专利名称：一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法及测定方法
技术领域：
本发明属于生物絮凝领域，具体涉及ー种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法及測定方法。
背景技术：
絮凝技术是目前国内外一种既经济又简便的高效水处理技木，生物絮凝剂因其具有超强的絮凝能力，而受到广泛的关注，因此是ー种有着良好发展前景的新型絮凝剂。目前国内外的生物絮凝剂主要通过筛选高产絮凝剂菌株获得，我国生物絮凝剂的开发仍处于ー个相对落后的阶段，生物絮凝剂的生产成本较高，针对性不强，环境适应性差，因此筛选高产絮凝剂菌株从而获得生物絮凝剂应用的前景广阔。目前关于絮凝剂产生菌的筛选，主要将分离得到的菌株进行摇瓶发酵，并在利用高岭土悬浮液在三角瓶中筛选菌株。此方法，需要配置大量的絮凝剂发酵培养基和高岭土悬浮液，消耗大量的人力物力。筛选的过程中，通常利用分光光度计逐一检测样品的絮凝效果，耗时长，检测效率低。因此，为了提高凝剂产生菌的筛选效率，必须建立一种絮凝剂产生菌的高效筛选方法。

发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法。本发明提供的筛选方法，其为将10-100 UL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有
0.5-5mL高岭土悬浮液的1-1OmL EP管中，振荡1-lOmin，静置5_20min，取1/2处深度的液层50-200 ii L，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性。絮凝活性计算公
式为:絮凝率=(0D对照一OD样品)/OD对照X 100%。其中，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl2。在本发明ー个实施方案中，利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-1OmL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。其中，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10_30g/L，KH2P04l-3g/L, K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L,酵母膏 0.2-lg/L, (NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4 7H200.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。另ー方面，本发明还提供一种水产用絮凝剂产生菌絮凝率的測定方法，其为将IO-1OOiI L絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-1OmL EP管中，振荡1-lOmin，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200 y L，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性。絮凝活性计算公 式为:絮凝率=(0D对照一OD样品)/OD对照X 100%。其中，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl2。
在本发明ー个实施方案中，利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-1OmL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。其中，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10-30g/L，KH2P04l-3g/L, K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L,酵母膏 0.2-lg/L, (NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4 7H200.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。本发明对现有絮凝剂产生菌的筛选方法或水产用絮凝剂产生菌絮凝率的測定方法进行改进，建立了ー种快速、高效、经济的获得絮凝剂产生菌的方法。该方法的产絮凝剂发酵培养过程和絮凝剂产生菌筛选过程，全部采用1-1OmL EP管代替传统三角瓶，采用96孔板和酶标仪替代传统的分光光度计测定光密度值。本发明方法避免了传统筛选方法效率低，成本大，筛选劳动强度大等缺点，大大提高了絮凝剂产生菌的筛选效率，利用该方法从样品中可以筛选得到高效产絮凝剂的菌株。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例1将50株从污泥中分离到的菌株，分别接种于装有ImL絮凝剂发酵培养基(葡萄糖 20g/L, KH2P042g/L, K2HP045g/L,尿素 0.5g/L，酵母膏 0.5g/L，(NH4)2SO40.2g/L，MgSO4 7H200.2g/L, NaCl0.lg/L, pH7.0-7.4。)的 2mL EP 管中，37 °C，180r/min 进行发酵培养24小吋。用无菌水将培养后的50株菌的OD值调节一致。利用高岭土制成高岭土悬浮液(蒸馏水1し高岭土 4g，CaCl20.2g)，将20 y L发酵液加入装有ImL高岭土悬浮液的2mL EP管中，在200r/min的摇床中震荡2min，静置lOmin，用移液枪吸取1/2处深度的液层100 u L，加入96孔板中，用酶标仪測定550nm的光密度值。同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮 凝活性，絮凝活性以絮凝率表示。絮凝率=(ODw- OD) /OD5tfM X100%。 实验结果如下表:表150株不同来源的菌株絮凝活性
权利要求
1.一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法，其为将10-100 UL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-1OmL EP管中，振荡1-lOmin，静置5_20min，取1/2处深度的液层50-200 u L，加入96孔板中，用酶标仪測定550nm的光密度值。
2.按权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和 0.01-0.05wt% 的 CaCl20
3.按权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，发酵液的培养方法为:利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-1OmL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。
4.按权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖 10-30g/L, KH2P04l-3g/L，K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L，酵母膏 0.2-lg/L，(NH4)2SO40.1-0.5g/L, MgSO4 7H200.1-0.5g/L, NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。
5.一种水产用絮凝剂产生菌絮凝率的測定方法，其为将10-100 u L絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-1OmL EP管中，振荡1-lOmin，静置5_20min，取1/2处深度的液层50-200 u L，加入96孔板中，用酶标仪測定550nm的光密度值。
6.按权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和 0.01-0.05wt% 的 CaCl20
7.按权利要求5所述的測定方法，其特征在于，发酵液的培养方法为:利用装有 0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-1OmL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。
8.按权利要求7所述的測定方法，其特征在于，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖 10-30g/L, KH2P04l-3g/L，K2HP043_7g/L，尿素 0.2-lg/L,酵母膏 0.2-lg/L,(NH4)2SO40.1-0.5g/L, MgSO4 7H200.1-0.5g/L, NaCl0.05-0.2g/L, pH7.0-7.4。
全文摘要
本发明公开了一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。该方法避免了传统筛选方法效率低，筛选劳动强度大等缺点，大大提高了絮凝剂产生菌的筛选效率，利用该方法从样品中筛选得到高效产絮凝剂的菌株。
文档编号G01N21/00GK103088107SQ201310029598
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月25日 优先权日2013年1月25日
发明者陈慧鑫, 吴雅琨, 何增国, 王安如, 付维来, 孙晓雯, 汪攀, 张军 申请人:北京大北农科技集团股份有限公司, 天津昌农科技有限责任公司, 湖南大北农农业科技有限公司