专利名称：EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检渗滤法试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物技术领域，尤其是涉及一种EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗体联 检渗滤法试剂盒。
背景技术：
鼻咽癌(NPC)是上皮细胞来源地恶性肿瘤，在世界各地广泛存在。在我国南方，特 别是珠江三角洲及香港地区，是世界上鼻咽癌的高发区。我国约有80%以上的健康成人是 EB病毒携带者。在东南亚和北非也有较高的发病率。早期鼻咽癌放疗后5年生存率可达 80-90% ，而晚期鼻咽癌的生存率仅为20% 。因此加强鼻咽癌的二级预防，即早发现、早诊断 和早治疗是提高鼻咽癌患者存活率的关键。 鼻咽癌的发生与EB病毒(Epstein-Barr， EBV)感染密切相关，通过检测EBV的抗 体早期诊断NPC是提高NPC患者存活率的一个重要手段。 研究表明，鼻咽癌病人在临床症状出现平均前三年时，就可观察到其血清中多种 抗EB病毒抗原抗体的含量显著升高，因而目前临床上筛查鼻咽癌患者最常用的手段即免 疫血清学检测EB病毒感染。其中临床上普遍使用的检测指标有EA-IgG、VCA-IgA等。由于 不同鼻咽癌病人的抗体谱不完全相同，因此多种抗原抗体的联合检测可进一步提高其诊断 性能。有实验表明，多种抗体联检的敏感度和特异性均较抗体单检有所提高，而且可以用于 鼻咽癌高发区健康人群筛查的风险评估。 目前在临床上应用的对血清EB病毒抗体的检测方法常为免疫荧光法和免疫酶标 法。免疫荧光法检测EB抗体虽灵敏度和特异性较好，但是其结果判断带有主观性，不易标 准化。ELISA与荧光法比较更快速方便，且易于标准化，但是耗时较长。 如何高效快速的对多种EB病毒的抗体进行检测，是目前研究的一个热点。胶体金 免疫渗滤法在ELISA基础上应运而生，其原理是以硝酸纤维素膜为载体，此方法检测抗体 简单快速，不需其他仪器设备，几分钟即可用肉眼观察检测结果，目前已在临床检测中取得 了广泛的应用，且在整个免疫学检测范围内也有广泛的应用。采用胶体金免疫渗滤技术联 合检测EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体，在临床上有很高的实用检测意义，但目前尚未有将其 应用于EB病毒抗体联合检测试剂盒。

发明内容本实用新型的目的在于提供一种EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗体联检渗滤法试剂 为实现上述目的，本实用新型可采取下述技术方案 本实用新型所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检渗滤法试剂盒，包括盒体，所 述盒体由卡盖和卡座扣合而成，在所述卡座内的定位槽中固定有硝酸纤维素膜，在其上间 隔设置的位点上点制有EB病毒的EA、 VCA抗原和羊抗鼠IgG抗体，在所述硝酸纤维素膜的 下方垫有吸水滤纸，在与所述位点相对应的卡盖上开设有观察窗口 。[0010] 所述盒体的形状为矩形、三角形或正方形，开设在卡盖上的观察窗口为圆形或正方形。 本实用新型的优点在于利用了胶体金免疫渗滤法的原理，使EB病毒的两种抗原、 抗体在同一渗滤装置(硝酸纤维素膜，即NC膜)上进行反应、洗涤，并通过肉眼观察各斑点 的显色情况，从而对EB病毒的EA-IgG、 VCA-IgA抗体进行快速检测；操作简便、迅速、准确， 可适用于大规模血液检查，更有利于鼻咽癌患者的早期发现和诊断。 本实用新型试剂盒与ELISA试剂盒相比，其优点在于 1、同时检测多种抗体EB病毒两种抗体的联合检测提高了检测的灵敏度和特异 性，对鼻咽癌的诊断有很好的临床意义。 2、反应时间短整个实验可在3-5分钟内完成，适合大规模的快速血检；该试剂盒 检测步骤少，但敏感度却与需1-2小时完成的ELISA相仿； 3、检测过程中不需其他仪器设备，因此检测结果也不受仪器的影响，同时不受反 应环境的影响，加入胶体金标记物即可显色，操作简便；4、所需检测标本量小，需要的血 液量仅30iU，只采集指尖血或耳血即可；而ELISA检测一个指标需100 iil血清，采血量 大。
本实用新型试剂盒与传统胶体金试剂盒相比，其优点在于 1、同时检测EB病毒的两种抗原，灵敏度和特异性均较单检高； 2、外形多变且美观，使用方便，适合家庭自助检测，有利于鼻咽癌病症的早发现和
早诊断。

图1、图2、图3是本实用新型的盒体结构示意图。
具体实施方式
如图1、2、3所示，所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检渗滤法试剂盒，包括盒 体l，所述盒体l由卡盖和卡座扣合而成，在所述卡座内的定位槽中固定有硝酸纤维素膜2， 在其上相距一定距离的位点3上点制有EB病毒的EA、 VCA抗原和羊抗鼠IgG抗体，在所述 硝酸纤维素膜2的下方垫有吸水滤纸，在与所述位点3相对应的卡盖上开设有面积小于定 位槽面积的观察窗口 4，这样可以使硝酸纤维素膜2和滤纸在定位槽中固定稳固；为方便家 庭使用，所述盒体1的形状可以为矩形、三角形、正方形或其他一些几何形状，开设在卡盖 上的观察窗口 4也可以为圆形、梅花形或正方形等其他几何形状。 本发明的试剂盒检测方法如下 1、将试剂盒从冷藏环境中取出，水平放置，室温(18 25°C )平衡30分钟； 2、每个装置上加入待测样本30 iil ; 3、待标本被吸干后加入缓冲液6滴(300ul); 4、加入金标液2滴(100ul); 5、待液体被吸干后加入缓冲液6滴； 6、待膜上液体吸干后5min肉眼观察结果，质控点显示红色斑点，观察相应检测位 置有无红色的斑点，出现红色斑点判为该样本EB病毒抗体在体内呈阳性，无红色斑点即判
4为阴性。
权利要求一种EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检渗滤法试剂盒，包括盒体(1)，其特征在于所述盒体(1)由卡盖和卡座扣合而成，在所述卡座内的定位槽中固定有硝酸纤维素膜(2)，在其上间隔设置的位点(3)上点制有EB病毒的EA、VCA抗原和羊抗鼠IgG抗体，在所述硝酸纤维素膜(2)的下方垫有吸水滤纸，在与所述位点(3)相对应的卡盖上开设有观察窗口(4)。
2. 根据权利要求1所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检渗滤法试剂盒，其特征在 于所述盒体(1)的形状为矩形、三角形或正方形，开设在卡盖上的观察窗口 (4)为圆形或 正方形。
专利摘要本实用新型公开了一种EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗体联检渗滤法试剂盒，包括盒体，所述盒体由卡盖和卡座扣合而成，在所述卡座内的定位槽中固定有硝酸纤维素膜，在其上相距一定距离的位点上点制有EB病毒的EA、VCA抗原和羊抗鼠IgG抗体，在所述硝酸纤维素膜的下方垫有吸水滤纸，在与所述位点相对应的卡盖上开设有观察窗口。本实用新型利用了胶体金免疫渗滤法的原理，使EB病毒的两种抗原、抗体在同一渗滤装置(NC膜)上进行反应，并通过肉眼观察各斑点的显色情况，从而对EB病毒的EA-IgG、VCA-IgA抗体进行快速检测；操作简便、迅速、准确，可适用于大规模血液检查，更有利于鼻咽癌患者的早期发现和诊断。
文档编号G01N33/569GK201497742SQ200920091659
公开日2010年6月2日 申请日期2009年7月17日 优先权日2009年7月17日
发明者付光宇, 刘功成, 吴学炜, 张银, 李奎, 李桂林, 李静辉, 王菁, 苗兰芳, 项立红 申请人:郑州安图绿科生物工程有限公司