专利名称：应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因点突变测定的制作方法
技术领域：
本发明涉及应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因点突点测定自PCR技术1985年在美国问世以来，迅速广泛的被应用于分子生物学领域，目前此项技术的应用都是建立在(1)直接应用核酸作模板进行PCR扩增；(2)直接裂解微生物(如细菌、病毒、衣原体等)提取核酸进行PCR扩增；(3)将组织剪碎研磨，采用Saiki氏法提取核酸再进行PCR扩增而直接应用胃癌石蜡包埋切片组织不需要人为的提取核酸便可进行PCR扩增。许多癌瘤的发生是由于其原癌基因突变导致原癌基因被激活，产生了由正常细饱转化成恶性细胞的重要条件。取新鲜胃癌组织进行此点突变的测定，已有报导，但对从石蜡包埋切片组织中进行点突变的测定，目前还尚未报道，本发明采用先置石蜡切片组织于沸水中使其DNA直接暴露，然后用PCR-RFLP法对胃癌石蜡切片进行了基因点突变的测定，取得了较好的效果。
本发明目的在于，所述的应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因点突变测定，是由于石蜡包埋的病理组织，能得到长期保存，不需要人为的提取核酸，直接将石蜡切片组织置入沸水中，使其DNA直接暴露，然后用PCR-RFLP法对病理组织进行基因水平上的正常结构或异常结构分析，省去了以往的繁锁程序，取得了一定效果。
本发明所述的应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因点突变的测定，首先进行聚合酶DNA链延伸反应，然后再用RFLP法进行分析测定在进行聚合酶DNA链延伸反应中，先将石蜡切片组织置Eppendorf管内，在管内加入双蒸水、PC1、PC2混合液，再加入液体石蜡，然后置沸水中10-15分钟，取出冷却后加入laq酶，再将Eppendorf管先后置94℃,56℃和72℃水浴1、2、3分钟，重复循环35次，分别取水相于另一Eppendorf管中，用氯仿-异戊醇24∶1抽提后加醋酸钠，再用两倍体积无水乙醇沉淀DNA；采用聚合酶DNA链延伸反应后，用RFLP法进行分析检测，即将扩增后的DNA用双蒸水溶解，加Hpall酶，将Eppendorf管置37℃水浴孵育48小时，对完全酶解的DNA用4％聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离鉴定。
实施例首先将石蜡切片，置Eppendorf管内，在管内加双蒸水79μl、PC2和PC2混合液1μl，再加入液体石蜡38μl，然后置沸水中10-15分钟，取出冷却后加入laq酶2.50，再将Eppendorf管先后置94℃,55℃和72℃水浴1、2、3分钟，重复循环35次，分别取水相于另一Eppendorf管中，用氯仿-异戊醇24∶1抽提后加醋酸钠(0.3mol/l)，两倍体积无水乙醇沉淀DNA。然后用RFLP法进行分析检测，将扩增后的DNA用211μl双蒸水溶解，加Hpal酶200，将Eppendorf管置37℃水浴孵育48小时，对完全酶解的DNA用4％聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离即可。
权利要求
1.一种应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因点突变的测定，其特征在于，首先进行聚合酶DNA链延伸反应，然后再用RFLP法进行分析测定在进行聚合酶DNA链延伸反应中，先将石蜡切片置Eppendorf管内，在管内加入双蒸水，PC1、PC2混合液，再加入液体石蜡，然后置沸水中10-15分钟，取出冷却后加入laq酶，再将Eppendorf管先后置94℃,56℃和72℃水溶1、2、3分钟，重复循环35次，分别取水相于另一Eppendorf管中，用氯仿-异戊醇24∶1抽提后加醋酸钠，再用两倍体积无水乙醇沉淀DNA。
2.根据权利要求所述的应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因突变的测定，其特征在于，采用聚合酶DNA链延伸反应后，用RFLP法进行分析检测，即直接应用病理石蜡切片组织进行PCR扩增，进而进行点突变的检测，省去了人为的提取纯化其核酸。
全文摘要
本发明涉及一种应用胃癌石蜡切片组织进行癌基因突变测定,其首先是聚合酶DNA链延伸反应,即将石蜡切片置Eppendorf管内,加入双蒸水PC
文档编号G01N33/574GK1221881SQ97125649
公开日1999年7月7日 申请日期1997年12月31日 优先权日1997年12月31日
发明者孙文东 申请人:中国科学院新疆化学研究所