专利名称：一种烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法
技术领域：
本发明属于痕量分析技术领域，具体涉及一种烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法。
背景技术：
苦参碱是由中草药植物苦参的根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取制成的天然植物源农药。苦参碱具有触杀和胃毒作用，害虫一旦触及，即麻痹神经中枢，继而使虫体蛋白质凝固，堵死虫体气孔，使害虫窒息而死。苦参碱作用谱广，对各种作物上的黏虫、菜青虫、蚜虫、红蜘蛛有明显的防治效果。作为优良的植物源杀虫剂，苦参碱在我国农作物害虫防治过程中发挥了重大作用。但随着苦参碱的大量应用，其在环境和农产品上的残留问题也日益受到人们的关注。经对现有技术的文献检索发现，目前关于苦参碱残留量的测定方法，大多只是测定苦参碱药物如湿毒清胶囊、丹黄祛瘀片中苦参碱的含量，基质简单，杂质相对较少。《吉林农业》2010年12期公开了一种苦参碱在甘蓝中的残留分析方法，它是用乙腈提取，经分散SPE填料净化，用液质(LC-MS-MS)检测。检测实践发现，这种残留分析方法虽然操作简单，但存在以下不足:1)仅适应于简单基质，去除烟草中杂质效果较差，并不适应于含大量色素、油脂、杂质的复杂基质；2)对仪器要求较高，检测费用昂贵，难于进行普及应用。《中国药业》2008年14期公开了一种高效液相色谱法同时测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱含量，它是用浓氨、三氯甲烷超声提取，通过中性氧化铝柱，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇各20mL洗脱。色谱柱以氨基键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-无水乙醇-3%磷酸溶液(80: 10: 10)，流速为1.0mL/min，检测波长205nm，柱温30°C。这种方法用来检测烟草中苦参碱残留量存在的缺陷是:净化过程洗脱液用量大，烟叶中许多杂质被洗脱下来，导致净化效果不理想，杂质峰极易干扰检测结果，影响检测结果的准确度。在上述色谱条件下，苦参碱峰形较差，杂质峰较多，目标峰与烟草中杂质峰不能有效分离，无法准确计算色谱法面积。除此之外，采用三氯甲烷作为提取剂和洗脱液，用量大，毒性强，对环境和人体安全存在潜在威胁。目前关于烟草中苦参碱残留的检测方法国内外还未见报道。由于烟草样品本身的复杂性，现有检测药物中苦参碱残留的方法难于满足对烟草中苦参碱残留检测的需要，极易造成结果的偏离，影响最终的检测结果和对苦参碱在烟草上合理使用的评估。

发明内容
本发明的目的在于弥补现有苦参碱检测技术的不足，提供一种快速、准确的检测烟草中苦参碱残留的检测方法。该方法具有简便、准确、迅速、可靠的特点，对控制烟草中苦参碱残留、指导苦参碱在烟草上的安全合理使用具有重要价值。本发明是通过以下技术方案实现的:
一种烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤:(1)标准溶液的配制:称取一定质量苦参碱标准品，用甲醇溶解定容，制成苦参碱标准储备液，将苦参碱标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液；(2)提取:称取烟叶样品置于锥形瓶中，加入烟草样品的3 15倍二氯甲烷，经振荡后过滤，浓缩近干；(3)净化:浓缩瓶中残留物用二氯甲烷溶解，转入二氯甲烷预淋洗的氧化铝固相小柱中，二氯甲烷淋洗，二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，定容；(4)检测:待仪器稳定后，用步骤(I)配制的系列浓度标准工作液进样，保留时间定性，液相色谱检测，在此基础上，对步骤(3)收集的净化样品进行液相色谱检测；(5)标准曲线的建立:以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；(6)结果分析:按以下公式计算试样中苦参碱的含量
权利要求
1.一种烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于包括以下步骤: (1)标准溶液的配制:称取一定质量苦参碱标准品，用甲醇溶解定容，制成苦参碱标准储备液，将苦参碱标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液； (2)提取:称取烟叶样品置于锥形瓶中，加入烟草样品的3 15倍二氯甲烷，经振荡后过滤，浓缩近干； (3)净化:浓缩瓶中残留物用二氯甲烷溶解，转入二氯甲烷预淋洗的氧化铝固相小柱中，二氯甲烷淋洗，二氯甲烷-甲醇混合溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，定容； (4)检测:待仪器稳定后，用步骤(I)配制的系列浓度标准工作液进样，保留时间定性，液相色谱检测，在此基础上，对步骤(3)收集的净化样品进行液相色谱检测； (5)标准曲线的建立:以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线； (6)结果分析:按以下公式计算试样中苦参碱的含量
2.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(I)中的苦参碱标准储备液，是指称取0.0lOO g苦参碱标准品，用甲醇溶解定容至100 mL,制成100 mg/L储备液。
3.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(I)中的系列浓度标准工作液是指0.5、1.0,2.0,5.0、10、0、20.0 mg/L的苦参碱标准曲线工作液。
4.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(2 )中的烟叶样品，是指鲜烟叶、干烟叶中的一种。
5.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(2)中的样品置于锥形瓶，是指Γ20 g样品置于250 mL锥形瓶。
6.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(2)和(3)中的浓缩，是指用旋转蒸发仪将提取样品在40°C 50°C的范围内浓缩近干。
7.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(3)中二氯甲烷-甲醇混合溶液，是指二氯甲烷和甲醇体积比为9:1的混合溶液。
8.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(4)中的液相色谱检测采用高效液相色谱仪-紫外检测器，Waters Alliance2695/2487，色谱柱:Waters Sun Fire，C18 柱，5.0 Mm, 4.6X150 mm ;检测条件:流动相:乙腈/质量浓度0.05%三乙胺水溶液，体积比55:45 ; 流速:0.8 mL/min ； 测定波长:219 nm ； 柱温:30°C ; 进样量:10 μ _
9.根据权利要求1所述烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于:所述步骤(5)中的进 样浓度，是指0.5,1.0,2.0,5.0、10、0、20.0 mg/L。
全文摘要
本发明提供了一种烟草中苦参碱残留量的高效液相色谱检测方法，包括以下步骤(1)标准溶液的配制称取一定质量苦参碱标准品，用甲醇溶解定容，制成苦参碱标准储备液，将苦参碱标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液；(2)提取以二氯甲烷作为提取剂提取烟叶中苦参碱；(3)净化采用氧化铝SPE固相萃取小柱对提取液进行净化；(4)液相色谱检测；(5)建立标准曲线；(6)计算分析苦参碱残留量。本发明的检测方法具有简便、准确、迅速、可靠的特点，对控制烟草中苦参碱残留、指导苦参碱在烟草上的安全合理使用具有重要价值。
文档编号G01N30/88GK103163264SQ201310086150
公开日2013年6月19日 申请日期2013年3月18日 优先权日2013年3月18日
发明者李义强, 王秀国, 王凤龙, 孔凡玉, 孙惠青, 徐金丽, 徐光军, 郑晓 申请人:中国农业科学院烟草研究所