专利名称：一种治疗痛经的药物组合物及制备方法和检测方法
一种治疗痛经的药物组合物及制备方法和检测方法
技术领域：
本发明为分案申请，原案申请号为200710064062. 9，原案申请日为2007年2月沈日，原案名称为一种治疗痛经的药物组合物及制备方法和质量控制方法。发明领域
本发明涉及一种药物组合物及制备方法和质量控制方法，特别涉及一种治疗痛经 的药物组合物及制备方法和质量控制方法。
背景技术：
痛经是指妇女在经期及其前后，出现小腹或腰部疼痛，甚至痛及腰骶。每随月经 周期而发，严重者可伴恶心呕吐、冷汗淋漓、手足厥冷，甚至昏厥，给工作及生活带来严重影 响。目前临床常将其分为原发性和继发性两种，原发性痛经多指生殖器官无明显病变者，故 又称功能性痛经，多见于青春期少女、未婚及已婚未育者。原因多为精神紧张、感觉过敏；体 质较弱也易产生痛经，提高体质后能缓解症状；由于子宫位置不良、盲目细小造成经血储留 也是痛经的常见原因，此种痛经在正常分娩后疼痛多可缓解或消失。继发性痛经则多因生 殖器官有器质性病变所致，其中子宫内膜异位症最为多见。本病属妇科临床的常见病，据有 关调查表明，痛经的发病率为33. 19%。
目前，目前治疗痛经多采用止痛等西药治疗，长期每月服药，不仅易使机体产生抗 药性及成瘾性，而且还会使肝、肾、胃等器官产生病变，副作用十分明显。发明内容
本发明目的在于提供一种药物组合物；本发明另一目的在于提供一种治疗痛经的 药物组合物；本发明的第三个目的在于提供该药物组合物的制备方法；本发明的第四个目 的在于提供该药物组合物的质量控制方法。
本发明的第四个目的在于提供该药物组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现
本发明药物组合物的原料药组成为丹参600-900重量份、赤芍400-600重量份、 香附(醋制)400-600重量份、玫瑰花400-600重量份、蒲黄200-400重量份、延胡索(醋 制)400-600重量份、五灵脂(制)200-400重量份、桂枝200-400重量份、桃仁200-400重 量份、木香400-800重量份。
本发明药物组合物的原料药组成还可以为丹参600-900重量份、赤芍400-600重 量份、香附(醋制)400-600重量份、玫瑰花400-600重量份、蒲黄200-400重量份、延胡索 (醋制)400-600重量份、五灵脂(制)200-400重量份、桂枝200-400重量份、红花200-400 重量份、乌药400-800重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参601-730重量份、赤芍520-599重 量份、香附(醋制)401-480重量份、玫瑰花520-599重量份、蒲黄201-280重量份、延胡索 (醋制)520-599重量份、五灵脂(制)201-280重量份、桂枝320-399重量份、红花20H80重量份、乌药620-799重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参670重量份、赤芍560重量份、香附 (醋制)440重量份、玫瑰花560重量份、蒲黄240重量份、延胡索(醋制)560重量份、五灵 脂(制)240重量份、桂枝360重量份、红花240重量份、乌药660重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参720重量份、赤芍530重量份、香附 (醋制)470重量份、玫瑰花530重量份、蒲黄270重量份、延胡索(醋制)530重量份、五灵 脂(制)270重量份、桂枝330重量份、红花270重量份、乌药630重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参780-899重量份、赤芍401-480重 量份、香附(醋制)520-599重量份、玫瑰花401-480重量份、蒲黄320-399重量份、延胡索 (醋制)401-480重量份、五灵脂(制)320-399重量份、桂枝201-280重量份、红花320-399 重量份、乌药401-580重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参840重量份、赤芍440重量份、香附 (醋制)560重量份、玫瑰花440重量份、蒲黄360重量份、延胡索(醋制)460重量份、五灵 脂(制)360重量份、桂枝240重量份、红花360重量份、乌药490重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参790重量份、赤芍470重量份、香附 (醋制)530重量份、玫瑰花470重量份、蒲黄330重量份、延胡索(醋制)470重量份、五灵 脂(制)330重量份、桂枝270重量份、红花330重量份、乌药570重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参740-760重量份、赤芍490-510重 量份、香附(醋制)490-510重量份、玫瑰花490-510重量份、蒲黄290-310重量份、延胡索 (醋制)490-510重量份、五灵脂(制)290-310重量份、桂枝290-310重量份、红花290-310 重量份、乌药590-610重量份。
本发明药物组合物的原料药组成优选为丹参750重量份、赤芍500重量份、香附 (醋制)500重量份、玫瑰花500重量份、蒲黄300重量份、延胡索(醋制)500重量份、五灵 脂(制)300重量份、桂枝300重量份、红花300重量份、乌药600重量份。
取上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括 但不限于浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干 粉针剂。
本发明药物组合物制备方法为以上十味，加水煎煮1-3次，每次加4-10倍量水煎 煮1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80-85°C相对密度1. 05-1. 13，加入乙醇使含醇量 为40% -60%，搅勻，静置，取上清液收乙醇，浓缩至80-85°C相对密度1. 15-1. 2的清膏；加 入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的制剂。
本发明药物组合物制备方法优选为以上十味，加水煎煮2次，第一次加8倍量水 煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80-85°C相对密 度1.08-1. 10，加入乙醇使含醇量为50%，搅勻，静置，取上清液收乙醇，浓缩至80-85°C相 对密度1. 16-1. 18的清膏；加入适量蔗糖及糊精，经常规方法，制成临床接受的口服固体制 剂。
本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或 几种
含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；10-20 75-95比例的乙腈一水为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算 应不低于2600 ； 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品Ι-lOmg，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解 并稀释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，即得，每Iml中含芍药苷50ug ；供试品溶液的制备取本发明药物组合物制剂装量差异下颗粒适量，研细，精密 称取约0. 3g，置具塞锥型瓶中，精密加入60 %甲醇25ml，密塞，称定重量，功率250W，频率 40KHZ的超声处理30分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用60 %甲醇补足减失的重量，摇 勻，上清液用0. 45um微孔滤膜滤过，即得；测定方法分别精密吸取对照品液与供试品液各10 μ 1注入液相色谱仪，测定，即 得；相当于生药含量0. 5-1. 5%的本发明药物组合物制剂含赤芍以芍药苷C23H28O11计， 不得少于8. Omg ；鉴别方法Α、取相当于生药含量1-10%。的制剂内容物，加0. 醋酸的60-80%乙 醇溶液20ml，置水浴上加热4-6分钟，滤过，滤液挥散乙醇后，加稀盐酸1ml，搅拌，加水6ml 使溶解，滤过，滤液滴加碘化铋钾试液，即发生红棕色沉淀；B、取相当于生药含量1-10%。的制剂内容物，加水10ml，加0. 5-2. 5倍量的乙醇，搅 拌，静置，滤过，滤液置水浴上加热挥尽乙醇，放冷，滤过，取滤液Iml加草酸试液2 3滴， 产生黄棕色沉淀；C、取相当于生药含量1_10%。的制剂内容物，研细，加水40_60ml溶解，滤过， 滤液用水饱和的乙酸乙酯萃取两次，每次10-20ml，合并萃取液，挥干，残渣加乙酸乙酯 0. 5-1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img 的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品溶液1 μ 1，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以6-10 3-7 0.6-1.0比例的苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为 展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5-1.5 0.5-1.5比例的2%三氯化铁-1%铁氰化钾溶 液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色 斑点；D、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加乙醇10_30ml，回流提取20_40分钟， 放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0. 5-1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取蒲黄对照药 材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品药材溶液 1 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以1-5 1-5 0.5-1.5比例的甲苯-甲酸乙酯-甲 酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，365nm紫外灯下观察；供试 品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； E、取相当于生药含量2 %的制剂内容物，加70-90 %乙醇40_60ml，回流提取20_40 分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加氨试液使成碱性，加乙醚提取二次， 每次20ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙 素对照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供 试品溶液5μ 1、对照品溶液2μ 1，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板 上，以4-8 2-6 0. 1-0.3比例的正己烧一醋酸乙酯一浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾 干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的
F、取相当于生药含量的制剂内容物，加乙醇30_50ml，浸泡0. 5-1. 5小时，时 时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇l_3ml使溶解，置于已处理好的200目，2g，内径10 15mm的氧化铝柱上，以甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供 试品溶液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层 色谱法试验，吸取上述二种溶液各4μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶 G薄层板上，以20-60 3-7 5-15 0. 1-0. 3比例的氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸为展 开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或 几种
含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 15 85比例的乙腈一水为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低 于 2600 ；
对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品5mg，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并 稀释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，即得，每Iml中含芍药苷50ug ；
供试品溶液的制备取本发明药物组合物制剂装量差异下颗粒适量，研细，精密 称取约0. 3g，置具塞锥型瓶中，精密加入60 %甲醇25ml，密塞，称定重量，功率250W，频率 40KHZ的超声处理30分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用60 %甲醇补足减失的重量，摇 勻，上清液用0. 45um微孔滤膜滤过，即得；
测定方法分别精密吸取对照品液与供试品液各10 μ 1注入液相色谱仪，测定，即 得；
相当于生药含量1 %的本发明药物组合物制剂含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少 于 8. Omg ；
鉴别方法Α、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加0. 醋酸的70%乙醇溶液 20ml，置水浴上加热5分钟，滤过，滤液挥散乙醇后，加稀盐酸1ml，搅拌，加水6ml使溶解，滤 过，滤液滴加碘化铋钾试液，即发生红棕色沉淀；
B、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加水10ml，加1. 5倍量的乙醇，搅拌，静 置，滤过，滤液置水浴上加热挥尽乙醇，放冷，滤过，取滤液Iml加草酸试液2 3滴，产生黄 棕色沉淀；
C、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，研细，加水50ml溶解，滤过，滤液用水饱 和的乙酸乙酯萃取两次，每次15ml，合并萃取液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供 试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液； 照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品溶液1 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以8 5 0.8比例的苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 1 比例的2%三氯化铁-1%铁氰化钾溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色斑点；
D、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加乙醇20ml，回流提取30分钟，放冷，滤 过，滤液蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取蒲黄对照药材2g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品药材溶液1 μ 1，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以3 3 1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，365nm紫外灯下观察；供试品色谱中，在与对照品药材色 谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；E、取相当于生药含量2%的制剂内容物，加80%乙醇50ml，回流提取30分钟， 放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加氨试液使成碱性，加乙醚提取二次，每次 20ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对 照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品 溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以 6:4: 0.2比例的正己烧一醋酸乙酯一浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫 外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F、取相当于生药含量的制剂内容物，加乙醇40ml，浸泡1小时，时时振摇，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，置于已处理好的200目，2g，内径10 15mm的氧化 铝柱上，以甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液 ’另 取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸 取上述二种溶液各4μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以 400 5 10 0.2比例的氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点。本发明药物组合物丹参活血化瘀止痛为君药；赤芍清热凉血、散瘀止痛，香附、玫 瑰花、元胡行气散瘀止痛，五灵脂、桃仁活血散瘀止痛，共为臣药；木香辛温散寒，蒲黄、桂枝 温经止血，共为佐药。全方配伍活血化瘀，理气止痛，治疗痛经有着很好的功效，尤其适宜治 疗气滞血瘀所致痛经。本发明药物组合物经实验研究证实有显著的抑制冰醋酸所引起的 扭体反应效果；显著提高PGF2a类似物所至的子宫痉挛性收缩的拮抗和阻断作用；使子宫平 滑肌收缩幅度下降，张力下降，频率降低，其张力可逐渐恢复；对氯前列烯醇及缩宫素所致 子宫平滑肌有明显抑制作用。本发明组合物相比现有制剂痛经宝颗粒具备很好的药效，并且本发明所述的范围 在可以实现本发明药效的同时，经过筛选，意外的发现，在组合物的某些范围内，具备更为 突出的药效。本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后 得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且 方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供 试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控 制，并且用该方法测定的产品相比其他方法测定的产品在药效上表现的更为稳定。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。药物组对正常子宫平滑肌收缩影响的药效学试验药物组I (丹参670g、赤芍560g、香附(醋制)440g、玫瑰花560g、蒲黄240g、延胡 索(醋制)560g、五灵脂(制)240g、桂枝360g、红花240g、乌药660g)药物组II (丹参720g、赤芍530g、香附(醋制)470g、玫瑰花530g、蒲黄270g、延胡索(醋制)530g、五灵脂(制)270g、桂枝330g、红花270g、乌药630g)
药物组III (丹参750g、赤芍500g、香附(醋制)500g、玫瑰花500g、蒲黄300g、延胡 索(醋制)500g、五灵脂(制)300g、桂枝300g、桃仁300g、木香600g)
药物组IV (丹参750g、赤芍500g、香附(醋制)500g、玫瑰花500g、蒲黄300g、延胡 索(醋制)500g、五灵脂(制)300g、桂枝300g、红花300g、乌药600g)，
对照组市售的痛经宝颗粒
选健康未孕雌性大鼠60只，分成6组，实验前0. aiig/100g皮下注射乙烯雌酚，每 天1次，注射3天后，用乙醚吸入麻醉迅速剖取子宫，剪取子宫2cm，将其置于盛有30ml， 洛氏液的小槽内，连于传感器上，水浴保持(36士0. 5) 由通气钩向槽内通入氧气，用 MS-302多媒体化生物信号记录分析系统记录正常收缩曲线，然后加入不同药物组药物，观 察给药前后子宫收缩的频率、幅度和子宫活动力(频率和幅度的乘积，进行对比，结果见表 1
表1各组药物对正常子宫平滑肌收缩的影响( ± SD )
权利要求
1.一种治疗痛经的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为丹参 600-900重量份、赤芍400-600重量份、香附(醋制)400-600重量份、玫瑰花400-600重量 份、蒲黄200-400重量份、延胡索(醋制)400-600重量份、五灵脂(制)200-400重量份、桂 枝200-400重量份、桃仁200-400重量份、木香400-800重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为丹参750重量份、赤芍500重量份、香附(醋制)500重量份、玫瑰花500重量份、蒲黄300重量份、延胡索(醋制)500重量份、五灵脂(制)300重量份、桂枝300重量份、桃仁300 重量份、木香600重量份。
3.如权利要求1所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为以上十味，加 水煎煮1-3次，每次加4-10倍量水煎煮1-3小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80-85°C相 对密度1.05-1. 13，加入乙醇使含醇量为40% -60%，搅勻，静置，取上清液收乙醇，浓缩至 80-85°C相对密度1. 15-1. 2的清膏；加入常规辅料，经常规方法，制成临床接受的制剂。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于该方法为以上十味，加水煎煮2次，第一 次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水煎煮1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至 80-85°C相对密度1.08-1. 10，加入乙醇使含醇量为50%，搅勻，静置，取上清液收乙醇，浓 缩至80-85°C相对密度1. 16-1. 18的清膏；加入适量蔗糖及糊精，经常规方法，制成临床接 受的口服固体制剂。
5.如权利要求1或2所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 10-20 75-95比例的乙腈一水为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算 应不低于2600 ；对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品Ι-lOmg，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀 释至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，即得，每Iml中含芍药苷50ug ；供试品溶液的制备取本发明药物组合物制剂装量差异下颗粒适量，研细，精密称取约 0. 3g，置具塞锥型瓶中，精密加入60%甲醇25ml，密塞，称定重量，功率250W，频率40KHZ的 超声处理30分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用60 %甲醇补足减失的重量，摇勻，上清 液用0. 45um微孔滤膜滤过，即得；测定方法分别精密吸取对照品液与供试品液各10 μ 1注入液相色谱仪，测定，即得；相当于生药含量0. 5-1. 5%的本发明药物组合物制剂含赤芍以芍药苷C23H28O1J+，不得 少于8. Omg ；鉴别方法Α、取相当于生药含量1-10%。的制剂内容物，加0. 醋酸的60-80%乙醇溶 液20ml，置水浴上加热4-6分钟，滤过，滤液挥散乙醇后，加稀盐酸1ml，搅拌，加水6ml使溶 解，滤过，滤液滴加碘化铋钾试液，即发生红棕色沉淀；B、取相当于生药含量1_10%。的制剂内容物，加水10ml，加0.5-2. 5倍量的乙醇，搅拌， 静置，滤过，滤液置水浴上加热挥尽乙醇，放冷，滤过，取滤液Iml加草酸试液2 3滴，产生 黄棕色沉淀；C、取相当于生药含量1_10%。的制剂内容物，研细，加水40-60ml溶解，滤过，滤液用水 饱和的乙酸乙酯萃取两次，每次10-20ml，合并萃取液，挥干，残渣加乙酸乙酯0. 5-1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作为对 照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品溶液1 μ 1，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以6-10 3-7 0.6-1.0比例的苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以0. 5-1. 5 0. 5-1. 5比例的2%三氯化铁_1 %铁氰化钾溶液，热风吹至斑点 清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色斑点；D、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加乙醇10-30ml，回流提取20-40分钟，放冷， 滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0. 5-1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取蒲黄对照药材2g，同 法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品药材溶液1 μ 1，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以1-5 1-5 0.5-1.5比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸溶液 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，365nm紫外灯下观察；供试品色谱 中，在与对照品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；E、取相当于生药含量2%的制剂内容物，加70-90%乙醇40-60ml，回流提取20-40分 钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加氨试液使成碱性，加乙醚提取二次，每 次20ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素 对照品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品 溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以 4-8 2-6 0. 1-0.3比例的正己烧一醋酸乙酯一浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置 365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F、取相当于生药含量1%的制剂内容物，加乙醇30-50ml，浸泡0. 5-1. 5小时，时时振 摇，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇l_3ml使溶解，置于已处理好的200目，2g，内径10 15mm 的氧化铝柱上，以甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶 液；另取芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法 试验，吸取上述二种溶液各4 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层 板上，以20-60 3-7 5-15 0. 1-0. 3比例的氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸为展开齐IJ， 展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中 的一种或几种含量测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；15 85 比例的乙腈一水为流动相；检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于沈00 ；对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品5mg，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释 至刻度，摇勻，用0. 45 μ m微孔滤膜滤过，即得，每Iml中含芍药苷50ug ；供试品溶液的制备取本发明药物组合物制剂装量差异下颗粒适量，研细，精密称取约 0. 3g，置具塞锥型瓶中，精密加入60%甲醇25ml，密塞，称定重量，功率250W，频率40KHZ的 超声处理30分钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用60 %甲醇补足减失的重量，摇勻，上清 液用0. 45um微孔滤膜滤过，即得；测定方法分别精密吸取对照品液与供试品液各10 μ 1注入液相色谱仪，测定，即得；相当于生药含量的本发明药物组合物制剂含赤芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于 8. Omg ；鉴别方法A、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加0. 醋酸的70%乙醇溶液 20ml，置水浴上加热5分钟，滤过，滤液挥散乙醇后，加稀盐酸Iml，搅拌，加水6ml使溶解，滤 过，滤液滴加碘化铋钾试液，即发生红棕色沉淀；B、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加水10ml，加1.5倍量的乙醇，搅拌，静置，滤 过，滤液置水浴上加热挥尽乙醇，放冷，滤过，取滤液Iml加草酸试液2 3滴，产生黄棕色 沉淀；C、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，研细，加水50ml溶解，滤过，滤液用水饱和的 乙酸乙酯萃取两次，每次15ml，合并萃取液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品 溶液；另取原儿茶醛对照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄 层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品溶液1 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 8:5: 0.8比例的苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 1比例 的2%三氯化铁-1%铁氰化钾溶液，热风吹至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的蓝色斑点；D、取相当于生药含量5%。的制剂内容物，加乙醇20ml，回流提取30分钟，放冷，滤过， 滤液蒸干，残渣加乙醇Iml使溶解，作为供试品溶液；另取蒲黄对照药材2g，同法制成对照 药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品药材溶液1 μ 1，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以3 3 1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出，晾 干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，365nm紫外灯下观察；供试品色谱中，在与对照品药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；E、取相当于生药含量2%的制剂内容物，加80%乙醇50ml，回流提取30分钟，放冷， 滤过，滤液蒸干，残渣加水IOml使溶解，加氨试液使成碱性，加乙醚提取二次，每次20ml， 合并乙醚提取液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照 品，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶 液5μ1、对照品溶液2μ1，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以 6:4: 0.2比例的正己烧一醋酸乙酯一浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫 外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；F、取相当于生药含量1%的制剂内容物，加乙醇40ml，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤 液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，置于已处理好的200目，2g，内径10 15mm的氧化铝柱 上，以甲醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取 芍药苷对照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸 取上述二种溶液各4μ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以 40 5 10 0.2比例的氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置 上，显相同颜色的斑点。
7. 一种治疗痛经的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和含量测定所述药物组合物的制备方法为丹参750g赤芍500g 香附(醋制)500g玫瑰花500g蒲黄300g 延胡索(醋制)500g五灵脂(制)300g 桂枝300g 红花300g乌药600g ；以上十味，加水煎煮二次，第一次加8倍量水煎煮2小时，第二次加6倍量水 煎煮1.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.08-1. 10(80-85°C )，加入乙醇使含 醇量为50%，搅勻，静置，取上清液收乙醇，浓缩至相对密度1. 16-1. 18 (80-850C )的清膏， 加入适量蔗糖及糊精，干燥，制粒，制成lOOOg，即得；鉴别(1)取本品5g，加0.醋酸的70%乙醇溶液20ml，置水浴上加热5分钟，滤过，滤液挥 散乙醇后，加稀盐酸1ml，搅拌，加水6ml使溶解，滤过，滤液滴加碘化铋钾试液，即发生红棕 色沉淀。(2)取本品5g，加水IOml，加1.5倍量的乙醇，搅拌，静置，滤过，滤液置水浴上加热挥尽 乙醇，放冷，滤过，取滤液Iml加草酸试液2 3滴，产生黄棕色沉淀。(3)取本品5g，研细，加水50ml溶解，滤过，滤液用水饱和的乙酸乙酯萃取两次，每次 15ml，合并萃取液，挥干，残渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照 品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000 年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品溶液1 μ 1，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸溶液(8 5 0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三 氯化铁-1%铁氰化钾(1 1)溶液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的蓝色斑点。(4)取本品5g，加乙醇20ml，回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇Iml 使溶解，作为供试品溶液。另取蒲黄对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 (中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液2 μ 1、对照品药材溶液1 μ 1，分 别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸溶液(3 3 1)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，紫外灯下观察(365nm)。供试品色谱中，在与对照 品药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(5)取本品20g，加80%乙醇50ml，回流提取30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水 IOml使溶解，加氨试液使成碱性，加乙醚提取二次，每次20ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣 加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每Iml含Img的 溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供 试品溶液5 μ 1、对照品溶液2 μ 1，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板 上，以正己烧一醋酸乙酯一浓氨溶液(6 4 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光 灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(6)取本品10g，加乙醇40ml，浸泡1小时，时时振摇，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml 使溶解，置于已处理好的氧化铝柱O00目，2g，内径10 15mm)上，以甲醇30ml洗脱，收集 洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每 Iml含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B) 试验，吸取上述二种溶液各4 μ 1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层 板上，以氯仿一醋酸乙酯一甲醇一甲酸GO 5 10 0.2)为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版附录VI D)测定色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈一水(15 85)为流动相；检测波长为230nm，理 论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2600。对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品5mg，置IOOml量瓶中，加甲醇溶解并稀释 至刻度，摇勻，用微孔滤膜(0. 45 μ m)滤过，即得(每Iml中含芍药苷50ug)。供试品溶液的制备取本品装量差异下颗粒适量，研细，精密称取约0. 3g，置具塞锥型 瓶中，精密加入60%甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40KHZ)30分 钟，取出，放冷，密塞，再称定重量，用60 %甲醇补足减失的重量，摇勻，上清液用微孔滤膜 (0. 45um)滤过，即得。测定方法分别精密吸取对照品液与供试品液各10 μ 1注入液相色谱仪，测定，即得。 本品每袋含赤芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于8.0mg。
全文摘要
本发明公开了一种治疗痛经的药物组合物及制备方法和检测方法。原料药组成为丹参、赤芍、香附、玫瑰花、蒲黄、延胡索(醋制)、五灵脂、桂枝、桃仁、木香，制备方法为取上述组合物原料药，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床接受的剂型，包括但不限于浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、软胶囊剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。本发明采用高效液相色谱法对芍药苷进行含量测定。本发明药物组合物用于治痛经具备很好的疗效。
文档编号G01N30/90GK102028841SQ20101057683
公开日2011年4月27日 申请日期2007年2月26日 优先权日2007年2月26日
发明者付建家, 付立家 申请人:北京亚东生物制药有限公司