专利名称：液体样品中活菌总数的快速检测方法
技术领域：
食品卫生检验——细菌学方法背景情况介绍菌落总数指每克或每毫升样品中含有的活细菌总数。菌落总数检测是食品、化妆品、药品、环境卫生等各领域样品卫生检验的基本指标之一。该指标指示产品生产过程的一般卫生状况和产品的卫生质量，并可在生产各环节中监测各工序的产品卫生质量的变化情况。
原国家标准规定的检测方法是平板菌落计数法，对不同样品培养1～2天后计数形成的菌落数，即代表样品中的活菌数。该方法得到计数结果至少需要2天时间。要实现样品的快速检测，必须摆脱培养的方法。
本发明采用区分死活细胞的染色方法实现样品中活细菌数的快速检测。
本方法的工作原理不同染料对细胞着色的机理不尽相同，有的染料如美蓝在对生活力不同的细胞染色时，使死亡细胞和生活细胞呈现不同的颜色或不同的着色效果，可用于区分死活细胞。因此可以利用这样的染料进行样品的活菌计数。采用扫描和计算机图象处理技术，分辨样品标本片上的细胞图象进行统计处理，得出计数结果，即可实现样品中活细菌数量的快速检测。本方法适用于含菌量较高的液体样品。如发酵液、污水等。对于含菌量低的样品可以采用过滤、浓缩等方法提高其含菌量，然后计数。
美兰的染色原理是美蓝是一种氧化还原指示剂，氧化态美兰呈蓝色，而还原态美蓝无色。因此当用美蓝对细菌细胞染色时，活的细胞中含有大量还原性辅酶，使美兰呈还原态，细胞无色，而死亡细胞则失去还原力，不能将美蓝还原，细胞呈蓝色。
检测操作步骤1.(样品均质处理)2.样品中添加染色剂→涂片扫描计数→得到N1；3.对样品加热杀菌→再次涂片计数，得到N2；4.样品中的活菌数的计算。
各步骤具体说明1.样品处理样品经均质处理，使成团的细胞分散；适当稀释使样品稀释液中的含菌量处于适当范围，使之便于计数；2.染色向样品稀释液中加入适量染液，混匀后取样涂片，为涂片1；将染色的样品稀释液加热杀菌，取样涂片，为涂片2；3.扫描和计数将涂片1置于显微镜下扫描计数100个视野，求出视野平均数得到N1；再将涂片2置于显微镜下扫描计数100个视野，求出视野平均数得到N2；4.计算N＝N2-N1样品中的含菌量＝N·(标本片面积/视野面积)·稀释倍数/涂片体积
权利要求
1.本发明是对样品中的细胞进行染色，使死亡细胞着色与活细胞着色呈现差别，从而可以区分死活细胞，达到只对活细胞进行计数的目的。
2.在权利要求1中的可用于区分死活细胞的染料如美蓝及荧光染色剂等，凡是对细胞染色后可使同一种生物的活细胞与死亡细胞表现出颜色的差异，这种差异可以在显微镜下直接观察到或通过拍摄照片、扫描等手段获得图象后经电子计算机软件辨认出来。
3.在权利要求1中的样品需要经过处理。这些处理包括样品中的细胞分散处理，背景着色颗粒性杂质的去除，杀菌，涂片、染色等环节。
全文摘要
本发明采用美蓝染色法实现活菌数的快速检测，检测操作步骤样品预处理，添加美蓝染色剂，涂片扫描计数，得到N
文档编号G01N33/02GK1605631SQ20031010012
公开日2005年4月13日 申请日期2003年10月10日 优先权日2003年10月10日
发明者张彩, 计宏伟, 庞广昌, 陈庆森, 胡志和, 阎亚丽 申请人:天津商学院