专利名称：一种热淋清制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明属中药成方制剂领域，具体来说涉及一种热淋清制剂的质量检测方法。
背景技术：
以头花蓼制成的热淋清制剂具有清热解毒，利尿通淋。用于治疗湿热蕴结，小便黄赤、淋漓涩痛之症，尿路感染、肾盂肾炎见上述证侯者，效果明显。然而由于中药成份比较复杂，含有许多未知成份，既能有效控制热淋清制剂的产品质量，且操作方便的检测方法，目前还未见报道。

发明内容
本发明的目的在于提供一种能有效控制热淋清制剂质量，准确度高、技术先进的热淋清制剂的质量检测方法。
本发明的一种热淋清制剂的质量检测方法，取头花蓼3333份，加10倍量水浸泡0.5小时，煎煮1.5小时，滤过，药渣加8倍量水，煎煮1.5小时，滤过，合并两次滤液，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.20(50□)的浸膏，取70％浸膏喷雾干燥，得喷雾粉，备用；剩余浸膏与喷雾粉沸腾制粒，干燥，过筛(20目)，加入羧甲基淀粉钠11.4份和硬脂酸镁1.0份混匀，压成1000片，包薄膜衣，即得，其特征在于包括以下步骤(1)供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣层，精密称定，研细，精密称取0.3g，置于锥形瓶中，精密加入体积比为70∶4∶6的甲醇/硫酸/水的提取-水解溶液20ml，密塞，于80℃水浴回流提取2小时，放冷，用20％NaOH中和至PH4～5，转移至50ml容量瓶中，用70％甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含槲皮素18-22μg的对照品溶液；(3)含量测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中槲皮素含量以控制热淋清制剂质量。
(4)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，体积比为50∶50的甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相，流速1.0ml/min，检测波长360nm，柱温25℃，理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于3000。
本发明的热淋清制剂的质量检测方法，其中(2)对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品10.5mg置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成每1ml含21.0μg的对照品溶液。
本发明的热淋清制剂的质量检测方法，取槲皮素对照品溶液进行UV光谱扫描，在360nm处有最大吸收，故选360nm作为检测波长。
本发明的热淋清制剂可以是常规的各种剂型。
本发明的方法是通过以下试验优选出来的发明人根据“中药新药研究的技术要求”，试验采用了按《中国药典》2000版一部附录重金属、砷盐检查法，对热淋清片十批中试样品分别做了重金属、砷盐检测，结果如下1、重金属均小于百万分之十。
2、砷盐均小于百万分之二。
根据以上的检测结果，说明热淋清片中重金属、砷盐的含量都很低，且都符合规定，因此不列入本发明的质量检测方法。
含量测定为热淋清制剂头花蓼所含有效成分槲皮素的含量测定，参照头花蓼药材中槲皮素的含量测定方法，采用高效液相色谱法测定本品头花蓼中槲皮素的含量。色谱条件如正文所述，槲皮素与其它组份分离度、重现性、精密度、回收率好，故采用高效液相色谱法测定本品中槲皮素的含量。
1、药品与药剂 甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，样品由贵阳新天药业股份有限公司提供，槲皮素对照品由中国生物制品鉴定所提供，批号10081-9905。
2、仪器分析条件仪器为Agilent 1100高效液相色谱仪，VWD检测器，Agilent 1100化学工作站。
3、色谱条件用十八烷基键合硅胶为填充剂，色谱柱Elite Hypersil C18，5μm，4.6×250mm，流动相采用甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)，检测波长360nm，柱温为25℃，流速为1.0ml/min，理论塔板数以槲皮素峰计应不低于3000。
4、检测波长选择取槲皮素对照品溶液进行UV光谱扫描，在360nm处有最大吸收，故选360nm作为检测波长。
5、对照品纯度检查采用高效液相法，以归一化法计算测定对照品的纯度。
槲皮素对照品的进样浓度为0.21mg/ml，进样量为10μl，纯度为100％。
6、供试品溶液制备按正文含量测定方法中所述的样品前处理方法，通过超声提取1小时、2小时、3小时和回流提取1小时、2小时、3小时的比较证明，回流2小时能够能得到满意的实验结果，又可以节省时间，提高效率，具体数据见表一。
表一 样品前处理试验

7、方法学考察7.1线性关系的考察精密称取槲皮素对照品10.5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取20ml至50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成每1ml含42.0μg的对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液2ml、5ml、10ml、15ml、20ml置于20ml量瓶中，加甲醇至刻度。分别吸取上述对照品溶液10μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。以槲皮素进样量(μg)为横坐标，相应的峰面积(A)为纵坐标，计算回归方程为A＝3851.4C-45.446 r＝0.9999具体数据见表二表二 线性关系考察试验

表明槲皮素进样量在0.042～0.42μg范围内线性关系良好。
7.2精密度试验精密称取槲皮素对照品10.5mg置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成每1ml含21.0μg的对照品溶液。取此对照品溶液，重复进样五次，每次10μl，测定槲皮素峰面积，结果RSD为0.9％，表明仪器的精密度良好。见表三。
表三 精密度试验

7.3重现性试验取同批(批号20030201)供试品5份，按正文含量测定方法制备供试品溶液并测定含量，有良好的重现性，结果见表四。
表四 重现性试验

7.4稳定性试验样品稳定性试验取同一份供试品溶液(批号20030201)按正文含量测定方法在不同时间分别测定峰面积，共测定6次。结果RSD为0.6％，表明供试品溶液在24h内稳定，见表五。
表五 样品稳定性试验

对照品稳定性试验取同一份对照品溶液(21.0μg/ml)按正文含量测定方法在不同时间分别测定峰面积，共测定6次。结果RSD为1.4％，表明对照品溶液在24h内稳定，见表六。
表六 对照品稳定性试验

7.5加样回收率试验精密称取已知含量(4.73mg·g-1)的同一供试品(批号20030201)5份，精密加入槲皮素对照溶液(0.042mg·ml-1)5ml，按正文所述方法提取并按色谱条件进行测定，以下式计算回收率，结果见表七，说明本方法有良好的回收率。

表七 回收率实验结果

8、供试品测定按正文含量测定项方法制备供试品和对照品溶液，分别吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以下式计算样品中槲皮素的含量，结果见表八。

As供试品溶液的峰面积；Ar对照品溶液的峰面积；Cs对照品浓度(mg/ml)；Ms供试品取样量(g)； V定容体积(ml)表八 供试品测定结果

根据以上10批样品的含量测定结果，并考虑药材含量的波动，确定本品每片含头花蓼以槲皮素(C15H10O7·2H2O)计，不得少于1.5mg。
具体实施例方式
实施例1(1)供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣层，精密称定，研细，精密称取0.3g，置于锥形瓶中，精密加入体积比为70∶4∶6的甲醇/硫酸/水的提取-水解溶液20ml，密塞，于80℃水浴回流提取2小时，放冷，用20％NaOH中和至PH4～5，转移至50ml容量瓶中，用70％甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品10.5mg置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成每1ml含21.0μg的对照品溶液；(3)含量测定方法
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，体积比为50∶50的甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相，流速1.0ml/min，检测波长360nm，柱温25℃，理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于3000。
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，选360nm作为检测波长，测定对照品溶液及供试品溶液的峰面积，按下式计算

As供试品溶液的峰面积；Ar对照品溶液的峰面积；Cs对照品浓度(mg/ml)；Ms供试品取样量(g)； V定容体积(ml)重复上述步骤一次，计算出槲皮素含量为平均值为1.8mg/片。
实施例2-10质量检测方法同1，结果见下表

权利要求
1.一种热淋清制剂的质量检测方法，取头花蓼3333份，加10倍量水浸泡0.5小时，煎煮1.5小时，滤过，药渣加8倍量水，煎煮1.5小时，滤过，合并两次滤液，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.20、温度为50□的浸膏，取70％浸膏喷雾干燥，得喷雾粉，备用；剩余浸膏与喷雾粉沸腾制粒，干燥，过20目筛，加入羧甲基淀粉钠11.4份和硬脂酸镁1.0份混匀，压成1000片，包薄膜衣，即得，其特征在于包括以下步骤(1)供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣层，精密称定，研细，精密称取0.3g，置于锥形瓶中，精密加入体积比为70∶4∶6的甲醇/硫酸/水的提取-水解溶液20ml，密塞，于80℃水浴回流提取2小时，放冷，用20％NaOH中和至PH4～5，转移至50ml容量瓶中，用70％甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含槲皮素18-22μg的对照品溶液；(3)含量测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中槲皮素含量以控制热淋清制剂质量。(4)色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，体积比为50∶50的甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相，流速1.0ml/min，检测波长360nm，柱温25℃，理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于3000。
2.如权利要求1所述的热淋清制剂的质量检测方法，其中(2)对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品10.5mg置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即制成每1ml含21.0μg的对照品溶液。
3.如权利要求1或2所述的热淋清制剂的质量检测方法，其中每片含头花蓼以槲皮素(C15H10O7·2H2O)计，不得少于1.5mg。
4.如权利要求3所述的热淋清制剂的质量检测方法，其中热淋清制剂是常规的各种剂型。
全文摘要
本发明公开了一种热淋清制剂的质量检测方法，包括下述步骤供试品溶液的制备取本品10片，除去包衣层，精密称定，研细，精密称取0.3g，置于锥形瓶中，精密加入体积比为70∶4∶6的甲醇/硫酸/水的提取－水解溶液20ml，密塞，于80℃水浴回流提取2小时，放冷，用20％NaOH中和至pH4～5，转移至50ml容量瓶中，用70％甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；对照品溶液的制备精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1ml含槲皮素18－22μg的对照品溶液；含量测定方法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中槲皮素含量以控制热淋清制剂质量。本发明的方法准确度高、技术先进、操作快速简便，能使产品质量得到更有效的控制。
文档编号G01N30/06GK1614415SQ20041008138
公开日2005年5月11日 申请日期2004年11月29日 优先权日2004年11月29日
发明者董大伦 申请人:贵阳新天药业股份有限公司