特异形态少，细胞均一，分散均匀，保存使用期长，可达一年左右。使用时性能稳定、敏感性高、着色及分散度好，试验结果易于观察。
文档编号G01N33/53GK1082195SQ9310675
公开日1994年2月16日 申请日期1993年5月31日 优先权日1993年5月31日
发明者刘景田 申请人:刘景田