专利名称：一种边分离-边分析鉴别真伪驴皮阿胶的方法
技术领域：
本发明涉及真伪驴皮阿胶的鉴别技术，具体地，本发明涉及一种通过比较阿胶中不同组分性质的方法进行真伪阿胶鉴别的技术。本发明还涉及分离阿胶中不同组分的方法，以及不同胶的组分性质的比较方法。
背景技术：
阿胶为驴皮经去毛后等预处理后再经过煎煮浓缩熬制而成的固体胶。驴皮中含有糖胺聚糖，糖蛋白，网蛋白，角质蛋白、胶原蛋白、脂肪及其它物质，在原料前处理过程中，漂、泡、搓、洗等过程将角质蛋白和脂肪等除去，制胶过程熬制温度、时间、水分等因素作用，使驴皮中的大分子水解，胶原蛋白和其它蛋白，糖胺聚糖和蛋白聚糖水解等后，形成一系列降解产物，成分十分复杂，分子量分布范围很大。
正品阿胶应为驴皮阿胶，而其它动物皮熬制的胶均为伪胶。伪胶功效与阿胶不同，甚至有严重的副作用，不但给市场带来了混乱，而且危害消费者的身心健康。由于其它各种杂皮胶的制备工艺及胶的外观性状与阿胶相似，又因其成分复杂，所以鉴别真伪极其困难。传统的鉴别方法(如查看胶断面色泽，手感，水试，胶悬浮液性状等)多根据胶的理化性质或表观性状进行鉴别而且需要相当的经验，因此准确性差；尤其是在胶的形态和色泽十分相似的情况下更难以根据胶的形态学特征进行真伪区分。虽然也有人利用紫外，红外等方式进行鉴别，但胶溶液含有不同种类物质，这种方式分析的是阿胶中不同物质的混合物，没有针对性，而且准确性也不高，重现性非常低。另外，对于熬胶过程中利用杂皮加入驴皮方式得到混皮胶，这种利用混合物直接光谱扫描鉴别阿胶真伪的方式准确性极差。
本发明的目的在于提供一种新的鉴别方法，这种方法能够快速而准确地鉴别阿胶地真伪，而且鉴别所需样品量少，预处理简单，具有非常高的重复性。本发明涉及的真伪鉴别方法对于所有生物类的中药中的含有蛋白或多糖的中药均适用。

发明内容
本发明的上述目的是通过将胶溶解后得到的溶液进行预处理，以去除人为加入的冰糖等辅料以及胶中的不溶物，将得到的溶液借助各种分离方法(离子交换，凝胶过滤，吸附等层析-色谱方法)得到阿胶中不同种类的组分，同时结合其它分析方法比较各类组分的性质，以边分离边分析的方式来实现的。阿胶溶解后含有不同种类的阴阳离子，这些离子大小及电荷性质不同。利用凝胶过滤层析根据胶溶液中分子的分子量的大小进行分离，利用离子交换层析根据胶溶液中带不同电荷及带相同电荷的离子的电荷多少和强度进行分离，根据胶溶液中糖种类的不同利用糖柱层析进行分离，以及利用胶溶液中不同分子的其它性质进行分离。对于层析分离出的不同种类的组分利用紫外光谱，红外光谱，质谱或其它方式进行分析。将不同分离方式得到的色谱峰的扫描图谱与标准阿胶溶液同一色谱峰的图谱进行比较，或将不同色谱峰的质谱分析结果与标准胶的同一峰的质谱分析结果进行比较。
本发明的具体方法如下一种鉴别真伪驴皮阿胶的方法，其步骤如下1 取一定量的胶加入一定量的蒸馏水，在室温下振荡6～10小时。
2 将1得到的阿胶溶液离心，去除上层白色物质和下层沉淀物，留中间黄色透明溶液。
3 向2得到的透明溶液中加入一定浓度的沉淀剂，振荡数分钟后低温保存2～4小时，离心收集沉淀，洗涤后离心，保留沉淀物。
4 将3得到的沉淀利用缓冲液重新溶解，待进行分离-分析。
5 将4得到的溶液进行色谱分离，采集各峰的紫外或红外扫描图谱。
6 将得到的各色谱峰扫描图谱与真阿胶的各色谱峰的图谱进行比对，根据各个色谱峰的光谱扫描结果与真阿胶的各个色谱峰的光谱扫描结果的比较结果区分待鉴别胶的真伪。
7 对于各个峰的光谱扫描结果完全相同的样品需要将各个峰进行定量计算，以确定是纯驴皮胶还是加入杂皮的混合胶。


图1待鉴别胶的预处理过程示意2真阿胶及一种待测胶的离子交换图谱曲线1真阿胶，曲线2待测胶图3四种胶的图2中第一个峰的紫外扫描图谱T-真阿胶，A待测胶a，B待测胶b，C待测胶c图4真阿胶及一种待测胶的阳离子交换图谱曲线1真阿胶，曲线2待测胶图5四种胶的图4中第一个峰的紫外扫描图谱T-真阿胶，A待测胶I，B待测胶II，C待测胶III以下借助具体实施例说明本发明的方法实施例一 阴离子交换分离—分析区别阿胶的真伪1 待鉴别样品 3种胶2 所需仪器(1)离心机(2)高效液相色谱仪(3)检测器二极管阵列检测器3 样品处理(1)分别取真阿胶和3种待鉴别胶(胶a，胶b，胶c)各2克，分别加入20毫升蒸馏水，利用超声振荡4小时。
(2)将(1)得到的各溶液在10000r/m下离心5分钟，分别取4种胶的中间清液10毫升。
(3)向(2)得到的4种溶液中加入15毫升沉淀剂，静置2小时，在12000r/m下离心10分钟。
(4)收集(3)得到的4种沉淀，加入15毫升0.05mol/ml磷酸缓冲液(pH＝7.0)。振荡，直至沉淀全部溶解。
(5)利用阴离子交换色谱法分析4种样品，色谱柱SynChropak AX300。
(6)比较待测样品与真阿胶的各个色谱峰的紫外扫描图谱。如图2所示，曲线1为真阿胶的色谱图，曲线2为其中一种待测胶的色谱图。图3为4种样品的色谱图中的第一个色谱峰的紫外扫描图谱，因此，待测的三种胶均为假阿胶。
实施例二 阳离子交换分离—分析区别阿胶的真伪1 待鉴别样品 2种胶2 所需仪器(1)离心机(2)高效液相色谱仪(3)检测器二极管阵列检测器3 样品处理(1)分别取真阿胶和3种待鉴别胶(胶I，胶II，胶III)各2克，分别加入20毫升蒸馏水，在室温下利用摇床振荡4小时。
(2)将(1)得到的各溶液在10000r/m下离心5分钟，分别4种胶的中间清液10毫升。
(3)向(2)得到的3种溶液中加入15毫升沉淀剂，静置2小时，在12000r/m下离心10分钟。
(4)收集(3)得到的4种沉淀，加入15毫升0.05mol/ml磷酸缓冲液(pH＝7.0)。振荡，直至沉淀全部溶解。
(5)利用阳离子交换色谱法分析4种样品，色谱柱SynChropak CM300。
(6)比较待测样品与真阿胶的各个色谱峰的紫外扫描图谱。如图5所示，曲线1为真阿胶的色谱图，曲线2为其中一种胶II的色谱图。图6为3种样品的色谱图中的第一个色谱峰的紫外扫描图谱，因此，待测的两种胶中胶I和胶III为假阿胶。胶II与真阿胶的图谱相同，峰1的峰面积相等，且其它峰的紫外图谱与真胶一致，因此，胶II为真阿胶。
权利要求
1.一种边分离边分析鉴别真伪驴皮阿胶的方法，其特征在于，该方法包括(1)取待测样品，用适当的溶液溶解；(2)将(1)得到的溶液经离心后取中间的清液；(3)将(2)得到的清液中加入沉淀剂，离心后收集沉淀物；(4)利用适当的缓冲液将(3)得到的沉淀重新溶解；(5)将(4)得到的溶液进行边分离边分析或直接进行分析。
2.根据权利要求1所述的方法，胶溶液离心后收集的是中间的清液。
3.根据权利要求1的要求，向权利要求2的清液中加入的沉淀剂可以是三氯乙酸，丙酮，甲醇，硫酸铵等。
4.根据权利要求1所述的方法，沉淀重新溶解后，所得溶液的分离方法含离子交换色谱分离和凝胶过滤色谱分离等色谱分离技术和膜过滤(含超滤)等。
5.根据权利要求1所述的方法，权利要求4所说的分离方法的检测方式含光谱扫描和质谱，包括紫外光谱扫描和红外光谱扫描等。
6.根据权利要求1所述的方法，权利要求4分离的不同组分可以定量分析。
全文摘要
本发明涉及一种真伪阿胶的鉴别方法，具体地，该方法将胶溶解后得到的溶液进行预处理，以去除人为加入的辅料以及不溶物，借助各种分离方法得到阿胶中不同种类的组分，同时结合其它分析方法比较各类组分的性质，以边分离边分析的方式得到各组分地分析结果，将该结果与真阿胶的分析结果相比以实现真伪阿胶的鉴别。该方法重复性好，准确性高。
文档编号G01N30/86GK1548954SQ0313083
公开日2004年11月24日 申请日期2003年5月8日 优先权日2003年5月8日
发明者苏志国, 张贵锋 申请人:中国科学院过程工程研究所