专利名称：鉴定响应抗癌疗法的可能性升高的患者的方法
技术领域：
本申请致力于用于鉴定哪些患者会最多地受益于抗癌剂治疗及对患者监测他们对抗癌剂治疗的敏感性和响应性的方法。
背景技术：
癌症是对人类健康的最致命威胁之一。仅在美国，癌症每年影响近130万新患者，而且是位于心血管疾病之后的第二位死因，占4例死亡中的大约I例。实体瘤对大多数那些死亡负有责任。虽然某些癌症的医学治疗中已经取得了重大进步，但是所有癌症的总体5年存活率在最近20年里只改进了约10%。癌症(或称作恶性肿瘤)以不受控制的方式快速生长和转移，使得及时检测和处理极端困难。根据癌症类型，患者通常有数个治疗选项可用，包括化疗、辐射和基于抗体的药物。对于预测不同治疗方案的临床结果有用的诊断方法会大大有利于对这些患者进行临床安排。如此，需要更有效的手段来确定哪些患者会响应哪种治疗、并且将此确定纳入到对患者更有效的抗癌剂疗法治疗方案，无论用作单一药剂或是与其它药剂组合。发明概述本发明提供用于鉴定会响应抗癌剂，例如VEGF-A拮抗剂诸如例如贝伐单抗治疗的患者的方法。本发明的一个实施方案提供鉴定会受益于包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法治疗的患者的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFlltl水平处于或高于参照水平(例如与参照样品相比)指示该患者会受益于该抗癌疗法的治疗。在一些实施方案中，所述癌症选自下组:结肠直肠癌，成胶质细胞瘤，肾癌，卵巢癌，乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)，胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，胃癌和肺癌。在一些实施方案中，所述自患者获得的样品是选自下组的成员:全血，血浆，血清，及其组合。在一些实施方案中，所述VEGFlltl水平是蛋白质水平。在一些实施方案中，所述VEGFlltl蛋白质水平是通过测量VEGFlltl血浆蛋白质水平而测定的。在一些实施方案中，血浆VEGFlltl水平处于或高于参照水平指示该患者会受益于该抗癌疗法，更有可能响应该抗癌疗法，或具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。在一些实施方案中，该方法进一步包括对所述患者施用有效量的包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第二抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第三抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，所述VEGF-A拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)且所述第二抗癌疗法是多西他赛(docetaxel)。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，所述第二抗癌疗法是吉西他滨(gemcitabine),且所述第三抗癌疗法是厄洛替尼(erlotinib)。在一些实施方案中，所述癌症是胃癌，所述第二抗癌疗法是卡培他滨(capecitabine),且所述第二抗癌疗法是顺钼(cisplatin)。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第二抗癌疗法是顺钼。本发明的又一个实施方案提供预测患有癌症的患者对包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法治疗的响应性的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFlltl水平处于或高于参照水平(例如与参照样品相比)指示该患者更有可能响应该抗癌疗法的治疗。在一些实施方案中，所述癌症选自下组:结肠直肠癌，成胶质细胞瘤，肾癌，卵巢癌，乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)，胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，胃癌，和肺癌。在一些实施方案中，所述自患者获得的样品是选自下组的成员:全血，血浆，血清，及其组合。在一些实施方案中，所述VEGFlltl蛋白质水平是通过测量VEGFlltl血浆蛋白质水平而测定的。在一些实施方案中，血浆VEGF110水平处于或高于参照水平指示该患者会受益于该抗癌疗法，更有可能响应该抗癌疗法，或具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。在一些实施方案中，该方法进一步包括对所述患者施用有效量的包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第二抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生齐IJ，及其组合。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第三抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，所述VEGF-A拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)且所述第二抗癌疗法是多西他赛。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第三抗癌疗法是厄洛替尼。在一些实施方案中，所述癌症是胃癌，所述第二抗癌疗法是卡培他滨，且所述第二抗癌疗法是顺钼。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第二抗癌疗法是顺钼。本发明的还有另一个实施方案提供用于确定有癌症的患者会展现出受益于包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的可能性的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFlltl水平处于或高于参照水平(例如与参照样品相比)指示该患者具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。在一些实施方案中，所述癌症选自下组:结肠直肠癌，成胶质细胞瘤，肾癌，卵巢癌，乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)，胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，胃癌，和肺癌。在一些实施方案中，所述自患者获得的样品是选自下组的成员:全血，血浆，血清，及其组合。在一些实施方案中，所述VEGFlltl蛋白质水平是通过测量VEGFlltl血浆蛋白质水平而测定的。在一些实施方案中，血浆VEGFlltl水平处于或高于参照水平指示该患者会受益于该抗癌疗法，更有可能响应该抗癌疗法，或具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。在一些实施方案中，该方法进一步包括对所述患者施用有效量的包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第二抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第三抗癌疗法:细胞毒剂，化疗齐IJ，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，所述VEGF-A拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)且所述第二抗癌疗法是多西他赛。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第三抗癌疗法是厄洛替尼。在一些实施方案中，所述癌症是胃癌，所述第二抗癌疗法是卡培他滨，且所述第二抗癌疗法是顺钼。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第三抗癌疗法是顺钼。本发明的甚至另一个实施方案提供用于优化包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗功效的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFlltl水平处于或高于参照水平(例如与参照样品相比)指示该患者具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。在一些实施方案中，所述癌症选自下组:结肠直肠癌，成胶质细胞瘤，肾癌，卵巢癌，乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)，胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，胃癌，和肺癌。在一些实施方案中，所述自患者获得的样品是选自下组的成员:全血，血浆，血清，及其组合。在一些实施方案中，所述VEGFlltl蛋白质水平是通过测量VEGFlltl血浆蛋白质水平而测定的。在一些实施方案中，血浆VEGFlltl水平处于或高于参照水平指示该患者会受益于该抗癌疗法，更有可能响应该抗癌疗法，或具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。在一些实施方案中，该方法进一步包括对所述患者施用有效量的包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第二抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第三抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，所述VEGF-A拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)且所述第二抗癌疗法是多西他赛。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第二抗癌疗法是厄洛替尼。在一些实施方案中，所述癌症是胃癌，所述第二抗癌疗法是卡培他滨，且所述第三抗癌疗法是顺钼。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第二抗癌疗法是顺钼。本发明的又一个实施方案提供用于治疗患者中的癌症的方法，该方法包括:确定自患者获得的样品具有处于或高于VEGFlltl参照水平的水平(例如与参照样品相比)，并对所述患者施用有效量的包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法，由此所述癌症得到治疗。在一些实施方案中，所述癌症选自下组:结肠直肠癌，成胶质细胞瘤，肾癌，卵巢癌，乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)，胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，胃癌，和肺癌。在一些实施方案中，所述自患者获得的样品是选自下组的成员:全血，血浆，血清，及其组合。在一些实施方案中，所述VEGFlltl蛋白质水平是通过测量VEGFlltl血浆蛋白质水平而测定的。在一些实施方案中，血浆VEGFlltl水平处于或高于参照水平指示该患者会受益于该抗癌疗法，更有可能响应该抗癌疗法，或具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第二抗癌疗法:细胞毒剂，化疗齐IJ，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的选自下组的第三抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。在一些实施方案中，所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。在一些实施方案中，所述第二抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。在一些实施方案中，所述VEGF-A拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述抗体是贝伐单抗。在一些实施方案中，所述癌症是乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)且所述第二抗癌疗法是多西他赛。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第三抗癌疗法是厄洛替尼。在一些实施方案中，所述癌症是胃癌，所述第二抗癌疗法是卡培他滨，且所述第二抗癌疗法是顺钼。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌，所述第二抗癌疗法是吉西他滨，且所述第二抗癌疗法是顺钼。本发明的另一个实施方案提供用于确定患者是否会受益于包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法治疗的试剂盒，该试剂盒包含用于测定至少一种生物标志物水平的化合物套组来预测患者对包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法治疗的响应性，其中VEGFlltl水平处于或高于参照水平(例如参照样品中的VEGFlltl水平)指示该患者会受益于包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗。在一些实施方案中，所述化合物是蛋白质。在一些实施方案中，所述蛋白质是抗体。本发明的又一个实施方案提供用于检测VEGFlltl的水平的化合物套组，该套组包含至少一种能够特异性结合VEGFlltl的化合物。优选地，所述化合物套组用于预测患者对包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗的响应性。在一些实施方案中，所述化合物是蛋白质。在一些实施方案中，所述蛋白质是抗体。
通过下面的详述来进一步描述这些和其它实施方案。
附图简述

图1:在正在为局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗(低或高剂量)加多西他赛疗法较之安慰剂加多西他赛疗法，总体生物标志物群的无进展存活的Kaplan Meier曲线。短虚线代表安慰剂加多西他赛。实线代表低剂量贝伐单抗(每3周7.5mg/kg)加多西他赛。长虚线代表高剂量贝伐单抗(每3周15mg/kg)加多西他赛。图2:正在为局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗(低剂量)加多西他赛疗法较之安慰剂加多西他赛疗法，生物标志物在后续抗瘤疗法开始之前无进展存活的危害比Forest图(安慰剂和低剂量贝伐单抗)，一项两分分析。图3:正在为局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗(高剂量)加多西他赛疗法较之安慰剂加多西他赛疗法，生物标志物在后续抗瘤疗法开始之前无进展存活的危害比Forest图(安慰剂和高剂量贝伐单抗)，一项两分分析。图4:正在为局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗(低或高剂量)加多西他赛疗法较之安慰剂加多西他赛疗法，低VEGFA表达水平(<125pg/ml)(图4A)和高VEGFA表达水平(彡125pg/ml)(图4B)在后续抗瘤疗法开始之前无进展存活的Kaplan Meier曲线。短虚线代表安慰剂加多西他赛。实线代表低剂量贝伐单抗(7.5mg/kg每3周)加多西他赛。长虚线代表高剂量贝伐单抗(15mg/kg每3周)加多西他赛。图5:正在为局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗(低或高剂量)加多西他赛疗法较之安慰剂加多西他赛疗法，低VEGFR2表达水平(〈llng/ml)(图5A)和高VEGFR2表达水平(彡llng/ml)(图5B)在后续抗瘤疗法开始之前无进展存活的Kaplan Meier曲线。短虚线代表安慰剂加多西他赛。实线代表低剂量贝伐单抗(7.5mg/kg每3周)加多西他赛。长虚线代表高剂量贝伐单抗(15mg/kg每3周)加多西他赛。图6:正在为局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗(低或高剂量)加多西他赛疗法较之安慰剂加多西他赛疗法，VEGFA和VEGFR2的低组合表达水平(公式1〈-0.132)和高组合表达水平(公式I > -0.132)在后续抗瘤疗法开始之前无进展存活的Kaplan Meier曲线。实线代表安慰剂加多西他赛。长虚线代表低剂量贝伐单抗(7.5mg/kg每3周)加多西他赛。短虚线代表高剂量贝伐单抗(15mg/kg每3周)加多西他赛。图7:正在为局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗(低或高剂量)加多西他赛疗法较之安慰剂加多西他赛疗法，VEGFA和PLGF的低组合表达水平(公式2〈-0.006)和高组合表达水平(公式2 ^ -0.006)在后续抗瘤疗法开始之前无进展存活的Kaplan Meier曲线。实线代表安慰剂加多西他赛。长虚线代表低剂量贝伐单抗(7.5mg/kg每3周)加多西他赛。短虚线代表高剂量贝伐单抗(15mg/kg每3周)加多西他赛。图8:SEQ ID NO:1, VEGFA的示例性氨基酸序列。图9:SEQ ID NO:2，VEGFR2的示例性氨基酸序列。
图10:SEQ ID NO:3，PLGF的示例性氨基酸序列。图11:提高VEGFm、VEGF121, VEGF165和VEGF189浓度的测量，如在MPACT芯片上测量的。图12:提高VEGF11Q、VEGF121和VEGF165浓度的测量，如在自动化WeesysX分析仪上使用Elecsys 测定法测量的。图13:正在为不能手术的局部晚期/转移性胃/胃-食道腺癌接受治疗的患者中，对贝伐单抗加卡培他滨/顺钼疗法较之对照安慰剂加卡培他滨/顺钼疗法，标志物VEGFA高(>lllpg/ml)和低(彡lllpg/ml)表达水平的总体存活(图13A)无进展存活(图13B)的Kaplan Meier 曲线。图14:正在为不能手术的局部晚期/转移性胃/胃-食道腺癌接受治疗的来自亚太地区的患者中，对贝伐单抗加卡培他滨/顺钼疗法较之对照安慰剂加卡培他滨/顺钼疗法，标志物PVEGFA高(>lllpg/ml)和低(< lllpg/ml)表达水平与总体存活(图14A)和无进展存活(图14B)方面治疗效果的关联的Kaplan Meier曲线。图15:正在为不能手术的局部晚期/转移性胃/胃-食道腺癌接受治疗的来自非亚太地区的患者中，对贝伐单抗加卡培他滨/顺钼疗法较之对照安慰剂加卡培他滨/顺钼疗法，标志物VEGFA高(>lllpg/ml)和低(彡lllpg/ml)表达水平与总体存活(图15A)无进展存活(图15B)方面治疗效果的关联的Kaplan Meier曲线。图16:正在为转移性胰腺癌接受治疗的患者中，贝伐单抗加吉西他滨-厄洛替尼疗法较之对照安慰剂加吉西他滨-厄洛替尼疗法的总体存活(图16A)无进展存活(图16B)的Kaplan Meier曲线。在图中，实线代表贝伐单抗/吉西他滨-厄洛替尼治疗，而虚线代表安慰剂/吉西他滨-厄洛替尼治疗。图17:对正在为转移性胰腺癌接受治疗的患者，关于贝伐单抗加吉西他滨-厄洛替尼疗法对对照安慰剂加吉西他滨-厄洛替尼疗法，对于标志物VEGFA高表达水平(≥152.9pg/ml)和低表达水平(〈152.9pg/ml)，标志物VEGFA (图17A)与总体存活方面治疗效果的关联及标志物VEGFA(图17B)与无进展存活方面治疗效果的关联的Kaplan Meier曲线。在图中，实线代表贝伐单抗/吉西他滨-厄洛替尼治疗，而虚线代表安慰剂/吉西他滨-厄洛替尼治疗。图18:对正在为转移性胰腺癌接受治疗的患者，关于贝伐单抗加吉西他滨-厄洛替尼疗法对对照安慰剂加吉西他滨-厄洛替尼疗法，标志物VEGFA和VEGFR2的组合表达水平高(公式1≥-0.1)和低(公式1〈-0.I)表达水平(图18A)及VEGFA和PLGF的组合表达水平高(公式2 ≥ -0.042)和低(公式2〈-0.042)表达水平(图18B)与总体存活方面治疗效果的关联的Kaplan Meier曲线。在图中，实线代表贝伐单抗/吉西他滨-厄洛替尼治疗，而虚线代表安慰剂/吉西他滨-厄洛替尼治疗。图19:对正在为转移性胰腺癌接受治疗的患者，关于贝伐单抗加吉西他滨-厄洛替尼疗法对对照安慰剂加吉西他滨-厄洛替尼疗法，标志物VEGFA和VEGFR2的组合表达水平高(公式1≥-0.1)和低(公式1〈-0.1)表达水平(图19A)及VEGFA和PLGF的组合表达水平高(公式2 ^ -0.042)和低(公式2〈-0.042)表达水平(图19B)与无进展存活方面治疗效果的关联的Kaplan Meier曲线。在图中，实线代表贝伐单抗/吉西他滨-厄洛替尼治疗，而虚线代表安慰剂/吉西他滨-厄洛替尼治疗。
图20:对正在为转移性胰腺癌接受治疗的患者，关于贝伐单抗加吉西他滨-厄洛替尼疗法对对照安慰剂加吉西他滨-厄洛替尼疗法，标志物VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平高(公式3 3 0.837)和低(公式3〈0.837)表达水平与总体存活(图20A)方面治疗效果的关联及标志物VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平高(公式3彡0.837)和低(公式3〈0.837)表达水平与无进展存活(图20B)方面治疗效果的关联的Kaplan Meier曲线。在图中，实线代表贝伐单抗/吉西他滨-厄洛替尼治疗，而虚线代表安慰剂/吉西他滨-厄洛替尼治疗。图21:来自相同患者的EDTA和柠檬酸盐样品、用MPACT测定法测量两次的数据。EDTA血浆的VEGFA浓度比柠檬酸盐要高约40%，其中EDTA-柠檬酸盐方法比较的Spearman相关性为约0.8。发明详述1.导言本发明提供用 于鉴定响应包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法的可能性升高或经历转移的可能性升高的患者的方法。I1.定义在某些实施方案中，术语“升高”或“高于”指高于参照水平的水平或通过本文所述方法检测的、VEGFlltl水平与来自参照样品的VEGFlltl水平相比5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、100%或更大的总体升高。在某些实施方案中，术语“升高”指VEGFlltl水平的升高，其中所述“升高”是与例如自参照样品预先测定的VEGFlltl水平相比高至少约 1.5,1.75、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、75、80、90、或 100倍。在一个优选的实施方案中，术语“升高的水平”指处于或高于参照水平的值。在某些实施方案中，术语“降低”或“低于”在本文中指低于参照水平的水平或通过本文所述方法检测的、VEGFlltl水平与来自参照样品的VEGFlltl水平相比5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或更大的总体降低。在某些实施方案中，术语“降低”指通过本文所述方法检测的、VEGFlltl水平的降低，其中降低的水平是来自参照样品的 VEGFlltl 水平的至多约 0.9,0.8,0.7,0.6,0.5,0.4,0.3,0.2,0.1,0.05、或0.01倍或更低。在某些实施方案中，术语“处于参照水平”指与参照样品中通过本文所述方法检测的VEGFlltl水平相同的水平。在某些实施方案中，术语“参照水平”在本文中指预定值。如技术人员会领会的，参照水平预定和设置为在例如特异性和/或灵敏度方面达到要求。这些要求可以变化，例如在不同管理机构之间。它可以是例如测定法灵敏度或特异性分别要设置成某些限制，例如80%、90%或95%。这些要求也可以在阳性或阴性预测值方面限定。无论如何，基于本发明中给出的教导，总是会有可能到达达到那些要求的参照水平。在一个实施方案中，参照水平是在健康个体中确定的。在一个实施方案中，参照水平是在患者所属疾病实体中预定的。在某些实施方案中，参照值可以例如设置为自调查的疾病实体中的值的总体分布的25%和75%之间的任何百分位。在其它实施方案中，参照水平可以例如设置为自调查的疾病实体中的值的总体分布确定的中值、三分位或四分位。在一个实施方案中，参照水平设置为自调查的疾病实体中的值的总体分布确定的中值。
在本发明的语境中，“VEGF”、“VEGFA”、或“VEGF-A”指血管内皮生长因子蛋白A，以 SEQ ID NO:1 例示，在图 8 中显示(Swiss Prot 登录号 P15692，Gene ID (NCBI):7422)。术语“VEGFA”涵盖具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的蛋白质及其同源物和同等型。术语“VEGF-A”还涵盖VEGF-A的已知的同等型，例如剪接同等型，例如VEGF121、VEGF145, VEGF165,VEGF189和VEGF2tl6，及其天然发生等位和加工形式，包括纤溶酶切割VEGF165生成的110个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如记载于Ferrara, Mol.Biol.Cel 121:687 (2010) ; Leunget al.，Science246:1306 (1989);及 Houck et al.，Mol.Endocrin.5:1806 (1991)。在本发明的语境中，术语“VEGF-A”还涵盖其变体和/或同源物，以及VEGF-A的片段，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到一种或多种VEGF-A特异性抗体识别,诸如抗体克隆3C5和26503 (它们分别可得自Bender Relia Tech和R&D Systems)和A4.6.1 (如记载于 Kim et al., Growth Factors7 (I): 53-64 (1992))。在本发明的语境中，VEGF、VEGFA、或VEGF-A的术语“同等型”(isoform)指剪接同等型和通过酶促切割(例如纤溶酶)生成的形式二者。在本发明的语境中，“VEGFR2”指血管内皮生长因子受体2，以SEQ ID NO:2例示，在图 9 中显示(Swiss Prot 登录号 P35968，Gene ID (NCBI):3791)。术语“VEGFR2”涵盖具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的蛋白质及其同源物和同等型。在本发明的语境中，术语“VEGFR2”还涵盖与氨基酸序列SEQ ID NO:2，或与其变体和/或同源物的氨基酸序列，以及该序列的片段具有至少85%、至少90%或至少95%同源性的蛋白质，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到一种或多种VEGFR2特异性抗体识别，诸如抗体克隆89115 和 89109，它们可得自 R&D Systems。在本发明的语境中，“PLGF”指胎盘生长因子，以SEQ ID NO:3例示，在图10中显示(Swiss Prot登录号P49763，Gene ID (NCBI):5228)。术语“PLGF”涵盖具有氨基酸序列SEQ ID NO:3的蛋白质及其同源物和同等型。在本发明的语境中，术语“PLGF”还涵盖与氨基酸序列SEQ ID NO:3，或与其变体和/或同源物的氨基酸序列，以及该序列的片段具有至少85%、至少90%或至少95%同源性的蛋白质，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到一种或多种PLGF特异性抗体识别，诸如抗体克隆2D6D5和6A11D2，它们可得自 Roche Diagnostics GmbH。术语“VEGF”还指来自非人物种诸如小鼠、大鼠或灵长类动物的VEGF。有时，来自特定物种的VEGF表示如下，hVEGF表示人VEGF，mVEGF表示小鼠VEGF，等等。术语“VEGF”还用于指包含165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子的氨基酸8至109或I至109的截短形式多肽。本申请中可能通过例如“VEGF(8-109) ”、“VEGF(1-109) ”或“VEGF165”来鉴别任何此类形式VEGF的提及。截短的”天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示编号。例如，截短的天然VEGF中的第17位氨基酸(甲硫氨酸)也是天然VEGF中的第17位(甲硫氨酸)。截短的天然VEGF具有与天然VEGF相当的对KDR和Flt-1受体的结合亲和力。依照一个优选的实施方案，VEGF是人VEGF。“ VEGF生物学活性”包括对任何VEGF受体的结合或任何VEGF信号传导活性，调节诸如对正常的和异常的血管发生(angiogenesis)和脉管发生(vasculogenesis)(Ferrara and Davis-Smyth(1997)Endocrine Rev.18:4-25;Ferrara(1999)J.Mol.Med.77:527-543);促进胚胎脉管发生和血管发生(Carmeliet et al.(1996)Nature380:435-439;Ferrara et al.(1996)Nature380:439-442);及调控雌性生殖道中的和为了骨生长和软骨形成的周期性血管增殖(Ferrara et al.(1998)NatureMed.4:336-340; Gerber et al.(1999) Nature Med.5:623-628)。在作为血管发生和脉管发生中的血管发生因子之外，VEGF，作为多效生长因子，在生理过程诸如内皮细胞存活、血管通透性和血管舒张、单核细胞趋化性和钙内流中展现出多种生物学效应(Ferrara and Davis-Smyth(1997), supra,及 Cebe-Suarez et al., Cell.Mol.LifeSc1.63:601-615(2006)) o此外，最近的研究报道了 VEGF对少数非内皮细胞类型诸如视网膜色素上皮细胞、胰导管细胞、和许旺(Schwann)细胞的促有丝分裂效应(Guerrinet al.(1995)J.Cell Physiol.164:385-394;Oberg-Welsh et al.(1997)Mol.Cel1.Endocrinol.126:125-132;Sondell et al.(1999)J.Neurosc1.19:5731-5740)。“VEGF拮抗剂”或“VEGF特异性拮抗剂”指能够结合VEGF，降低VEGF表达水平，或者中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF生物学活性(包括但不限于VEGF与一种或多种VEGF受体的结合及由VEGF介导的血管发生和内皮细胞存活或增殖)的分子。在本发明的方法中有用的VEGF特异性拮抗剂包括特异性结合VEGF的多肽、特异性结合VEGF受体的多肽、抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特异性结合VEGF由此使其隔绝与一种或多种受体结合的受体分子和衍生物、融合蛋白(例如VEGF-Trap(Regeneron))、和VEGF121-白树毒素(Peregrine)。VEGF特异性拮抗剂还包括VEGF多肽的拮抗性变体、针对VEGF的反义核碱基寡聚物、针对VEGF的小RNA分子、RNA适体、肽体、和针对VEGF的核酶、在严格条件下与编码VEGF或VEGF受体的核酸序列杂交的核酸(例如RNAi )、免疫粘附素、抗VEGF受体抗体和VEGF受体拮抗剂诸如VEGFR酪氨酸激酶的小分子抑制剂。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂结合VEGF并抑制VEGF诱导的体外内皮细胞增殖。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂以大于非VEGF或非VEGF受体的亲和力结合VEGF或VEGF受体。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂以介于IuM和IpM之间的Kd结合VEGF或VEGF受体。依照另一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂以介于500nM和IpM之间的Kd结合VEGF或VEGF受体。VEGF特异性拮抗剂还包括结合VEGF且能够阻断、抑制、消除、降低、或干扰VEGF生物学活性的非肽小分子。如此，术语“VEGF活性”明确包括VEGF介导的VEGF生物学活性。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂将VEGF的表达水平或生物学活性降低或抑制了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或更多。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂选自:多肽诸如抗体、肽体、免疫粘附素、小分子或适体。在一个优选的实施方案中，所述抗体是抗VEGF抗体诸如贝伐单抗(AVASTIN )或抗VEGF受体抗体诸如抗VEGFR2或抗VEGFR3抗体。VEGF拮抗剂的其它例子包括:VEGF-Trap、Mucagen, PTK787、SUl 1248、AG-013736, Bay439006 (sorafenib)、ZD-6474、CP632、CP-547632、AZD-2171、CDP-171、SU-14813、CHIR-258、AEE-788、SB786034、BAY579352、CDP-791、EG-3306、GW-786034、RWJ-417975/CT6758 和 KRN-633。“抗VEGF抗体”指以足够亲和力和特异性结合VEGF的抗体。在某些实施方案中，所选择的抗体通常会具有足够的对VEGF的结合亲和力，例如，该抗体可以以介于IOOnM-1pM之间的Kd值结合hVEGF。抗体亲和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法(诸如PCT申请公开文本N0.W02005/012359中所记载的BIAcore测定法)；酶联免疫吸附测定法(ELISA);和竞争测定法(例如RIA)来测定。优选地，本发明的抗VEGF抗体可用作治疗剂，用于靶向和干扰其中牵涉VEGF活性的疾病或疾患。抗VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同系物，诸如VEGF-B或VEGF-C，也不会结合其它生长因子，诸如P1GF、PDGF或bFGF。一种优选的抗VEGF抗体是与杂交瘤ATCC HB10709所生成的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合相同表位的单克隆抗体。更优选地,抗VEGF抗体是依照Presta et al.(1997)Cancer Res.57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体，包括但不限于称作贝伐单抗(Bevacizumab, BV; Avastin )的抗体。依照另一个实施方案，可以使用的抗VEGF抗体包括但不限于W02005/012359中披露的抗体。依照一个实施方案，所述抗VEGF抗体包含 W02005/012359 的图 24、25、26、27 和 29 中披露的任一抗体(例如 G6、G6-23、G6-31、G6-23.1、G6-23.2、B20、B20-4和B20.4.1)的重链可变区和轻链可变区。在另一个优选的实施方案中，称为ranibizumab的抗VEGF抗体是为了眼病诸如糖尿病神经病变和AMD而施用的VEGF拮抗剂。在某些实施方案中，抗VEGF抗体可用作治疗剂，用于靶向和干扰其中牵涉VEGF活性的疾病或疾患。还有，该抗体可进行其它生物学活性测定法，例如为了评估其作为治疗剂的效力。此类测定法是本领域已知的，而且取决于抗体的靶抗原和预定用途。例子包括HUVEC抑制测定法；肿瘤细胞生长抑制测定法(如例如W089/06692中所记载的)；抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)和补体介导的细胞毒性(CDC)测定法(美国专利5，500，362)；及激动活性或造血测定法(参见W095/27062)。抗VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同系物，诸如VEGF-B或VEGF-C，也不会结合其它生长因子，诸如P1GF、PDGF或bFGF。在一个实施方案中，抗VEGF抗体是与杂交瘤ATCC HB10709所生成的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合相同表位的单克隆抗体。在另一个实施方案中，抗VEGF抗体是依照Presta et al.(1997)Cancer Res.57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体，包括但不限于称作贝伐单抗(Bevacizumab, BV; AVASTIN )的抗体。抗VEGF 抗体“贝伐单抗(BV)”，也称作 “rhuMAb VEGF” 或 “AVASTIN ” ’是一种依照Presta et al.(1997) Cancer Res.57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体。它涵盖突变的人IgGl框架区和来自鼠抗hVEGF单克隆抗体A.4.6.1 (其阻断人VEGF对其受体的结合)的抗原结合互补决定区。贝伐单抗大约93%的氨基酸序列，包括大部分框架区，衍生自人IgGl，而大约7%的序列衍生自小鼠抗体A4.6.1。贝伐单抗具有约149，000道尔顿的分子量，而且是糖基化的。贝伐单抗和其它人源化抗VEGF抗体进一步记载于美国专利 N0.6，884，879 及 W02005/044853。抗VEGF 抗体 Ranibizumab 或LUCliN’HSK抗体或 rhuFab V2 是人源化的、亲和力成熟的抗人VEGF Fab片段。Ranibizumab是通过标准重组技术在大肠杆菌表达载体和细菌发酵中生成的。Ranibizumab是未糖基化的且分子量为约48，000道尔顿。参见W098/45331 和 US2003/0190317。两种表征最全面的VEGF受体是VEGFRl (也称作Flt-1)和VEGFR2 (鼠同系物也称作KDR和FLK-1 )。每一种受体对每一种VEGF家族成员的特异性有所不同，但是VEGF-A结合Flt-1和KDR 二者。全长Flt-1受体包括具有七个Ig结构域的胞外结构域、跨膜结构域、和具有酪氨酸激酶活性的胞内结构域。胞外结构域涉及VEGF结合，而胞内结构域涉及信号转导。
特异性结合VEGF的VEGF受体分子或其片段可以在本发明的方法中用作结合和隔绝VEGF蛋白，由此阻止它发信号的VEGF抑制剂。在某些实施方案中，VEGF受体分子或其VEGF结合片段是可溶性形式，诸如sFlt-Ι。受体的可溶性形式发挥对VEGF蛋白生物学活性的抑制效应，其通过结合VEGF，由此阻止它结合其在靶细胞表面上存在的天然受体来实现。还包括VEGF受体融合蛋白，下文描述了它们的例子。嵌合VEGF受体蛋白指具有自至少两种不同蛋白质(其中至少一种是VEGF受体蛋白，例如fit-ι或KDR受体)衍生的氨基酸序列且能够结合并抑制VEGF生物学活性的受体分子。在某些实施方案中，本发明的嵌合VEGF受体蛋白由自只有两种不同VEGF受体分子衍生的氨基酸序列组成；然而，可以将包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、或所有七个来自flt-Ι和/或KDR受体胞外配体结合区的Ig样结构域的氨基酸序列连接至来自其它无关蛋白质的氨基酸序列，例如免疫球蛋白序列。与Ig样结构域组合的其它氨基酸序列对于本领域普通技术人员会是显而易见的。嵌合VEGF受体蛋白的例子包括但不限于可溶性Flt-l/Fc、KDR/Fc、或Flt-1/KDR/Fc (也称作VEGF Trap)(参见例如PCT申请公开文本N0.W097/44453)。可溶性VEGF受体蛋白或嵌合VEGF受体蛋白包括没有经跨膜结构域而固定至细胞表面的VEGF受体蛋白。因此，VEGF受体(包括嵌合受体蛋白)的可溶性形式，虽然能够结合并灭活VEGF，但是不包含跨膜结构域，并如此一般不会变成与该分子在其中表达的细胞的细胞膜相结合。别的VEGF 抑制剂记载于例如 W099/24440, PCT 国际申请 PCT/IB99/00797, W095/21613, W099/61422,美国专利 N0.6，534，524，美国专利 N0.5，834，504，TO98/50356,美国专利 N0.5，883，113，美国专利 N0.5，886，020，美国专利 N0.5，792，783，美国专利 N0.6，653，308，W099/10349, W097/32856, W097/22596, W098/54093, W098/02438, W099/16755,及W098/02437，通过述及将它们都完整收入本文。如本文中使用的，术语“B20系列多肽”指包括结合VEGF的抗体的多肽。B20系列多肽包括但不限于自B20抗体的序列衍生的抗体或美国公开文本N0.2006/0280747,美国公开文本N0.2007/0141065和/或美国公开文本N0.2007/0020267中记载的B20衍生抗体，通过述及明确将这些专利申请的内容收入本文。在一个实施方案中，B20系列多肽是美国公开文本N0.2006/0280747,美国公开文本N0.2007/0141065和/或美国公开文本N0.2007/0020267中记载的B20-4.1。在另一个实施方案中，B20系列多肽是美国专利申请60/991，302中记载的B20-4.1.1，通过述及将其完整公开内容收入本文。如本文中使用的，术语“G6系列多肽”指包括结合VEGF的抗体的多肽。G6系列多肽包括但不限于自G6抗体的序列衍生的抗体或美国公开文本N0.2006/0280747,美国公开文本N0.2007/0141065和/或美国公开文本N0.2007/0020267中记载的G6衍生抗体。美国公开文本N0.2006/0280747,美国公开文本N0.2007/0141065和/或美国公开文本N0.2007/0020267中记载的G6系列多肽包括但不限于G6_8, G6-23和G6-31。对于别的抗体，参见美国专利N0.7，060，269，6，582，959，6，703，020; 6, 054，297;W098/45332; W096/30046; W094/10202; EP0666868B1;美国专利申请公开 N0.2006/009360,2005/0186208, 2003/0206899, 2003/0190317, 2003/0203409,和 2005/0112126;及 Popkovet al., Journal of Immunological Methods288:149-164 (2004)。在某些实施方案中，其它抗体包括那些结合人 VEGF 上包含残基 F17，M18, D19, Y21, Y25, Q89, 191，K101, E103,和 C104或者包含残基F17，Y21, Q22, Y25, D63, 183和Q89的功能性表位的。还知道其它抗VEGF抗体，而且记载于例如Liang et al.，J BiolChem281, 951-961 (2006)ο患者对抗癌剂治疗的“有效响应"(effective response)或患者对VEGF拮抗剂治疗的“响应性”(responsiveness)或“敏感性”(sensitivity)指源自用抗癌剂(诸如例如抗VEGF-A抗体)进行的治疗或作为该治疗的结果,给予患者(有癌症风险或患有癌症)的临床或治疗受益。此类受益包括细胞或生物学应答、完全响应、部分响应、稳定的病情(没有进展或复发)、或源自用该拮抗剂进行的治疗或作为该治疗的结果的患者响应及稍后复发。例如，有效响应可以是缩小的肿瘤尺寸、延长的无进展存活、或总体存活。如本文中使用的，“拮抗剂”指抑制或降低它们所结合的分子的生物学活性的化合物或药剂。拮抗剂包括结合VEGF的抗体、合成或天然序列肽、免疫粘附素、和小分子拮抗齐U，任选偶联有或融合至另一分子。“阻断性”抗体或“拮抗性”抗体指抑制或降低它所结合的抗原的生物学活性的抗体。如本文中使用的，“激动性抗体”指部分或完全模拟感兴趣多肽的至少一种功能活性的抗体。术语“抗体”在本文中以最广义使用，明确覆盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性。在某些实施方案中，在本文提供的方法中作为VEGF拮抗剂使用的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对VEGF，而另一种针对任何其它抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可结合VEGF的两个不同表位。也可以使用双特异性抗体来将细胞毒剂定位于表达VEGF的细胞。双特异性抗体可以以全长抗体或抗体片段制备。用于生成多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(Milstein, C.and Cuello, A.C., Nature305 (1983)537-540, W093/08829,及 Traunecker,A.et al., EMBO J.10(1991)3655-3659)和“结-入-穴” (knob-1n-hole)工程化(见例如美国专利N0.5，731，168)。也可以通过用于生成抗体Fe-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(W02009/089004)；交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利N0.4，676，980,及Brennan, M.etal.，Science229 (1985) 81-83);使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny，S.A.et al.，J.1mmunol.148(1992) 1547-1553);使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如 Holliger, P.et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90 (1993) 6444-6448);及使用单链 Fv(sFv) 二聚体(见例如 Gruber, M et al., J.1mmunol.152 (1994) 5368-5374);及如例如Tutt，A.et al.，J.1mmunol.147 (1991) 60-69中所描述的，制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。本文中还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化改造抗体，包括“章鱼抗体”(见例如US2006/0025576)。本文中的抗体或片段还包括包含结合VEGF及另一种不同抗原的抗原结合位点的“双重作用 FAb” 或“DAF”(见例如 US2008/0069820)。在本文提供的方法中作为VEGF拮抗剂使用的抗体或抗体片段还包括多特异性抗体，如记载于 W02009/080251, W02009/080252, W02009/080253, W02009/080254, W02010/112193, W02010/115589, W02010/136172, W02010/145792,及 W02010/145793。双特异性 VEGF抗体的例子记载于例如 W02010/040508 (VEGF-ANG2)，PCT/EP2011/054504 (VEGF-ANG2)，W02005/087812 (VEGF-PDGF)，W02009120922(VEGF-PDGFR β)，W02011/039370(VEGF-DII4)。“分离的”抗体指已经鉴定且自其天然环境的成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的研究、诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在有些实施方案中，将抗体纯化至(I)根据例如Lowry法的测定，抗体重量超过95%，而在有些实施方案中，重量超过99%，(2)足以通过使用例如转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用例如考马斯蓝或银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。“天然抗体”指通常由两条相同的轻(L)链和两条相同的重⑶链构成的约150，000道尔顿的异四聚体糖蛋白。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链间有变化。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫键。每条重链在一端具有一个可变域(Vh)，接着是多个恒定域。每条轻链在一端具有一个可变域(')，而另一端是一个恒定域。轻链的恒定域与重链的第一恒定域排列在一起，而轻链的可变域与重链的可变域排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链与重链可变域之间形成界面。抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变域可以称为“VH”。轻链的可变域可以称为“VL”。这些结构域一般是抗体的最易变部分且包含抗原结合位点。术语“可变的”指可变域中的某些部分在抗体间序列差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的实情。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作高变区(HVR)的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β-折叠片结构一部分的三个HVR连接。每条链中的HVR通过FR区非常接近的保持在一起，并与另一条链的HVR —起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见 Kabat et al., Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第 5 版，National Institute of Health, Bethesda, MD.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞的细胞毒性中的参与。根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可归入两种截然不同的型中的一种，称作卡帕(K)和拉姆达(λ)。根据其重链恒定域的氨基酸序列，抗体(免疫球蛋白)可归入不同的类。免疫球蛋白有五大类:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可进一步分为亚类(同种型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。将与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α、δ、ε、Y和μ。不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是众所周知的，一般性描述于例如 Abbas et al.Cellular and Mol.1mmunology, 4th ed.(ff.B.Saunders, C0., 2000)。抗体可以是抗体与一种或多种其它蛋白质或肽共价或非共价关联而形成的更大融合分子的一部分。术语“全长抗体”和“完整抗体”在本文中可互换使用，指基本上完整形式的抗体而非如下文所定义的抗体片段。该术语具体指重链包含Fe区的抗体。“裸抗体(裸露的抗体)”为本发明目的指未偶联细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选包含其抗原结合区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab，)2和Fv片段；双抗体(diabody);线性抗体；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，各自具有一个抗原结合位点，及一个剩余的“Fe”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生一个F (ab’)2片段，它具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。“Fv”是包含完整抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施方案中，双链Fv种类由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。在单链Fv(scFv)种类中，一个重链可变域和一个轻链可变域可以通过柔性肽接头共价相连接，使得轻链和重链可以在与双链Fv种类类似的“二聚体”结构中相结合。正是在这种构造中，每个可变域的三个HVR相互作用而在Vh-' 二聚体表面上限定了一个抗原结合位点。六个HVR —起赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或是只包含对抗原特异性的三个HVR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。Fab片段包含重链和轻链可变域，而且还包含轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CHl)。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于重链CHl结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab’的称谓。？(&13’)2抗体片段最初是作为在Fab’片段之间有铰链半胱氨酸的成对Fab’片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的Vh和\结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链上。一般而言，scFv多肽在Vh与'结构域之间进一步包含多肽接头，其使得scFv能够形成结合抗原的期望结构。关于scFv的综述参见例如Plueckthun,于《The Pharmacology of Monoclonal Antibodies》，第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 编，Springer-Verlag, New York, 1994,第 269-315 页。术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的抗体片段，该片段在同一条多肽链(Vh-Vl)中包含相连的重链可变域(Vh)和轻链可变域(')。通过使用过短的接头使得同一条链上的两个结构域之间不能配对，迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价的或双特异性的。双抗体更完整的记载于例如 EP404, 097;W01993/01161;Hudson et al.，Nat.Med.9:129-134(2003);及 Holliger etal., PNAS USA90:6444-6448 (1993)。三抗体(Triabody)和四抗体(tetrabody)也记载于Hudson et al., Nat.Med.9:129-134 (2003) 术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的突变，例如天然存在的突变。如此，修饰语“单克隆”表明抗体不是分立的抗体的混合物的特征。在某些实施方案中，此类单克隆抗体典型的包括包含结合靶物的多肽序列的抗体，其中靶物结合多肽序列是通过包括从众多多肽序列中选择单一靶物结合多肽序列在内的过程得到的。例如，选择过程可以是从众多克隆诸如杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆的集合中选择独特克隆。应当理解，所选择的靶物结合序列可进一步改变，例如为了提高对靶物的亲和力、将靶物结合序列人源化、提高其在细胞培养物中的产量、降低其在体内的免疫原性、创建多特异性抗体等，而且包含改变后的靶物结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性外，单克隆抗体制备物的优势在于它们通常未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”表明抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生产抗体。例如，将依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如Kohler and Milstein, Nature, 256:495-497 (1975) ;Hongo et al.，Hybridoma, 14 (3):253-260 (1995) ;Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor LaboratoryPress, second ed.(1988) ;Hammerling et al., In:Monoclonal Antibodies andT-Cell Hybridomas, 563-681(Elsevier, N.Y.，1981))、重组 DNA 法(参见例如美国专利N0.4, 816, 567)、卩遼菌体展不技术(参见例如Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) ;Marks et al.，J.Mol.Biol.222: 581-597 (1992) ; Sidhu et al., J.Mol.Biol.338 (2):299-310(2004) ; Lee et al., J.Mol.Biol.340(5): 1073-1093(2004);Fellouse, PNAS USAlOl (34):12467-12472(2004);及 Lee et al.，J.1mmunol.Meth0ds284(l-2):119-132(2004))、及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(参见例如W01998/24893;W01996/34096;W01996/33735;ff01991/10741;Jakobovits et al.，PNAS USA90:2551-2555(1993);Jakobovits et al., Nature362:255-258(1993);Bruggemann et al., Year inImmunol.7:33 (1993);美国专利 N0.5，545，807 ; 5，545，806; 5，569，825; 5，625，126; 5，633，425;和5，661，016;Marks et al., Bio/TechnologylO:779-783(1992);Lonberg et al., Nature368:856-859(1994);Morrison, Nature368:812-813(1994);Fishwild et al., NatureBiotechnol.14:845-851 (1996);Neuberger, Nature Biotechnol.14:826 (1996);及Lonberg and Huszar, Intern.Rev.Tmmunol.13:65-93(1995))。单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(例如美国专利N0.4，816，567;Morrisonet al., PNAS USA81:6851-6855 (1984))。嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过例如用感兴趣抗原免疫猕猴而生成的抗体。非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的HVR残基用具有期望特异性、亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、家兔、或非人灵长类动物的HVR残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的FR残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。可以进行这些修饰来进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见例如Jones et al.，Nature321:522-525 (1986) ; Riechmann et al., Nature332:323-329 (1988) ;&Presta, Curr.0p.Struct.Biol.2:593-596 (1992)。还可参见例如 Vaswani and Hamilton, Ann.Allergy,AsthmafcTmmuno1.1:105-115 (1998) ; Harris, Biochem.Soc.Transactions23:1035-1038 (1995) ;Hurle and Gross, Curr.0p.Biotech.5:428-433(1994);及美国专利 N0.6，982，321 和7，087，409。“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括曬菌体展不文库(Hoogenboom and Winter, J.Mol.Biol., 227:381 (1991) ;Markset al.，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法:Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, AlanR.Liss, p.77 (1985) ;Boerner et al., J.1mmunol.147(1):86-95(1991)。还可参见 van Dijkand van de Winkel, Curr.0pin.Pharmacol.，5:368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因组已经失能的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如6，075, 181和6，150, 584，关于XEN0M0USE 技术)。还可参见例如Li et al., PNAS USA，103:3557-3562 (2006)，关于经人B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR:三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。参见例如Xu et al.,Immunityl3:37-45 (2000);Johnson and Wu, In:Methods in Molecular Biology,248:1-25(Lo, ed., HumanPress, Totowa, NJ, 2003)。事实上,仅由重链组成的天然存在camelid抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。参见例如 Hamers-Casterman et al.，Nature363:446-448 (1993)，及Sheriff et al., Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)。本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。作为Kabat互补决定区(OTR)的HVR是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat et al., Sequences of Proteins ofImmunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes ofHealth, Bethesda, MD (1991))。Chothia 改为指结构环的位置(Chothia and Lesk, J.Mol.Biol.196:901-917 (1987))。AbM HVR 代表 Kabat CDR 与 Chothia 结构环之间的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触”HVR是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些HVR中每一个的残基。
环 KabatAbMChothia 接触
LIL24-L34L24-L34L26-L32L30-L36
L2L50-L56L50-L56L50-L52L46-L55
LJL89-L97L89-L97U) 1-1....%LB9-L96
HlH31-H35BH26-H35BH26-H32H30-H35B (Kabat编号)
HlΗ3Ι-1Π51126-1135Ii26-li32 ηθ-1Π5 ((’liollua編兮)
1121150-11 65I !5()-1158Π53-Π551147-1158
H3 H95-H102 H95-H102 H96-H101 H93-H101HVR 可包括如下“延伸的 HVR”:VL 中的 24-36 或 24-34 (LI)、46_56 或 50-56 (L2)和 89-97 或 89-96 (L3)及 VH 中的 26-35 (Hl)、50-65 或 49-65 (H2)和 93-102、94_102 或95-102 (H3)。对于这些延伸的HVR定义中的每一个，可变域残基是依照Kabat等，见上文编号的。“框架”或“FR”残基指可变域中除本文中所定义的HVR残基外的那些残基。表述“依照Kabat的可变域残基编号方式”或“依照Kabat的氨基酸位置编号方式”及其变体指Kabat et al.，见上文中的抗体编辑用于重链可变域或轻链可变域的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含较少或另外的氨基酸，对应于可变域FR或HVR的缩短或插入。例如，重链可变域可包含H2残基52后的单一氨基酸插入(依照Kabat为残基52a)及重链FR残基82后的插入残基(例如依照Kabat为残基82a、82b和82c等)。给定抗体的Kabat残基编号方式可通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列对比同源区来确定。“亲和力成熟的”抗体指在抗体的一个或多个HVR中具有一处或多处改变、导致该抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的抗体。在一个实施方案，亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知规程来生成。例如，Marks et al., Bio/TechnologylO: 779-783 (1992)记载了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。以下文献记载了 HVR和/或框架残基的随机诱变:例如Barbas et al., Proc Nat.Acad.Sc1.USA91:3809-3813 (1994) ; Schieret al., Gene169:147-155 (1995);Yelton et al.，J.1mmunol.155:1994-2004 (1995);Jackson et al.，J.1mmunol.154 (7): 3310-9 (1995);及 Hawkins et al., J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。“生长抑制性”抗体指那些阻止或降低表达抗体所结合之抗原的细胞增殖的抗体。“诱导凋亡”的抗体指那些根据标准凋亡测定法的测定，诱导程序性细胞死亡的抗体，所述测定法诸如膜联蛋白V结合、DNA断裂、细胞收缩、内质网膨胀、细胞破裂、和/或膜囊(称作凋亡小体)形成。抗体“效应器功能”指那些可归于抗体Fe区(天然序列Fe区或氨基酸序列变体Fe区)且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括:Clq结合和补体依赖性细胞毒性(CDC) ;Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。术语“Fe区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C-端区域，包括天然序列Fe区和变异Fe区。虽然免疫球蛋白重链Fe区的边界可以变化，但是人IgG重链Fe区通常定义为自其Cys226或Pro230位置的氨基酸残基至羧基末端的区段。Fe区的C-末端赖氨酸(残基447，依照EU编号系统)可以消除，例如在生产或纯化抗体的过程中，或者通过对编码抗体重链的核酸进行重组工程改造。因而，完整抗体组合物可以包括所有K447残基都被消除的抗体群、无一 K447残基被消除的抗体群、或者混合了有K447残基的抗体和没有K447残基的抗体的抗体群。除非本文另有说明，免疫球蛋白重链的残基编号方式是如Kabat et al.，见上文中的EU索引的编号方式。“如Kabat中的EU索引”指人IgGlEU抗体的残基编号方式。“功能性Fe区”拥有天然序列Fe区的“效应器功能”。例示性的“效应器功能”包括Clq结合；CDC ;Fc受体结合；ADCC ;吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)下调等。此类效应器功能一般要求Fe区与结合结构域(例如抗体可变域)联合，而且可以使用多种测定法来评估，例如本文定义中所公开的。“天然序列Fe区”包含与在自然界中找到的Fe区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fe区包括天然序列人IgGlFc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2Fc区；天然序列人IgG3Fc区；和天然序列人IgG4Fc区；及其天然存在变体。“变异Fe区”包含由于至少一处氨基酸修饰(优选一处或多处氨基酸替代)而与天然序列Fe区有所不同的氨基酸序列。优选的是，变异Fe区与天然序列Fe区相比或与亲本多肽的Fe区相比具有至少一处氨基酸替代，例如在天然序列Fe区中或在亲本多肽的Fe区中具有约I处至约10处氨基酸替代，优选约I处至约5处氨基酸替代。变异Fe区在本文中优选与天然序列Fe区和/或亲本多肽的Fe区拥有至少约80%的同源性，最优选与它们具有至少约90%的同源性，更优选与它们具有至少约95%的同源性。“含Fe区的抗体”指包含Fe区的抗体。Fe区的C-末端赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)可以消除，例如在纯化抗体的过程中或者通过重组改造编码抗体的核酸。因此，依照本发明包含具有Fe区的抗体的组合物可包含具有K447的抗体、消除了所有K447的抗体、或具有与没有K447残基的抗体的混合物。“Fe受体”或“FcR”描述结合抗体Fe区的受体。在有些实施方案中，FcR是天然人FcR0在有些实施方案中，FcR是结合IgG抗体的FcR ( Y受体)，包括属于Fe Y R1、Fc Y RII和Fe Y RIII亚类的受体，包括那些受体的等位变体和可变剪接形式。FcyRII受体包括Fe Y RIIA (“活化受体”)和Fe Y RIIB (“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其胞质结构域。活化受体Fe Y RIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体Fe Y RIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见例如 DaSron, Annu.Rev.1mmunol.15:203-234 (1997))。FcR 的综述见例如Ravetch and Kinet,Annu.Rev.1mmunol9:457-92 (1991);Capel et al., Immunomethods4:25-34(1994) ; and de Haas et al.，J.Lab.Clin.Med.126:330-41 (1995))。术语“FcR”在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。术语“Fe受体”或“FcR”还包括新生儿受体，FcRn，它负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer et al.，J.1mmunol.117:587(1976)及 Kim et al.，J.1mmunol.24:249(1994))并调节免疫球蛋白的体内稳态。测量对FcRn的结合的方法是已知的(参见例如Ghetie andWard, Immunology Today, 18:592-8(1997);Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637-640(1997) ; Hinton et al.，J.Biol.Chem.，279(8):6213-6(2004) ;W02004/92219, Hinton et al.)。
可测定人FcRn高亲和力结合多肽与人FcRn的体内结合和血清半衰期，例如在表达人FcRn的转基因小鼠或经转染人细胞系中，或者在施用了具有变异Fe区的多肽的灵长类动物中。W000/42072 (Presta)记载了对FcR的结合提高或降低的抗体变体。还可参见例如 Shields et al., J.Biol.Chem.9 (2): 6591-6604 (2001) “结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，在用于本文时，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体与抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和力可通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的那些。低亲和力抗体通常缓慢地结合抗原且趋于容易解离，而高亲和力抗体通常更快速地结合抗原且趋于保持更长时间的结合。本领域知道测量结合亲和力的多种方法，其中任一种都可用于本发明的目的。下文描述了具体的、示例性和例示性的、用于测量结合亲和力的实施方案。在一个实施方案中，依照本发明的“Kd”或“Kd值”是通过如下测定法所述使用Fab型式的目的抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的:通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的(1251)标记抗原平衡Fab,然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见例如Chen etal.，J.Mol.Biol.293:865-881 (1999))。为了确定测定条件，用 50mM 碳酸钠(pH9.6)中的5 μ g/ml 捕捉用抗 Fab 抗体(Cappel Labs)包被微量滴定板(DYNEX Technologies, Inc.)过夜，随后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白在室温(约23° C)封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的目的Fab混合(例如与 Presta et al., Cancer Res.57:4593-4599 (1997)中抗 VEGF 抗体，Fab-12 的评估一致)。然后将目的Fab保温过夜；不过，保温可持续更长时间(例如约65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温(例如I小时)。然后除去溶液，并用含0.l%Tween-20 表面活性剂的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔闪烁液(MICR0SCINT-20 ; Packard)，然后在T0PC0UNT 伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测定法使用BIACC)RE -2000 或 BIACORE -3000 仪器(BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)在25。C使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’ -(3- 二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠PH4.8将抗原稀释至5 μ g/ml(约0.2 μ Μ)，然后以5 μ I/分钟的流速注入至获得约十个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25° C以约25 μ I/分钟的流速注入在含0.05%TWEEN20 表面活性剂的PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(Bi Ac’orei Evaluation Software version3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率!^^/!^计算。参见例如Chen et al.，J.Mol.Biol.293:865-881 (1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(a stop-flow equipped spectrophometer) (Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINC0 分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量PBS，pH7.2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25。C的突光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。依照本发明的“结合速率”(on-rate,rate of association, associationrate)或“kon”也可如上所述使用BIACORE -2000或BIACORE -3000系统(BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)来测定。短语“基本上相似”或“基本上相同”在用于本文时表示两个数值(例如，一个涉及本发明的抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较值的函数，所述两个数值之间的差异例如小于约50%，小于约40%，小于约30%，小于约20%，和/或小于约10%。短语“实质性降低”或“实质性不同”在用于本文时表示两个数值(通常一个与某分子有关而另一个与参照/比较分子有关)之间足够高的差异程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有统计学显著性。作为参照/比较分子该数值的函数，所述两个数值之间的差异例如大于约10%，大于约20%，大于约30%，大于约40%，和/或大于约50%。在某些实施方案中，本文中有用的人源化抗体进一步包含IgG Fe中的氨基酸改变且展现超出具有野生型IgG Fe的抗体升高至少60倍、至少70倍、至少80倍、更优选至少100倍、优选至少125倍、甚至更优选至少150倍至约170倍的对人FcRn的结合亲和力。“病症”或“疾病”指将受益于本发明物质/分子或方法的治疗的任何状况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易患所讨论病症的病理状况。本文中待治疗的病症的非限制性例子包括癌症(例如恶性和良性肿瘤；非白血病和淋巴样恶性肿瘤)；神经元、神经胶质、星形胶质细胞、下丘脑和其它腺体、巨噬细胞、上皮、基质和囊胚腔的病症；及炎性病症、免疫学病症和其它血管发生相关病症。术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症是血管发生。“肿瘤”在用于本文时指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-canceixms)和癌性细胞和组织。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性病症”、“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。

术语“癌症”和“癌性”指或描述哺乳动物中特征通常为细胞增殖不受调控的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤、和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、和肺的鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastric or stomach cancer)(包括例如胃肠癌)、胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer or hepaticcarcinoma)、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌(包括局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌(kidney or renalcancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、及各种类型的头和颈癌，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性(SL) NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级成淋巴细胞性NHL、高级小无核裂细胞性NHL、贮积病(bulky disease)NHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤、和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、毛细胞性白血病、慢性成髓细胞性白血病、和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)、以及与瘢痣病(phakomatoses)、水肿(诸如与脑瘤有关的)和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖。术语“抗肿瘤组合物”或“抗癌组合物”或“抗癌剂”指可用于治疗癌症的组合物，其包含至少一种活性治疗剂，例如“抗癌剂”。治疗剂(抗癌剂)的例子包括但不限于例如化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、放射疗法中所使用的药剂、抗血管发生剂、抗淋巴管发生齐U、凋亡剂、抗微管蛋白剂、和其它用于治疗癌症的药剂诸如抗HER-2抗体、抗CD20抗体、表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)、HER1/EGFR抑制剂(例如厄洛替尼(TarcevaTM)、血小板衍生生长因子抑制剂(例如GleevecTM(Imatinib Mesylate))、C0X-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib))、干扰素、细胞因子、能与ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR- β、BlyS、APRIL、BCMA、VEGF或VEGF受体中的一种或多种靶物结合的拮抗剂(例如中和性抗体)、TRAIL/Apo2、及其它生物活性和有机化学剂等。本发明还包括它们的组合。在用于本文时，“治疗”或“处理”指试图改变所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括预防疾病的发生或复发、缓解症状、削弱疾病的任何直接或间接病理学后果、防止转移、减缓疾病进展的速率、改善或减轻疾病状态、及免除或改善预后。在有些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病或病症的发生/发展。“有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的治疗或预防效果的量。本发明的物质/分子、拮抗剂或激动剂的“治疗有效量”可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重及该物质/分子、激动剂或拮抗剂在个体中引发期望应答的能力等因素而变化。治疗有效量还指该物质/分子、激动剂或拮抗剂的治疗有益效果胜过任何有毒或有害后果的量。术语“治疗有效量”指在哺乳动物(aka患者)中有效“治疗”疾病或紊乱的本发明抗体、多肽、或拮抗剂的数量。在癌症的情况中，药物的治疗有效量可减少癌细胞数；缩小肿瘤体积或重量；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/或一定程度的减轻与癌症有关的一种或多种症状。就药物可预防癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是抑制细胞的和/或毒害细胞的。在一个实施方案中，治疗有效量是生长抑制量。在另一个实施方案中，治疗有效量是延长患者存活的量。在另一个实施方案中，治疗有效量是改进患者无进展存活的量。如本文中使用的，“无进展存活”指治疗期间和之后依照主治医师或调查人员的评估，患者的疾病没有恶化，即没有进展的时间的长度。
“预防有效量”指在必需的剂量和时间上有效实现期望的预防效果的量。通常而非必然，由于预防剂量是在疾病发作之前或在疾病的早期用于受试者的，因此预防有效量低于治疗有效量。术语“细胞毒剂”在用于本文时指抑制或防止细胞的功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意图包括:放射性同位素，例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素；化疗剂，例如甲氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；和毒素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活毒素，包括其片段和/或变体；及下文披露的各种抗肿瘤药或抗癌药。下文记载了其它细胞毒剂。杀肿瘤药引起肿瘤细胞的破坏。“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的例子包括烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和 CYTOXAN 环磷酰胺(cyclophosphamide);横酸焼基酯类(alkyl sulfonates)，诸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙卩定类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylameIamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代憐酉先胺(triethylenethiophosphoramide)和三轻甲蜜胺(trimethylolomelamine);番蒸枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bulIatacin)和布拉他辛酮(bulIatacinone) ) ； δ -9-四氢大麻酌.(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酌.(dronabinol)，MARiNOL ) ； β -拉帕醌(Iapachone)；拉帕醇(Iapachol);秋水仙素类(colchicines);白桦脂酸(betulinic acid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan) ( HYCAMHN )、CPT-1l (伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR )、乙酰喜树碱、东莨菪亭(scopoletin)和9_氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin ;CC_1065 (包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinicacid);替尼泊苷(teniposide);隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素I和隐藻素8);多拉司他汀(dolastatin) ；duocarmycin (包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1);艾植塞洛素(eleutherobin) ;pancratistatin ;sarcodictyin ;海绵抑素(spongistatin);氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾酉享(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺(trofosfamide)、尿啼唳氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(1mustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素Y II和加利车霉素ω (参见例如Agnew，Chem.1ntl.Ed.Engl.，33:183-186 (1994));蒽环类抗生素(dynemicin)，包括 dynemicin A ；埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素 D (dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_二氮_5_氧-L-正亮氨酸、ADRlAMYC1N 多柔比星(doxorubicin)
(包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcel1mycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素 C、霉酌.酸(mycophenolicacid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素(potfiromycin)、票呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ub enimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤和5-氟尿啼唳(5-FU);叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate) J票呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6_ 巯基票呤(mercaptopurine)、硫咪票呤(thiamiprine)、硫鸟_呤(thioguanine);啼卩定类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifIuridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(f1xuridine);雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)、睾内酯(testolactone);抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinic acid);醋葡醒内酯(aceglatone);醒磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酉先丙酸(aminolevulinic acid);恩尿啼唳(eniluracil);安口丫P定(amsacrine) ；bestrabucil ;比生群(bisantrene);依达曲沙(edatraxate);地憐酉先胺(defosfamide);地美可辛(demecolcine);地口丫酉昆(diaziquone) ;elfornithine ;依利醋铵(elliptinium acetate);埃坡霉素(epothilone);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓；轻脲(hydroxyurea);香燕多糖(Ientinan);氯尼达明(1nidamine);美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和美登醇(maytansinol);安丝菌素(ansamitocin);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽酉昆(mitoxantrone);莫哌达酉享(mopidamol) ;二胺硝卩丫唳(nitracrine);喷司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet)；批柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(1soxantrone) ；2~ 乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴餅(procarbazine) ；PSK j< 多糖复合物(JHS Natural Products, Eugene, OR);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西索菲兰(sizofiran);螺方定错(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid);三亚胺醌(triaziquone) ;2，2’，2’ ’ -三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、抚孢菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine) ( ELDISINE , FILDESIN );达卡巴嗪(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine) ; 二溴甘露醇(mitobronitol) ; 二溴卫矛醇(mitolactol);哌泊溴焼(pipobroman) ;gacytosine ;阿糖胞苷(arabinoside) (“Ara_C”)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如 TAXOL 紫杉醇(paclitaxel) (Bristol-Myers SquibbOncology, Princeton, N.J.)、ABRAXANE 不含克列莫佛(Cremophor)，清蛋白改造的纳米颗粒剂型紫杉醇(American Pharmaceutical Partners, Schaumbergj Illinois)和TAXOTERE 多西他塞(doxetaxel) (Rhone-Poulenc Rorerj Antony, France)；苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他滨(gemcitabine) ( GEMZAR⑩)；6-硫鸟 P票呤(thioguanine);疏基票呤(mercaptopurine);甲氨蝶呤(methotrexate);钼类似物，诸如顺钼(cisplatin)和卡钼(carboplatin);长春碱(vinblastine) ( VELBAN )；鉑；依托泊苷(etoposide) (VP-16);异环磷酰胺(ifosfamide);米托蒽酉昆(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine) ( ONCOVIN )；奥沙利钼(oxaliplatin);亚叶酸(Ieucovorin);长春瑞滨(vinorelbine) ( NAVELBINE )；能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate);道诺霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);伊本膦酸盐(ibandronate);拓扑异构酶抑制剂RFS 2000 ; 二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类维A酸(retinoids),诸如维A酸(retinoic acid);卡培他滨(capecitabine) ( XELODA );任
何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合，诸如CHOP (环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利钼(EL0XATIN )联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。别的化疗剂包括可用作抗体药物偶联物的细胞毒齐U，诸如美登木生物碱(例如DMl)和auristatin (例如MMAE和MMAF)。“化疗剂”还包括作用为调节、降低、阻断、或抑制可促进癌生长的激素效果的抗激素剂，且常常是系统或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。实例包括抗雌激素类和选择性雌激素受体调节剂类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX 他莫昔芬)、EVISTA 雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4_轻基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和FARESTON .托瑞米芬(toremifene);抗孕酮类；雌激素受体下调剂类(ERD);功能为抑制或关闭卵巢的药剂，例如促黄体生成激素释放激素(LHRH)激动剂，诸如LUPRON 和I」LI(.丨ΛR1.).醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和曲普瑞林(triptorelin);其它抗雄激素类，诸如氟他米特(fIutamide)、尼鲁米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide)；及抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、MEGASE⑩醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、A ROM A S IN1] .':.依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、RIVISOR 伏罗挫(vorozole)、FEMARA 来曲挫(Ietrozole)和 ARIMIDEX 阿那曲唑(anastrozole)。 另外,化疗剂的这种定义包括二膦酸盐类(bisphosphonates),诸如氯膦酸盐(Clodronate)(例如 BON.EFOS 或 0STAC )、DIDR0CAL 依替膦酸钠(etidronate)、NE-58095、ZOMETA. 卩坐来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronicacid/zoledronate)、FOSAMΑΧ 阿伦膦酸盐(alendronate)、AREDIA 帕米膦酸盐(pamidronate)、SKELID '替鲁膦酸盐(tiludronate)或 ACTON EL 利塞膦酸盐(risedronate);以及曲沙他滨(troxacitabine) (1，3_ 二氧戍环核苷胞卩密唳类似物);反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉粘着细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-a、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R);疫苗，诸如THERAT+OPE 疫苗和基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和VAXID⑩疫苗；LURTOTECAN .拓扑异构酶 I 抑制剂;ABARELIX rmRH; lapatinib ditosylate(ErbB-2和EGFR双重酪氨酸激酶小分子抑制剂，也称为GW572016);及任何上述物质的药学可接受盐、酸或衍生物。“生长抑制剂”在用于本文时指抑制细胞生长和/或增殖的化合物或组合物。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于S期以外的位置)的药剂，诸如诱导Gl停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))、紫杉烧类(taxanes)、和拓扑异构酶II抑制剂诸如惠环类抗生素多柔比星(doxorubicin) ( (8S-顺式)_10_[ (3-氛基-2，3，6-二脱氧-α-L-来苏-吡喃己糖基)氧基]_7，8，9，10-四氢-6，8，11-三羟基_8_(羟基乙酸基)_1_ 甲氧基 _5，12-蔡二 丽，即(8S_cis) -10-[ (3-amino_2, 3, 6-trideoxy- α -L-lyxo-hexapyranosyl)oxy]~7, 8，9, 10-tetra hydro-6, 8,Il-trihydroxy-8-(hydroxyacetyl) -l-methoxy-5, 12-naphthacenedione)> 表柔 I:匕星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞Gl的药剂也溢出进入S期停滞,例如DNA烧化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、泼尼松(prednisone)、达卡巴嗪(dacarbazine)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、顺钼(cisplatin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、5-氟尿卩密P定(5_f Iuorouracil)和ara_C。更多信息可参见The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel 编,ChapterI,题为 〃Cellcycle regulation, oncogenes, and ant1-neoplastic drugs", Murakami et al.(ff.B.Saunders !Philadelphia, 1995),尤其是第 13 页。紫杉烧类(帕利他赛(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(TAXOTERE , Rhone-Poulenc Rorer)是紫杉醇(TAXOL , Bristol-Myers Squibb)
的半合成类似物。紫杉醇和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。如本文中所使用的，术语“患者”指想要治疗的任何单一动物，更优选哺乳动物(包括非人动物，诸如例如犬、猫、马、家兔、动物园动物、牛、猪、绵羊、和非人灵长类)。最优选的是，本文中的患者是人。“受试者”在本文 中指任何单一人类受试者，包括适于接受治疗的患者，他正经受或者已经经受血管发生性病症的一种或多种体征、症状、或其它指标。意图包括作为受试者的是参与临床研究试验且未显示疾病的任何临床体征的任何受试者，或参与流行病学研究的受试者，或曾经用作对照的受试者。所述受试者可以先前用抗癌剂治疗过，或者没有这样治疗过。受试者可以是在开始本文中的治疗时未用过所用另一药剂的，即该受试者在“基线”(即在本文中治疗方法中施用第一剂抗癌剂之前的一个设定点，诸如开始治疗之前筛选受试者的日子)时可以没有用例如抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂治疗过。这样的“未接触(药物)”受试者一般认为是用所述另一药剂进行治疗的候选人。术语“药物配制剂”指其形式容许药物的生物学活性是有效的，且不含对会施用该配制剂的受试者产生不可接受的毒性的别的成分的无菌制备物。“无菌”配制剂是无菌的或不含所有活的微生物及其孢子。“包装插页”用于指通常包括在治疗用产品或药物的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类治疗用产品或药物应用的适应征、用法、剂量、施用、禁忌症、与该包装产品联合的其它治疗用产品和/或警告等的信息。“试剂盒”指包含至少一种试剂(例如用于治疗血管发生性病症的药物，或用于特异性检测本发明的生物标志物基因或蛋白的探针)的任何制品(例如包装或容器)。所述制品优选以用于实施本发明方法的单位来宣传、分发、或销售。就对药物没有响应而言，因先前的或当前的一种或多种药物的治疗而经历“临床上不可接受的高水平毒性”的受试者经历一种或多种与该药物有关的、有经验的临床医师认为是重大的负面副作用或不良事件，诸如例如严重感染、充血性心力衰竭、脱髓鞘(引起多发性硬化)、显著的超敏感性、神经病理性事件、高度的自身免疫、癌症(诸如子宫内膜癌、非何杰金氏淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、卵巢癌、或黑素瘤)、结核病(TB)、等。“降低负面副作用的风险”指将源自本文中拮抗剂治疗的副作用的风险降低至比源自用先前施用的药物治疗同一患者或另一患者所观察到的风险要低的程度。此类副作用包括上文关于毒性所列出的副作用，而且优选是感染、癌症、心力衰竭、或脱髓鞘。“关联”或“联系”指以任何方式将第一分析或方案的性能和/或结果与第二分析或方案的性能和/或结果进行比较。例如，可以将第一分析或方案的结果用于实施第二分析或方案，和/或，可以使用第一分析或方案的结果来决定是否应当实施第二分析或方案。就本发明的各个实施方案而言，可以使用分析性测定法的结果来决定是否应当实施使用抗癌剂，诸如抗VEGF抗体的特定治疗方案。II1.方法本发明提供用于鉴定会受益于包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法的治疗的患者的方法，预测患有癌症的患者对包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗的响应性的方法，用于确定具有癌症的患者会展现出受益于包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的可能性的方法，和用于优化包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗功效的方法。该等方法包括测定自患者获得的样品中的VEGFlltl表达水平，其中自患者获得的样品中处于或高出参照水平的VEGFlltl水平指示该患者会受益于包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法的治疗，该患者具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性，或该患者更有可能响应该抗癌疗法。在一些实施方案中，该等方法进一步包括将包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法施用于患者。本发明进一步提供用于治疗患者中癌症的方法。该等方法包括确定自患者的获得的样品具有处于或高出参照水平的VEGFlltl水平，并将有效量的包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法施用于所述患者，由此治疗癌症。在一些实施方案中，该等方法进一步包括将有效量的别的药剂(例如第二、第三、或第四药剂)施用于该患者。
A.检测方法所公开的方法和测定法提供方便、有效、且潜在划算的手段来获得可用于评估治疗患者的适宜或有效疗法的数据和信息。例如，依照本发明的方法，患者可以在包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法的治疗之前提供血液样品，并且可以测定样品中的VEGFlltl水平并分别与参照样品中的VEGFlltl水平或与预定的参照值比较。将具有升高的VEGFlltl水平的患者鉴定会响应包含VEGF拮抗剂(诸如抗VEGF抗体)的抗癌疗法的患者。该方法可以多种测定法形式进行，包括检测蛋白质表达的测定法(诸如酶免疫测定法)和检测适宜活性的生物化学测定法。样品中此类生物标志物的表达或存在的确定预示提供样品的患者会对VEGF拮抗剂的生物学效应敏感。通常，自患者获得的样品中处于或超出参照水平的VEGFlltl表达水平指示患者会响应VEGF拮抗剂治疗或对VEGF拮抗剂治疗敏感。医学领域(特别是关于诊断测试和治疗剂治疗的应用)技术人员会认识到，生物学系统有些易变，而且并非总是全然可预测的，而且因此许多好的诊断测试或治疗剂偶尔无效。如此，最终由主治内科医师的判断来为患者个体决定最适宜治疗过程，这基于测试结果、患者状况和历史、及他或她自己的经验来做出。例如，甚至会有这样的情况，即使根据来自诊断测试的或来自其它标准的数据，没有预测出患者会对VEGF拮抗剂特别敏感，内科医师也会选择用VEGF拮抗剂来治疗患者，特别是如果所有或大多数其它明显的治疗选项已经失败，或者如果与另一种治疗一起给予时预见有一些协同性。在别的表述的实施方案中，本发明提供一种预测患者对包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法的治疗的敏感性，或预测患者是否会有效响应包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法的治疗的方法，包括评估样品中的VEGFlltl水平；并预测患者对VEGF拮抗剂的抑制作用的敏感性，其中处于或超出参照水平的的VEGFlltl表达水平与患者有效响应VEGF拮抗剂治疗的高敏感性有关联。样品可以取自怀疑具有或诊断具有癌症(包括例如结肠直肠癌、成胶质细胞瘤、肾癌、卵巢癌、乳腺癌(包括例如局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌)、胰腺癌(包括例如转移性胰腺癌)、胃癌、和肺癌)，因此有可能需要治疗的患者或没有怀疑具有任何病症的正常个体。为了评估标志物表达，可以在本发明的方法中使用患者样品(诸如那些含有细胞的，或由这些细胞生成的蛋白质或核酸)。在本发明的方法中，生物标志物的水平可通过评估样品中标志物的量(例如绝对量或浓度)来确定，优选在含有可检测水平的生物标志物的体液或分泌物中评估的。可用作本发明中样品的体液或分泌物包括例如血液、淋巴液、痰、腹水、或任何其它身体分泌物或其衍生物。词语血液意图包括全血、血浆、血清、或任何血液衍生物。此类体液或分泌物中生物标志物的评估在侵入性取样方法不适宜或不方便的情况中有时可以是优选的。然而，本文中要测试的样品优选血液，最优选血浆。在一个实施方案中，样品是EDTA-血衆。在一个实施方案中，样品是朽1檬酸盐-血衆。上述样品可以是冷冻的、新鲜的、固定的(例如福尔马林固定的)、离心的、和/或包埋的(例如石蜡包埋的)、等。当然，细胞样品可以在评估样品中标志物的量之前进行多种公知的收集后制备和保存技术(例如核酸和/或蛋白质提取、固定、保存、冷冻、超滤、浓缩、蒸发、离心、等)。同样，活检物也可进行收集后准备和保存技术，例如固定。A.VEGFlltl 的检测VEGFlltl蛋白可以使用本领域已知的任何适宜方法来检测。例如，可以使用Western、ELISA、等方便地对来自哺乳动物的组织或细胞样品测定例如蛋白质。许多参考文献是可获得的，它们提供了应用上述技术的指导(Kohler et a 1.，HybridomaTechniques (Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1980);Tijssen, Practice andTheory of Enzyme Immunoassays(Elsevier, Amsterdam, 1985);Campbell, MonoclonaI Antibody Technology(Elsevier, Amsterdam, 1984);HurrelI, Monoclonal HybridomaAntibodies:Techniques and Applications(CRC Press,Boca Raton, FL, 1982);及 Zola,Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques,pp.147-158 (CRCPress, Inc., 1987))。如果提及VEGFlltl的检测或水平的话，这表示测量VEGFlltl同等型，即切割产物VEGF110。至于VEGFlltl蛋白质的检测，可得到多种测定法。例如，可以将样品与优先或特异性结合短VEGF-A同等型VEGFlltl的抗体或抗体组合(例如在夹心式测定法中)接触。优选地，以与更长同等型相比，尤其与VEGF165相比要高至少3倍的灵敏度检测VEGF11Q。在一个实施方案中，使用对VEGFlltl具有与VEGF165相比高至少3倍的灵敏度的抗体。通过使用相同试剂比较VEGF165 (根据SDS-PAGE和通过0D280nm测定的浓度，纯度至少90%)和切割产物VEGF110 (根据SDS-PAGE和通过0D280nm测定的浓度，纯度至少90%)来评估此类对VEGFlltl要高至少3倍的灵敏度。如果在此比较中，对VEGF165获得的信号只有用VEGFlltl获得的信号的三分之一或更小，那么VEGFlltl以高至少3倍的灵敏度得到检测。正如技术人员会领会的，优选在最大信号的约50%处读取信号。还优选对VEGFlltl的灵敏度与长同等型相比，尤其是与VEGF165相比要高至少4倍、5倍、6倍、7倍、8倍或9倍。在一个优选的实施方案中，特异性检测VEGF110。此类特异性检测是可能的，例如，如果使用和采用结合VEGFlltl的游离C端的抗体，尤其是单克隆抗体的话。此类VEGFlltl抗C端抗体不结合包含氨基酸110作为更长多肽链一部分的任何VEGF-A同等型或例如在氨基酸109处结束的更短VEGF-A片段。如果所使用的抗体对在其C端不具有氨基酸110的更短VEGF片段展现小于10%的交叉反应性及对那些不具有游离C端氨基酸110的VEGF-A同等型展现小于10%的交叉反应性，那么承认上述意义的对VEGFlltl的特异性结合。还优选对于更短VEGF片段和不具有游离C端氨基酸110的VEGF同等型二者，交叉反应性会小于5%、4%、3%、2%和1%。只结合短VEGF切割产物VEGFlltl的适宜特异性抗体可依照标准规程来获得。通常，会合成呈现或包含VEGFlltl最C端至少4、5、6、7、8、9、10或更多个氨基酸的肽，任选与载体偶联，并用于免疫接种。特异性多克隆抗体可通过适宜免疫吸附步骤来获得。可以容易地对单克隆抗体筛选与VEGFlltl的反应性及适宜的低交叉反应性。在VEGFlltl特异性抗体方面的低交叉反应性可以对VEGFlltl的更短片段(例如缺失VEGFlltl的C端氨基酸)和不具有VEGFlltl游离C端氨基酸的VEGF-A同等型二者来评估。各种测量方法是可获得的，而且，例如，可以使样品在足以形成抗体-VEGFlltl复合物的条件下接触对VEGFlltl特异性的抗体，然后检测复合物。VEGFlltl蛋白的存在可以以许多方式来检测，诸如通过用于测定多种组织和样品(包括血浆或血清)的Western印迹(含或不含免疫沉淀)、2维SDS-PAGE、免疫沉淀、荧光激活细胞分拣(FACS)、流式细胞术、和ELISA规程。使用此类测定法形式的一系列免疫测定技术是可获得的，参见例如美国专利N0.4，016，043,4, 424，279及4，018，653。这些包括非竞争类型的单个位点和两个位点或“三明治”/ “夹心式”测定法，以及传统的竞争性结合测定法二者。这些测定法也包括经标记抗体对靶生物标志物的直接结合。三明治测定法是最有用且最常用的测定法之一。三明治测定技术存在许多变化形式，本发明意图涵盖所有的变化形式。简言之，在一种典型的正向测定法(forward assay)中，将未标记的抗体固定化于固体基片上，并使待检测的样品与所结合分子接触。此捕捉抗体的固定化可以通过对固相的直接吸附或间接地，例如经特异性结合对，例如经链霉亲合素-生物素结合对。温育合适的一段时间后，即足以容许抗体-抗原复合体形成的一段时间，然后添加对抗原(即VEGFlltl)特异性、用能够生成可检测信号的报告分子标记的第二抗体，并温育，容许足以形成抗体-抗原-经标记抗体的另一种复合体的时间。在一个实施方案中，用报告分子标记检测抗体。洗掉任何未反应的物质，并通过观察由所述报告分子所产生的信号来测定VEGFlltl的存在。结果可以是定性的(通过对可视信号的简单观察进行)，或者可以是定量的(通过与含有已知量生物标志物的对照样品比较来进行)。在一种备选设置中，对VEGFlltl特异性的抗体固定化，而且可以使用结合VEGFlltl、任选携带报告分子的抗体来检测靶分子。正向测定法上的变化包括同时测定法(simultaneous assay),其中同时将样品和经标记的抗体两者添加至所结合的抗体。这些技术对本领域技术人员是公知的，包括会容易明白的任何微小变化。在一种典型的正向三明治测定法中，将第一抗体或是共价地或是被动地结合至固体表面。典型地，所述固体表面是玻璃或聚合物，最常用的聚合物是纤维素、聚丙烯酰胺、尼龙、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。固体支持物可以采用试管、珠、微量板盘的形式，或者适于进行免疫测定法的任何其它表面。结合方法是本领域公知的，并且一般包括交联、共价结合、或物理吸附，清洗聚合物-抗体复合体以为测试样品做好准备。然后将测试样品的等分试样添加至固相复合体，并在合适的条件(例如从室温至40° C，诸如包括端点在内的25° C和32° C之间)下培养足够的一段时间(例如2-40分钟或者过夜，如果更方便的话)，所述条件和时间适于或足以容许第一或捕捉抗体和相应抗原之间的结合。温育期后，清洗包含第一或捕捉抗体和与其结合的抗原的固相，并与结合抗原上另一表位的第二或经标记抗体一起温育。所述第二抗体连接有用于指示第二抗体对第一抗体和感兴趣抗原的复合物结合的报告分子。一种备选的竞争性方法包括:将VEGFlltl在固相上固定化，然后使固定化的靶物与样品一起暴露于对VEGFlltl特异性的抗体，该特异性抗体可以是或不是经报告分子标记的。根据靶物的量和报告分子信号的强度，可以经此类经标记抗体，使靶物分子的竞争变成可检测的。或者，使对第一抗体特异性的经标记第二抗体暴露于靶物-第一抗体复合体以形成靶物-第一抗体-第二抗体三元复合体。通过报告分子所发出的信号检测所述复合体。“报告分子”在用于本说明书时指通过其化学性质提供分析上可鉴定的信号的分子，所述信号容许结合至抗原的抗体的检测。这种类型的测定法中最常用的报告分子是酶、荧光团、或含发射性核素的分子(即放射性同位素)和化学发光分子。在酶免疫测定法的情况中，酶是偶联至第二抗体的，一般藉戊二醛或高碘酸盐进行。然而，会容易认可的是，存在极其多种不同的偶联技术，它们对技术人员是轻易可获得的。常用的酶包括辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖苷酶、和碱性磷酸酶等。一般选择与特定酶一起使用的底物以在相应酶的水解作用后产生可检测的颜色变化。合适酶的例子包括碱性磷酸酶和过氧化物酶。还可能采用产生荧光产物的荧光底物而不是上文所记录的显色底物。在所有情况中，将酶标记的抗体添加至第一抗体-分子标志物复合体，容许结合，然后洗掉过量的试剂。然后将含有合适底物的溶液添加至抗体-抗原-抗体复合体。底物会与连接至第二抗体的酶起反应，给出定性的视觉信号，其可以被进一步地定量(通常通过分光光度法)以给出存在于样品中的VEGFlltl量的指标。或者，荧光化合物(诸如荧光素和罗丹明)可以以化学方法偶联至抗体，而不改变所述抗体的结合能力。通过使用特定波长的光线光照来激发时，荧光染料标记的抗体吸收光能，在分子中诱导激发态，接着发出光线，其特征性颜色是用光学显微镜在视觉上可检测的。如在EIA中那样，容许荧光标记的抗体结合至第一抗体-分子标志物复合体。洗掉未结合的试剂后，然后使剩余的三元复合体暴露于适当波长的光线，观察到的荧光表明VEGFlltl的存在。免疫荧光和EIA技术在本领域中都是非常完善建立的。然而，还可以采用其它报告分子，诸如放射性同位素、化学发光或生物发光分子。用于检测VEGF的免疫测定法记载于例如美国专利N0.6，855，508和7，541，160及美国专利公开文本N0.2010/0255515。适用于检测VEGF的平台记载于例如EP0939319 和 EP1610129。B.试剂盒为了用于检测VEGFlltl，本发明还提供了试剂盒或制品。此类试剂盒可用于确定受试者是否会对包含VEGF拮抗剂的抗癌剂疗法产生有效响应。这些试剂盒可包括载体手段，其隔室化以接纳紧密排列的一个或多个容器，诸如管形瓶、管等，每个容器装有本发明方法中要使用的不同成分之一。例如，所述容器之一可以装有可检测标记的或可以可检测标记的探针。此类探针可以是对VEGFlltl蛋白质特异性的抗体。试剂盒还可具有装有报告手段(诸如结合至报告分子诸如酶、荧光、或放射性同位素标记物的生物素结合蛋白，例如亲合素或链霉亲合素)的容器。此类试剂盒通常会包括上文所述容器和一个或多个其它容器，其中装有从商业和使用者观点看有需要的材料，包括缓冲剂、稀释剂、滤器、针头、注射器、和印有使用说明的包装插页。容器上可存在标签，以指示该组合物用于具体的应用，而且还可指示体内或体外使用的说明，诸如上文所描述的那些。本发明的试剂盒有许多实施方案。一个典型的实施方案是一种试剂盒，包括容器、所述容器上的标签、和装在所述容器内的组合物，其中所述组合物包括特异性结合VEGFlltl的抗体，而且所述容器上的标签指示该组合物可用于评估样品中VEGFlltl的存在，且其中所述试剂盒包括说明书，其关于使用该抗体来评估特定样品类型中VEGFlltl的存在。所述试剂盒可进一步包括一套用于制备样品并将抗体应用于样品的说明书和材料。所述试剂盒可以包括一抗(primary antibody)和二抗(secondary antibody) 二者,其中所述二抗偶联有标记物，例如酶标记物。试剂盒中的其它任选成分包括一种或多种缓冲液(例如封闭缓冲液、清洗缓冲液、底物缓冲液等)、其它试剂(诸如可以被酶标记物化学改变的底物，例如色原)、表位修复液、对照样品(阳性和/或阴性对照)、对照载玻片等。试剂盒还可包括用于解释使用该试剂盒获得的结果的说明。在又一个具体的实施方案中，对于基于抗体的试剂盒，所述试剂盒可包括例如:(1)第一抗体(例如附着至固体支持物的或能够结合至固体支持物的)，其结合VEGFlltl;和
(2)第二不同抗体，其优先结合VEGF11(I。优选地，后一种抗体标记有相同报告分子。当然，在设计此类测定法时，也有可能用第一抗体交换第二抗体，反之亦然。B.治疗方法本发明的一些方法进一步包括将VEGF拮抗剂施用于VEGFlltl水平与参照样品相比升高的患者。本发明的其它实施方案提供用包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法治疗患者的方法。可调整剂量方案来提供最佳的期望响应(例如治疗响应)。例如，可施用一剂，可以在一段时间里施用多个分剂，或者可以根据治疗情况的紧急事件成比例地降低或提高剂量。根据诸如具体抗癌剂类型等因素，具有本领域普通技术的内科医师能容易地确定所需要的药物组合物的有效量和开出这样的处方。例如，内科医师可以以多剂此类抗癌剂(诸如抗VEGF-A抗体)开始，其在药物组合物中以低于实现期望的治疗效果所需要的水平的水平使用，并逐渐提高剂量，直至实现期望的效果。拮抗剂的给定剂量或治疗方案的功效可通过例如使用标准功效度量评估患者中的体征和症状来测定。在又一个实施方案中，至少两次用相同的抗癌剂，诸如抗VEGF-A抗体治疗受试者。如此，第一次和第二次拮抗剂暴露优选用相同的拮抗剂，更优选所有拮抗剂暴露用相同的拮抗剂，即头两次暴露、优选所有暴露的处理用一种类型的抗癌剂，例如结合VEGF的拮抗剂，诸如抗VEGF抗体，例如都用贝伐单抗。在本文中所列出的所有本发明方法中，所述抗癌剂(诸如结合VEGF的抗体)可以是未偶联的，诸如裸抗体，或者可以是为了进一步的功效(诸如例如延长半衰期)而偶联有另一分子的。本文中的一种优选抗癌剂是嵌合、人源化、或人抗体，例如抗VEGF抗体，优选贝伐单抗。在另一个实施方案中，VEGF拮抗剂(例如抗VEGF抗体)是对受试者施用的唯一药物。在一个实施方案中，拮抗剂是抗VEGF抗体，以每1、2、3、或4周约100或400mg的剂量施用或者以每1、2、3、或4周约1、3、5、7.5、10、15、或20mg/kg的剂量施用。剂量可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用，诸如输注。在又一个方面，在诊断步骤之后，本发明提供了确定是否要继续给诊断有癌症的受试者施用抗癌剂(例如抗VEGF抗体)的方法，包括使用成像技术诸如放射照相术和/或MRI测量第一次施用拮抗剂之后肿瘤尺寸的缩小，使用成像技术诸如放射照相术和/或MRI测量第二次施用拮抗剂之后受试者肿瘤尺寸的缩小，比较第一次和第二次时受试者的成像发现，如果第二次的得分比第一次少，那么继续施用所述拮抗剂。在又一个实施方案中，治疗方法包括检验给药步骤之后受试者对治疗的响应的步骤，用于确定该响应水平对于治疗血管发生性病症是否有效。例如，包括检验给药之后的成像(放射照相术和/或MRI)得分并与给药以前获得的基线成像结果比较的步骤，用于通过测量是否发生变化和变化了多少来确定治疗是否有效。此检验可以在给药之后以多种有安排的或未安排的时间间隔重复，用于确定任何部分或完全消退的维持。 在本发明的一个实施方案，在VEGF拮抗剂诸如抗-VEGF抗体以外没有给受试者施用其它药物来治疗癌症。
在本文中的任何方法中，抗癌剂可以与有效量的另一药剂组合施用。合适的另一药剂包括例如抗淋巴管发生剂、抗血管发生剂、抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、或其组合。所有这些另一药剂可以彼此组合或者单独与第一药物一起使用，因此表述“另一药剂”在用于本文时不意味着它是VEGF拮抗剂以外的唯一药物。如此，另一药剂不必是一种药剂，而是可以包含超过一种上述药物。本文所列的这些另一药剂通常以与上文所用相同的剂量和施用途径或者迄今所用剂量的大约1-99%使用。如果确实使用此类另一药剂，那么优选它们以低于不存在第一药物时的量使用，尤其是在第一药物的初始服药之后的后续给药中，以便消除或降低由此引起的副作用。对于本文所述复治方法，其中另一药剂以有效量与拮抗剂暴露一起施用，它可以与任何暴露一起施用，例如，只与一次暴露或者与超过一次暴露一起施用。在一个实施方案中，另一药剂与初始暴露一起施用。在另一个实施方案中，另一药剂与初始和第二暴露一起施用。在又一个实施方案中，另一药剂与所有暴露一起施用。优选的是，在初始暴露(诸如类固醇的)之后，降低或清除此类另一药剂的量以减少受试者对具有副作用的药剂诸如泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、和环磷酰胺的暴露。另一药剂的联合施用包括使用分开的配制剂或单一的药用配制剂的共施用(同时施用)，以及任一次序的序贯施用，其中优选有一段时间所有(两种或更多种)活性剂(药物)同时发挥其生物学活性。抗癌疗法以任何合适手段施用，包括胃肠外、表面、皮下、腹膜内、肺内、鼻内和/或损伤内施用。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内(1.V.)、动脉内、腹膜内或皮下施用。还涵盖鞘内施用。另外，还可合适地通过脉冲输注来施用抗癌剂，例如用剂量逐渐减少的抗癌剂。优选的是，通过静脉内或皮下，更优选通过静脉内输注来给予剂量给药。如果提供多次抗癌剂暴露，那么每次暴露可以使用相同的或不同的施用手段来提供。在一个实施方案中，每次暴露通过静脉内施用。在另一个实施方案中，每次暴露通过皮下施用给予。在又一个实施方案中，所述暴露通过静脉内和皮下施用二者给予。在一个实施方案中，以缓慢的静脉内输注而非静脉内推注或快速注射来施用抗癌剂诸如抗VEGF抗体。例如，在抗VEGF抗体的任何输注之前约30分钟施用类固醇诸如泼尼松龙或甲泼尼龙(例如静脉内约80-120毫克，更具体静脉内约100毫克)。所述抗VEGF抗体是通过例如专用线路输注的。对于多剂抗VEGF抗体暴露的初始剂，或者对于所述暴露只包括一剂的单剂，此类输注优选以约50毫克/小时的速率开始。这可逐步提高，例如，每约30分钟速率提高约50毫克/小时直至约400毫克/小时的最大值。然而，如果受试者正发生输注相关反应，那么输注速率优选降低至例如当前速率的一半，例如从100毫克/小时降低至50毫克/小时。优选的是，抗VEGF抗体此类剂(例如约1000毫克总剂量)的输注用约255分钟(4小时15分钟)完成。优选的是，受试者在开始输注前大约30至60分钟通过口接受醋氨酚/对乙酰氨基酹(例如约I克)和盐酸苯海拉明(diphenhydramine HCl)(例如约50毫克或相似药剂的等效剂量)的预防性处理。如果给予超过一次的抗VEGF抗体输注(剂)以完成整个暴露，那么优选在此输注实施方案中以高于初始输注的速率开始第二或随后的抗VEGF抗体输注，例如约100毫克/小时。此速率可以逐步提高，例如每约30分钟速率提高约100毫克/小时直至约400毫克/小时的最大值。发生输注相关反应的受试者优选将输注速率降低至该速率的一半，例如从100毫克/小时降低至50毫克/小时。优选的是，此类第二剂或随后剂的抗VEGF抗体(例如约1000毫克总剂量)的输注用约195分钟(3小时15分钟)完成。在一个优选的实施方案中，抗癌剂是抗VEGF抗体，而且以约0.4至4克的剂量施用，而且更优选的是，抗体以约0.4至1.3克的剂量、约I个月的时段内I至4剂的频率施用。还更优选的是，剂量是约500mg至1.2g，而且在其它实施方案中，是约750mg至1.lg。在此类方面，拮抗剂优选以2至3剂施用，和/或在约2至3周的时段内施用。在一个实施方案中，受试者先前从未施用用于治疗癌症的任何药物。在另一个实施方案中，受试者或患者先前曾经施用用于治疗癌症的一种或多种药物。在又一个实施方案中，受试者或患者对先前施用的一种或多种药物没有响应。受试者对其可没有响应的此类药物包括例如抗肿瘤剂、化疗剂、细胞毒剂、和/或生长抑制剂。更具体的说，受试者对其可没有响应的药物包括VEGF拮抗剂(诸如抗VEGF抗体)。在又一个方面，此类抗癌剂包括抗体或免疫粘附素，使得复治涵盖受试者以前对其没有响应的、本发明的一种或多种抗体或免疫粘附素。IV.抗癌剂治疗一旦鉴定出对VEGF拮抗剂治疗最响应或敏感的患者群，用VEGF拮抗剂单独地或与其它药物联合地进行处理对具有癌症的患者产生治疗受益。例如，此类治疗可导致肿瘤尺寸缩小或无进展存活延长。此外，用抗癌剂与至少一种另一药剂的组合进行的治疗优选导致对患者产生累加的、更优选协同的(或大于累加的)治疗受益。优选的是，在此组合方法中，另一药剂的至少一次施用与本文中的抗癌剂的至少一次施用之间的时间安排是大约一个月或更短、更优选大约两周或更短。医学领域技术人员会领会，在诊断得出患者有可能对抗癌剂有响应后对所述患者施用治疗有效量的抗癌剂的确切方式由主治医师判断。施用的模式包括剂量、与其它药剂的组合、施用的时间安排和频率、等等，可受到患者有可能对此类抗癌剂有响应的诊断以及患者的状况和历史的影响。如此，甚至预测对抗癌剂相对不敏感的诊断有病症的患者仍可受益于其治疗，特别是在与其它药剂(包括可改变患者对抗癌剂的响应性的药剂)的组合中。会以与优良医学实践一致的方式配制、剂量给药和施用包含本发明抗癌剂的组合物。在此内容中考虑的因素包括所治疗的病症的具体类型、所治疗的具体哺乳动物、患者个体的临床状况、血管发生性病症的起因、投递药剂的部位、可能的副作用、拮抗剂的类型、施药的方法、施药的日程安排、和医学从业人员知道的其它因素。要施用的抗癌剂的有效量会取决于此类考量。作为一般提议，胃肠外施用的抗癌剂的每剂有效量会在约20mg至约5000mg的范围里，通过一个或多个剂量来实现。用于抗体(诸如抗VEGF抗体)的例示性剂量方案包括每1、2、3、或 4 周 100 或 400mg，或者每 1、2、3、或 4 周施用约 1、3、5、7.5、10、15、或 20mg/kg 的一剂。该剂量可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用，诸如输注。然而，如上面指出的，对于抗癌剂的这些建议量要加以诸多治疗上的考量。在选择合适剂量和进度安排中，关键的因素是所得的结果，如上文提示的。在一些实施方案中，尽可能接近病症的首次体征、诊断、表现或出现，施用抗癌剂。抗癌剂以任何合适手段施用，包括胃肠夕卜、表面、皮下、腹膜内、肺内、鼻内和/或损伤内施用。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。还涵盖鞘内施用。另外，可合适地通过脉冲输注来施用拮抗剂，例如用剂量逐渐减少的拮抗剂。最优选地，通过静脉内注射来给予剂量给药。可以与本文中的抗癌剂一起施用如上所述的另一药剂。联合施用包括使用分开的配制剂或单一的药用配制剂的共施用，以及任一次序的序贯施用，其中优选有一段时间所有(两种或更多种)活性剂同时发挥其生物学活性。除了通过上文所述传统路径将抗癌剂施用于患者，本发明涵盖通过基因疗法进行的施用。编码抗癌剂的核酸的此类施用涵盖在表述“施用有效量的抗癌剂”中。可参见例如W01996/07321，其关注使用基因疗法来产生胞内抗体。主要有两种方法使核酸(任选包含在载体中)进入患者的细胞，即体内(in vivo)和回体(ex vivo)。对于体内投递，通常在需要拮抗剂的部位将核酸直接注射入患者。对于回体治疗，采集患者的细胞，将核酸导入这些分离的细胞，并将经过修饰的细胞直接施用于患者，或是例如装入多孔膜再植入患者(参见例如美国专利N0.4，892，538和5，283，187)。有多种技术可用于将核酸导入活细胞。这些技术根据是将核酸转移至目的宿主的体外培养的细胞还是体内细胞而有所变化。适于在体外将核酸转移入哺乳动物细胞的技术包括使用脂质体、电穿孔、显微注射、细胞融合、DEAE-右旋糖苷、磷酸钙沉淀法等。常用于回体投递基因的载体是逆转录病毒。目前优选的体内核酸转移技术包括用病毒载体(诸如腺病毒、I型单纯疱疹病毒或腺伴随病毒)和基于脂质的系统(例如，可用于脂质介导的基因转移的脂质有D0TMA、DOPE和DC-Chol)进行转染。在有些情况中希望与对靶细胞特异性的药剂一起提供核酸来源，诸如对靶细胞上的细胞表面膜蛋白特异性的抗体、针对靶细胞上受体的配体等。若采用脂质体，则可以使用与胞吞作用有关的细胞表面膜蛋白结合的蛋白质靶向和/或促进摄取，例如对特定细胞类型有向性的衣壳蛋白或其片段、针对在循环中经历内在化的蛋白质的抗体、和靶向胞内定位并延长胞内半衰期的蛋白质。受体介导的胞吞作用的技术记载于例如 Wu et al.，J.Biol.Chem.262:4429-4432(1987);及 Wagner et al., PNASUSA87:3410-3414 (1990)。基因标记和基因治疗方案记载于例如Anderson, Science256:808-813(1992);及 W01993/25673。可以将抗癌剂与至少一种别的具有抗癌特性的化合物在药物组合配制剂中组合或作为组合疗法以给药方案组合。所述药物组合配制剂或给药方案中的至少一种别的化合物优选具有对VEGF拮抗剂组合物的补充活性，使得它们彼此不会产生不利影响。所述至少一种别的化合物可以为化疗剂、细胞毒剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、抗血管发生剂、抗淋巴管发生剂、及其组合。此类分子以对指定目的有效的量适当地组合存在。含有VEGF拮抗剂(例如抗VEGF抗体)的药物组合物还可以包含治疗有效量的抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、或其组合。一方面，所述第一化合物是抗VEGF抗体，而且所述至少一种别的化合物是抗VEGF抗体以外的治疗性抗体。在一个实施方案中，所述至少一种别的化合物是结合癌细胞表面标志物的抗体。在一个实施方案中，所述至少一种别的化合物是抗HER2抗体，曲妥单抗(例如Herceptin ，Genentech, Inc.，South San Francisco, CA)。在一个实施方案中，所述至少一种别的化合物是抗 HER2 抗体，pertuzumab (Omnitarg , Genentech, Inc., South SanFrancisco，CA，参见US6，949，245)。在一个实施方案中，所述至少一种别的化合物是抗体(裸抗体或ADC)，而且所述别的抗体是第二种、第三种、第四种、第五种、第六种抗体或更多，使得此类第二种、第三种、第四种、第五种、第六种、或更多种抗体(裸的或作为ADC的)的组合有效治疗血管发生性病症。依照本发明的其它治疗方案可包括施用VEGF拮抗剂抗癌剂，而且包括但不限于放射疗法和/或骨髓和外周血移植和/或细胞毒剂、化疗剂或生长抑制剂。在一个这样的实施方案中，化疗剂是以下药剂或药剂组合，诸如例如环磷酰胺、羟基柔红霉素、阿霉素、多柔比星、长春新碱(ONCOVIN )、泼尼松龙、CHOP、CVP或C0P，或者免疫治疗剂，诸如PSCA、抗HER2 (例如HF_RC:FPT丨N_: ,0MNITARG )。组合疗法可以作为同时或序贯方案施用。当序贯施用时，可以以两次或更多次施用来施用所述组合。组合施用包括使用分开的配制剂或单一药物配制剂的共施用，和任意次序的序贯施用，其中优选有一段时间所有活性剂同时发挥其生物学活性。在一个实施方案中，使用抗VEGF抗体的治疗涉及组合施用本文中所鉴定的抗癌剂和一种、两种或更多种化疗剂或生长抑制剂，包括共施用不同化疗剂鸡尾酒样混合物。化疗剂包括紫杉烧类(诸如帕利他赛(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))和/或蒽环类抗生素。熟练从业人员可以按照制造商的说明书或凭经验确定地使用此类化疗剂的制备和剂量给药方案。此类化疗剂的制备和剂量给药方案还记载于“ChemotherapyService” , (1992)M.C.Perry 编,ffilliams&ffilkins, Baltimore, Md。任何上述共施用的药剂的合适剂量就是那些当前使用的剂量，而且可以由于新鉴定的药剂和其它化疗剂或治疗的联合作用(协同作用)而降低。组合疗法可以提供“协同作用”并且证实是“协同性”的，即当一起使用活性组分时所实现的效果 大于分开使用所述化合物时所产生的效果之和。当活性组分为如下情况时可以获得协同效应:(I)共同配制和施用或在合并的单位剂量配制剂中同时投递；(2)作为分开的配制剂交替或平行投递；或(3)通过一些其它方案。当在交替疗法中投递时，在序贯施用或投递所述化合物时，例如通过不同注射器中的不同注射，可以获得协同效应。一般而言，在交替疗法中，序贯地，即依序地施用每种活性组分的有效剂量，而在组合疗法中，一起施用两种或更多活性组分的有效剂量。对于疾病的预防或治疗，所述别的治疗剂的适宜剂量将取决于待治疗疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重程度和进程、施用VEGF拮抗剂和别的药剂是出于预防还是治疗目的、先前的疗法、患者的临床病史和对VEGF拮抗剂和别的药剂的响应、及主治医师的判断。合适的是，一次性或通过一系列治疗将VEGF拮抗剂和别的药剂施用于患者。VEGF拮抗剂通常如上文所述施用。根据疾病的类型和严重程度，施用于患者的初始候选剂量是约20mg/m2至600mg/m2别的药剂，例如或是通过一次或多次分开施药或是通过连续输注。根据上文所述因素，典型日剂量的范围可以是约20mg/m2、85mg/m2、90mg/m2、125mg/m2、200mg/m2、400mg/m2、500mg/m2或更多。对于持续数天或更长的重复施药，根据状况，持续治疗直至疾病症状发生期望的抑制。如此，可对患者施用约2011^/1112、8511^/1112、9011^/1112、12511^/1112、20011^/m2、400mg/m2、500mg/m2、600mg/m2 (或其任意组合)的一剂或多剂。这些剂量可间歇施用，例如每周或每两、三、四、五、或六周(例如使得患者接受约2剂至约20剂，例如约6剂别的药剂)。可施用一剂较高的初始加载剂量，后续一剂或多剂较低剂量。然而，其它剂量方案也可能是有用的。这种疗法的进程易于通过常规技术和测定法来监测。V.药物配制剂依照本发明使用的拮抗剂的治疗用配制剂通过将具有期望纯度的拮抗剂与任选的药剂学可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合，以冻干配制剂或水溶液的形式制备供贮存。关于配制剂的一般信息参见例如 Gilman et al.(eds.) (1990), The PharmacologicalBases of Therapeutics,8th Ed.,Pergamon Press;Gennaro (ed.)，Remington’sPharmaceutical Sciences, 18th Ed., (1990), Mack PublishingC0.，Eastori, Pennsylvania;Avis et al.(eds.) (1993)Pharmaceutical DosageForms:Parenteral Medications Dekker, New York;Lieberman et al.(eds.) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets, Dekker, New York;及 Lieberman et al.(eds.)(1990), Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems, Dekker, New York;KennethA.Walters(ed.)(2002)Dermatological and Transdermal Formulations(Drugs and thePharmaceutical Sciences)，volI19，Marcel Dekker。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐齐IJ(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵、苯索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲 ));低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂,诸如EDTA ;糖类,诸如鹿糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反荷离子,诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEEN 、PLUR0NICS 或聚乙二醇(PEG)。例示性的抗VEGF抗体配制剂记载于美国专利N0.6，884，879。在某些实施方案中，抗VEGF抗体在单次使用管形瓶中以25mg/mL配制。在某些实施方案中，在240mg α，α-海藻糖二水合物、23.2mg钠的磷酸盐(一碱基的，一水合物)、4.8mg钠的磷酸盐(二碱基的，无水的)、1.6mg聚山梨酯20、和注射用水(USP)中配制IOOmg抗VEGF抗体。在某些实施方案中，在960mga，a -海藻糖二水合物、92.8mg钠的磷酸盐(单个碱基的，一水合物)、19.2mg钠的磷酸盐(二碱基的，无水的)、6.4mg聚山梨酯20、和注射用水(USP)中配制400mg抗VEGF抗体。适于皮下施用的冻干配制剂记载于例如美国专利N0.6，267，958 (Andya et al.)。此类冻干配制剂可以用合适的稀释剂重建至高蛋白质浓度，重建的配制剂可皮下施用于本文中待治疗的哺乳动物。还涵盖拮抗剂的结晶形式。参见例如US2002/0136719A1 (Shenoy et al.)。本文中的配制剂还可含有超过一种活性化合物(上文提到的另一药剂)，优选那些活性互补且彼此没有不利影响的。此类治疗药物的类型和有效量取决于例如配制剂中存在的VEGF拮抗剂的量和类型，以及受试者的临床参数。优选的此类另一药剂如上所述。活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)、在胶状药物投递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)、或在粗滴乳状液中。此类技术公开于例如 Remington’s Pharmaceutical Sciences,第 16 版，Osol, A.Ed.(1980)。可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有所述拮抗剂的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质是定型产品的形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利N0.3，773，919)、L-谷氨酸与L-谷氨酸Y乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯共聚物、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如LUPRON DEP0TJ (由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这可容易地通过使用无菌滤膜过滤来实现。V1.试剂盒为了用于检测VEGFlltl，本发明提供了试剂盒或制品。此类试剂盒可用于确定患有癌症的受试者是否会对包含VEGF拮抗剂(包括例如抗VEGF抗体，诸如贝伐单抗)的抗癌剂疗法产生有效响应。这些试剂盒可包括载体手段，其隔室化以接纳紧密排列的一个或多个容器，诸如管形瓶、管等，每个容器装有本发明方法中要使用的不同成分之一。例如，所述容器之一可以装有特异性结合VEGFlltl的化合物。此类试剂盒通常会包括上文所述容器和一个或多个其它容器，其中装有从商业和使用者观点看有需要的材料，包括缓冲剂、稀释剂、滤器、针头、注射器、和印有使用说明的包装插页。容器上可存在标签，以指示该组合物用于具体的应用，而且还可指示体内或体外使用的说明，诸如上文所描述的那些。本发明的试剂盒有许多实施方案。一个典型的实施方案是一种试剂盒，包括容器、所述容器上的标签、和装在所述容器内的组合物，其中所述组合物包括特异性结合VEGFlltl的化合物，而且所述容器上的标签指示该组合物可用于检测VEGFlltl,且其中所述试剂盒包括说明书，其关于使用该化合物来检测VEGF11(I。所述试剂盒可进一步包括一套用于制备并使用该化合物的说明书和材料。试剂盒中的其它任选成分包括一种或多种缓冲液(例如稀释缓冲液等)、其它试剂(诸如载体，例如、葡聚糖/右旋糖酐、清蛋白)。试剂盒还可包括用于解释使用该试剂盒获得的结果的说明。
实施例提供下述实施例以例示但非限制当前要求保护的发明。实施例1:在AVADO试验(B017708)，将具有未治疗的局部晚期、复发性或转移性HER-2阴性乳腺癌的患者随机分至多西他赛100mg/m2加贝伐单抗每3周7.5mg/kg (n=248)、贝伐单抗每 3 周 15mg/kg (n=247)或安慰剂(n=241 )。参见 Miles, J.Clin.0ncol., 24May2010 (电子出版)。
自这项试验中的396名患者可得到血浆基线样品。一项关于与血管发生和肿瘤发生有关的生物标志物的状态的调查揭示了相对于在整个生物标志物患者群体中测定的对照水平，三种生物标志物的表达水平与改善的治疗参数有关。特别地，相对于在整个生物标志物患者群体中测定的对照水平，展现更高VEGF-A表达水平的患者响应将贝伐单抗添加至多西他赛疗法而表现出延长的无进展存活。相对于在整个生物标志物患者群体中测定的对照水平，展现更高VEGFR2表达水平的患者响应将贝伐单抗添加至多西他赛疗法而表现出延长的无进展存活。还有，相对于在整个生物标志物患者群体中测定的对照水平，展现更高VEGF-A和VEGFR2组合表达水平的患者响应将贝伐单抗添加至多西他赛疗法而表现出延长的无进展存活。另外，相对于在整个患者群体中测定的对照水平，展现更高VEGF-A和PLGF组合表达水平的患者响应将贝伐单抗添加至多西他赛疗法而表现出延长的无进展存活。患者和免疫化学方法总共736名患者参与了 B017708研究，而且可得到来自396名参与者的血浆样品进行生物标志物分析。表IA和表IB中提供生物标志物分析中的396名患者和不可能进行生物标志物分析的剩余患者的基线特征。表IA:基线特征
权利要求
1.一种鉴定会受益于包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法治疗的患者的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFlltl水平处于或高于参照水平指示该患者会受益于该抗癌疗法的治疗。
2.一种预测患有癌症的患者对包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法治疗的响应性的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFnc^K平处于或高于参照水平指示该患者更有可能响应该抗癌疗法的治疗。
3.一种用于确定有癌症的患者会展现出受益于包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的可能性的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFlltl水平处于或高于参照水平指示该患者具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。
4.一种优化包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗功效的方法，该方法包括:测定自患者获得的样品中VEGFlltl的表达水平，其中自患者获得的样品中的VEGFlltl水平处于或高于参照水平指示该患者具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。
5.一种用于治疗患者中的癌症的方法，该方法包括:确定自患者获得的样品具有处于或高于参照样品中VEGFlltl水平的VEGFlltl水平，并对所述患者施用有效量的包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法，由此该癌症得到治疗。
6.权利要求1至5任一项的方法，其中所述癌症选自下组:结肠直肠癌，成胶质细胞瘤，肾癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，和肺癌。
7.权利要求1至5任一项的方法，其中所述自患者获得的样品选自下组:全血，血浆，血清，及其组合。
8.权利要求1至5任一项的方法，其中所述VEGFlltl水平是蛋白质水平。
9.权利要求8的方法，其中所述蛋白质水平是通过测量血浆蛋白质水平而测定的。
10.权利要求9的方法，其中自患者获得的样品中VEGFlltl的血浆水平处于或高于参照样品中的VEGFlltl水平指示该患者会受益于该抗癌疗法、更有可能响应该抗癌疗法、或具有升高的受益于该抗癌疗法的可能性。
11.权利要求1至4任一项的方法，进一步包括对所述患者施用有效量的包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法。
12.权利要求11的方法，其中所述VEGF-A拮抗剂是抗体。
13.权利要求12的方法，其中所述抗体是贝伐单抗。
14.权利要求11的方法，进一步包括施用有效量的选自下组的第二抗癌疗法:细胞毒齐[J，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。
15.权利要求14的方法，其中所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。
16.权利要求14的方法，其中所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。
17.权利要求14的方法，进一步包括施用有效量的选自下组的第三抗癌疗法:细胞毒齐[J，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。
18.权利要求17的方法，其中所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。
19.权利要求17的方法，其中所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。
20.权利要求5的方法，其中所述VEGF-A拮抗剂是抗体。
21.权利要求20的方法，其中所述抗体是贝伐单抗。
22.权利要求5的方法，其中所述抗癌疗法进一步包括施用有效量的选自下组的第二抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。
23.权利要求19的方法，其中所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。
24.权利要求19的方法，其中所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。
25.权利要求19的方法，其中所述抗癌疗法进一步包括施用有效量的选自下组的第三抗癌疗法:细胞毒剂，化疗剂，生长抑制剂，和抗血管发生剂，及其组合。
26.权利要求25的方法，其中所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂并行施用。
27.权利要求25的方法，其中所述第三抗癌疗法、所述第二抗癌疗法和所述VEGF-A拮抗剂序贯施用。
28.一种用于确定患者是否会受益于包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗的试剂盒，该试剂盒包括:能够特异性结合VEGFlltl的化合物套组，和使用所述化合物来测定至少一种生物标志物的水平以预测患者对包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗的响应性的说明，其中VEGFlltl水平处于或高于参照样品中的VEGFlltl水平指示该患者会受益于包含VEGF-A拮抗剂的抗癌疗法的治疗。
29.权利要求28的试剂盒，其中所述化合物是蛋白质。
30.权利要求29的试剂盒，其中所述蛋白质是抗体。
31.一种用于检测VEGFlltl的水平的化合物套组，该套组包括能够特异性结合VEGFlltl的至少一种化合物。
32.权利要求31的化合物套组，其中所述化合物是蛋白质。
33.权利要求32的化合物套组，其中所述蛋白质是抗体。
全文摘要
本发明提供用于鉴定会受益于包含VEGF拮抗剂的抗癌疗法治疗的患者的方法。本发明还提供用于监测患者对抗癌疗法的响应的方法。本发明还提供用于所述方法的试剂盒和制品。
文档编号G01N33/574GK103180736SQ201180044979
公开日2013年6月26日 申请日期2011年7月18日 优先权日2010年7月19日
发明者H.安德烈斯, S.L.德哈斯, R.埃利奥特, J.卡尔, Y-J.G.孟, G.D.普洛曼, S.谢勒, N.怀尔德 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司