专利名称：一种细胞或细菌的染色、制片方法
技术领域：
本发明涉及医学检验和生物学研究中的一种细胞或细菌的染色、制片方法。
现有技术对细胞或细菌进行涂片染色制片是医学检验和生物学研究的重要环节，目前有三 种方法对细胞或细菌进行涂片、染色、制片一是传统的人工操作涂片、染色、制片；另一种 是利用仪器设备自动涂片，然后再采取传统的人工操作染色、制片；第三种是利用仪器设备 自动制片。第一种方法人工操作涂片、染色、制片，其仪器设备需要少、投资小，但存在以下 缺陷1、涂片厚薄依赖操作人员的工作经验，难以控制。2、在用于细胞学制片时，标本中的 杂质如血液、黏液、细菌、坏死退化细胞等无法除去。3、凭操作人员的经验滴加染色液，随意 性较大，不能定量，染色效果的重复性差。4、染色时间、温度只能粗略估计，不能确保染色效 果。第二种方法利用仪器设备自动涂片，然后再采取传统的人工操作染色制片的工作过程 是利用负压将收集并经过处理后的标本吸入到安装有过滤膜的过滤装置中，标本中的液 体部分通过过滤膜排除掉，有形成份分布于过滤膜上，然后利用设备将过滤膜上的有形成 份，也就是细胞转移到玻片上，这样就完成了自动涂片，之后利用人工操作的方法进行染色 和制片。其缺点是1、只适用于细胞制片，不能用于细菌制片。原因是细菌太小，在通过过 滤膜收集后无法将其转移玻片上；2、在将过滤膜上收集到的细胞转移到玻片上时有一个挤 压的过程，容易造成细胞破裂或变形，影响制片效果；3、凭操作人员的经验滴加染色液，随 意性较大，不能定量，染色效果的重复性差。4、染色时间、温度只能粗略估计，不能确保染 色效果。第三种方法利用仪器设备自动制片。具有细胞学自动涂片、染色功能的仪器设备 目前只有美国能生产，其机型有Auto-Cyte PREP仪器等，其工作原理为将标本进行梯度 分离，离心浓集细胞标本，将标本转移到安装有玻片的特殊装置中，由细胞自然沉降到玻片 上，利用玻片上的黏附涂层将细胞固定，然后自动染色完成制片过程。利用该设备制片效果 良好，但不能自动对标本进行稀释处理等；制片的细胞厚度不能控制；功能少，只能完成巴 氏染色一种染色方法；操作复杂，设备昂贵，一套上述设备国内报价在百万元以上，消耗品 价格贵，使用费用高。

发明内容
本发明的目的是提供一种能利用设备自动完成细胞和细菌涂片、染色、制片的细 胞或细菌的染色、制片方法；另一个目的是使用简单、使用费用低。为实现上述目的，本发明一种细胞或细菌的染色、制片方法，以过滤膜作为标本片 基片进行染色、制片；常压下染色试剂等液体不被容器中设有的过滤膜透过；通过在过滤 膜两边设置的压力差，对细菌或细胞进行截留，而将细胞或细菌以外的液体经过滤膜透过 排除的方式进行染色制片。所述的细胞或细菌的染色、制片方法，以过滤膜作为标本片基片，采用滤过式夹层 杯作为染色、制片器皿；所述的滤过式夹层杯，杯体的周壁封闭，只在上部和底部设有孔，杯体中设有可将杯体内部分为上、下两部分的过滤膜；染色、制片的步骤包括(1)将经过收集及处理后的标本加入滤过式夹层杯中，在过滤膜下部形成负压，将 标本中除细胞或细菌以外的液体部分通过过滤膜排除掉，细胞或细菌这种有形成份分布于 过滤膜上；(2)根据染色程序向滤过式夹层杯中加入所需的染色试剂进行染色；(3)在过滤膜下部形成负压，将标本中染色后的染色试剂通过过滤膜排除掉；(4)根据染色程序，向滤过式夹层杯中加入所需的染色试剂进行染色循环以上操 作，直至所需的染色完毕；干燥后即完成标本片的制片。所述的细胞或细菌的染色、制片方法，所述步骤中的干燥是在过滤膜下部形 成负压，向滤过式夹层杯中吸入空气干燥。所述的细胞或细菌的染色、制片方法，取出标本片，将其置于阅片夹中。由于本发明细胞或细菌的染色、制片方法利用设有过滤膜的滤过式夹层杯作为染 色、制片的器皿，由于过滤膜中的孔是微孔，在没有负压的情况下，液体很难从过滤膜中的 微孔中自然透过，所以在没有负压的情况下，滤过式夹层杯中的液体可以贮存在滤过式夹 层杯中，这样就便于染色试剂对细菌或细胞进行染色；当有负压时，滤过式夹层杯中的液体 可以通过过滤膜中的微孔进入到废液瓶中，有形物如细菌或细胞则不能通过过滤膜而是粘 附在其上。本发明细胞或细菌的染色、制片方法利用过滤膜作为标本片的基片，传统的制 片、阅片的理论和实践都认为，应该用透明的材料如玻片做基片，而现有的大部份过滤膜， 其材料不透明或不完全透明，不符合传统的制片、阅片的理论和实践，但经本发明人多次实 验证明，利用不透明或不完全透明的过滤膜做基片，不影响阅片。由于本发明利用过滤膜做 标本片基片以及利用过滤膜中的微孔在没有压力差的条件下，液体不会自然透过，有压力 差时，液体能透过的特点，省掉了将过滤膜上收集到的细菌或细胞再转移到玻片上的过程， 一是最大限度地保留了被检成份；二是减少了试验步骤，实现了在滤过式夹层杯中完成染 色和制片全过程，使设备更简单，使用费用低且使用简单；三是不仅可以对细胞进行染色制 片，还可以对细菌进行染色制片。综上所述，本发明实现了发明目的。本发明过滤膜选用表面光滑、材质对染色试剂不发生化学反应和物理吸附，这样 制成的标本片不影响阅片。本发明过滤膜的孔径可以根据不同的被检对象选用不同的孔 径，例如，被检对象为细菌，可以选用0. 1微米到0. 9微米孔径的过滤膜。本发明还可以用于精子、花粉等痕迹标本的染色制片以及法医学微量标本形态学 检验等。


下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。附图所示为本滤过式夹层杯主视图剖视示意图。1、排液孔，2、杯底，3、网状托板，4、过滤膜，5、杯盖，6、加液孔。
具体实施例方式如图所示，杯底2和杯盖5组成周壁封闭的杯体，在杯盖5的上端设有加液孔6，4在杯底2的底部设有排液孔1，在杯底2中设有网状托板3，在网状托板3上设有过滤膜4， 过滤膜4将杯体内腔分隔成上、下两部份。使用时，从加液孔6中加入标本，通过排液孔1 抽气，使杯体的下部份内腔中产生负压，标本中的液体通过过滤膜4和排液孔1进入废液瓶 中，而标本中的有形物，如细菌或细胞则粘附在过滤膜的上表面上，这样就完成了对标本的 收集和自动涂片；从加液孔6中加入染色试剂，同时停此通过排液孔1抽气，这时杯体内腔 的上、下两部份之间没有压力差，由于过滤膜中的孔是微孔，染色试剂不会通过过滤膜自然 透过，而是贮存在杯体的上部份内腔中，对杯体中的细菌或细胞进行染色处理，同时可以对 滤过式夹层杯进行加热，以满足细菌或细胞在染色过程中的温度要求，当需要将杯体中的 液体排掉或对过滤膜进行干燥时，又通过排液孔1抽气，使杯体的下部份内腔中产生负压 来完成。下面以结核杆菌痰检抗酸染色试验为例，进一步说明本发明的染色、制片过程。1、标本收集及消化常规收集患者痰标本2_5ml，加入等量标本消化液对标本进 行消化；2、将滤过式夹层杯放入恒温杯架，通过排液孔1抽气，使杯体的下部份内腔中产 生负压，将消化完成的标本4_5ml吸入滤过式夹层杯中，标本中液体部分通过过滤膜4进入 废液瓶，有形成分结核杆菌均勻分布于过滤膜上；3、通过加液孔6向滤过式夹层杯中加入石碳酸复红(试剂1)0. 5-1. 0ml，恒温架在 550C -—60°C范围内保持5分钟；4、通过排液孔1抽气，使杯体的下部份内腔中产生负压，将染色后的石碳酸复红 (试剂1)通过过滤膜4进入废液瓶；5、通过加液孔6向滤过式夹层杯中加入水1ml，通过排液孔1抽气，使杯体的下部 份内腔中产生负压，将清洗后的水通过过滤膜4进入废液瓶；6、通过加液孔6向滤过式夹层杯中加入脱色液(试剂2、并在滤过式夹层杯中保 持5-10秒；7、通过排液孔1抽气，使杯体的下部份内腔中产生负压，将染色后的脱色液(试剂2)通过过滤膜4进入废液瓶；8、通过加液孔6向滤过式夹层杯中加入复染液(试剂幻并在滤过式夹层杯中保 持30秒；9、通过排液孔1抽气，使杯体的下部份内腔中产生负压，将染色后的复染液(试剂3)通过过滤膜4进入废液瓶；10、通过加液孔6向滤过式夹层杯中加入水清洗，同时通过排液孔1抽气，使杯体 的下部份内腔中产生负压，将清洗后的水通过过滤膜4进入废液瓶；11、通过排液孔1连续抽气，使杯体的下部份内腔中产生负压2分钟干燥，制成标 本片。12、打开滤过式夹层杯打开上盖，取出标本片(过滤膜)置于标本片阅片夹。
权利要求
1.一种细胞或细菌的染色、制片方法，以过滤膜作为标本片基片进行染色、制片；常压 下染色试剂等液体不被容器中设有的过滤膜透过；通过在过滤膜两边设置的压力差，对细 胞或细菌进行截留，而将细胞或细菌以外的液体经过滤膜透过排除的方式进行染色制片。
2.根据权利要求1所述的细胞或细菌的染色、制片方法，以过滤膜作为标本片基片，采 用滤过式夹层杯作为染色、制片器皿；所述的滤过式夹层杯，杯体的周壁封闭，只在上部和 底部设有孔，杯体中设有可将杯体内部分为上、下两部分的过滤膜；染色、制片的步骤包括(1)将经过收集及处理后的标本加入滤过式夹层杯中，在过滤膜下部形成负压，将标本 中除细胞或细菌以外的液体部分通过过滤膜排除掉，细胞或细菌这种有形成份分布于过滤 膜上；(2)根据染色程序，向滤过式夹层杯中加入所需的染色试剂进行染色；(3)在过滤膜下部形成负压，将标本中染色后的染色试剂通过过滤膜排除掉；(4)根据染色程序，向滤过式夹层杯中加入所需的染色试剂进行染色并循环以上操作， 直至所需的染色完毕；干燥后即完成标本片的制片；
3.根据权利要求2所述的细胞或细菌的染色、制片方法，所述步骤(4)中的干燥是在过 滤膜下部形成负压，向滤过式夹层杯中吸入空气干燥。
4.根据权利要求2或3所述的细胞或细菌的染色、制片方法，取出标本片，将其置于阅 片夹中。
全文摘要
本发明公开了医学检验和生物学研究中的一种细胞或细菌的染色、制片方法，以过滤膜作为标本片基片进行染色、制片，采用滤过式夹层杯作为染色、制片器皿，所述的滤过式夹层杯，杯体的周壁封闭，只在上部和底部设有孔，杯体中设有可将杯体内部分为上、下两部分的过滤膜，常压下染色试剂等液体不被容器中设有的过滤膜透过，通过在过滤膜两边设置的压力差，对细菌或细胞进行截留，而将细胞或细菌以外的液体经过滤膜透过排除的方式进行染色制片，本发明能利用设备自动完成细胞和细菌涂片、染色、制片且使用简单、使用费用低。
文档编号G01N1/30GK102042924SQ201010529398
公开日2011年5月4日 申请日期2010年10月30日 优先权日2010年10月30日
发明者彭钧 申请人:湖南省天骑医学新技术有限公司