专利名称：牛乳免疫球蛋白IgG的免疫比浊定量检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种检测试剂盒。
背景技术：
免疫球蛋白IgG作为牛初乳中一种非常重要的免疫因子，其含量与其它生 物活性物质含量具有一定的正相关性，其含量的多少是衡量牛初乳及其产品优 劣的一个重要指标。免疫球蛋白IgG也是免疫乳及其制品的主要功能成分，其 含量是免疫乳及其制品质量好坏的最重要标准。对牛乳免疫球蛋白IgG的检测 还可以评估常乳中是否掺有牛初乳以及判断牛乳是否掺假。因而，牛乳免疫球 蛋白的检测对于乳制品的质量控制有着非常重要的意义。
为了保证初乳、免疫乳以及常乳制品的质量，我们往往需要在产品质量控 制的各个环节加强对乳样中免疫球蛋白水平的准确检测。比较上述不同的牛乳 免疫球蛋白IgG检测方法，可以发现常规的免疫检测方法如免疫单向扩散、免 疫双向扩散以及火箭免疫电泳，这些方法都具有操作简便、设备要求低的优点， 但存在着检测时间长、精确性差的缺点。胶体金免疫层析技术虽然可以快速检 测，但只局限于定性或半定量检测，无法达到精确检测的目的。而高效液相和 毛细管电泳虽然能够快速、精确检测，但对设备和操作人员的要求极高，不适 合常规工厂和普通试验室分析，普及较为困难。

实用新型内容
本实用新型的目的是为解决现有牛乳及其制品中免疫球蛋白IgG含量的检 测时间长、精确性差的问题，提供一种牛乳免疫球蛋白IgG的免疫比浊定量检 测试剂盒。
本实用新型由免疫球蛋白试剂瓶、免疫球蛋白抗体试剂瓶、磷酸盐缓冲液 试剂瓶、聚乙二醇试剂瓶、盒体和固定板组成，固定板设置在盒体内，固定板 上设有第一瓶孔、第二瓶孔、第三瓶孔和第四瓶孔，免疫球蛋白试剂瓶设置在 第一瓶孔内，免疫球蛋白抗体试剂瓶设置在第二瓶孔内，磷酸盐缓冲液试剂瓶 设置在第三瓶孔内，聚乙二醇试剂瓶设置在第四瓶孔内。本实用新型的优点是本实用新型利用免疫球蛋白试剂瓶、免疫球蛋白抗 体试剂瓶、磷酸盐缓冲液试剂瓶和聚乙二醇试剂瓶中的试剂，对牛乳及其制品 中免疫球蛋白含量进行快速定量检测，检测时间短、检测精确，而且操作简便、 对设备要求不高，更适合实际生产的要求。


图1是本实用新型的整体结构示意图。
具体实施方式

具体实施方式
一结合图1说明本实施方式，本实施方式由免疫球蛋白试 剂瓶l、免疫球蛋白抗体试剂瓶2、磷酸盐缓冲液试剂瓶3、聚乙二醇试剂瓶4、
盒体5和固定板6组成，固定板6设置在盒体5内，固定板6上设有第一瓶孔 6-1、第二瓶孔6-2、第三瓶孔6-3和第四瓶孔6-4，免疫球蛋白试剂瓶1设置在 第一瓶孔6-l内，免疫球蛋白抗体试剂瓶2设置在第二瓶孔6-2内，磷酸盐缓冲 液试剂瓶3设置在第三瓶孔6-3内，聚乙二醇试剂瓶4设置在第四瓶孔6-4内。 免疫球蛋白试剂瓶1为棕色塑料瓶，瓶内封闭包装着按固定重量和准确称量的 免疫球蛋白IgG标准品，免疫球蛋白IgG标准品的质量为10mg，此为试剂I ， 4'C保存，用于标准曲线的绘制；免疫球蛋白抗体试剂瓶2为白色玻璃瓶，瓶内 封闭包装着固定重量的免疫球蛋白IgG抗体粉状物，此为试剂II， 4'C保存；磷 酸盐缓冲液试剂瓶3为白色塑料瓶，瓶内封闭包装着按固定重量和配比配成的 磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的浓度为0.01mol/L，磷酸盐缓冲液的pH值为7.4， 磷酸盐缓冲液体积为500 mL，此为试剂m， 4T:保存；聚乙二醇试剂瓶4为白 色塑料瓶，瓶内封闭包装着按固定重量和准确称量的聚乙二醇，聚乙二醇的质 量为15g，此为试剂IV， 4'C保存。将上述四个试剂瓶分别放入第一试剂瓶孔6-1、 第二试剂瓶孔6-2、第三试剂瓶孔6-3和第四试剂瓶孔6-4中，用盒体5上的盒
盖5-i盖好加封。试剂i、试剂n、试剂iv为固体，试剂m为液体。
具体实施方式
二结合图1说明本实施方式，本实施方式的盒体5的材质 为硬纸或薄塑料板。这种材质具有重量轻、携带方便的特点。
具体实施方式
三结合图1说明本实施方式，本实施方式的固定板6的材 质为硬纸或塑料泡沫板。这种材质具有重量轻、携带方便的特点。
本实用新型的使用方法一、 试剂I 、 II、 III、 IV的配制:
1、 聚乙二醇比浊缓冲液制备从试剂盒中取出试剂ni，加入到试剂iv中，
配制成4%的溶液，称为聚乙二醇比浊缓冲液，然后4'C保存。
2、 免疫球蛋白IgG标准贮备液制备从试剂盒中取出试剂I ，向试剂I中 加入10mL的试齐l迈I，进行混匀，其浓度为1.0mg/mL，分装后置于-20。C冷冻保
藏备用。
3、 免疫球蛋白IgG标准系列溶液制备取上述制备好的免疫球蛋白IgG标 准忙备液，用聚乙二醇比浊缓冲液稀释成浓度分别为Omg/mL、 0.1mg/mL、 0.2 mg/mL、 0.3mg/mL、 0.4mg/mL、 0.5mg/mL、 0.6mg/mL、 0.7mg/mL的免疫球蛋 白IgG标准液，临用时配制。
4、 免疫球蛋白IgG抗体贮备液制备将试剂II抗体粉剂溶于2mL的试剂 III中，每管分装成100pL，置-2(TC冷冻保藏备用。
5、 免疫球蛋白IgG抗体稀释液取100^的免疫球蛋白IgG抗体贮备液， 加入2.9mL的聚乙二醇比浊缓冲液，将抗体稀释30倍，临用时配制。
二、 检测步骤
1、 待检样品的处理
(1) 液态乳样取液态牛乳试样进行离心30分钟，去上层脂肪，然后量
取10mL脱脂牛乳试样，用聚乙二醇比浊缓冲液稀释至1000 2000mL，混和均
匀后备用。
(2) 固态乳样:将各种类型的固态牛乳样粉碎后，称取O.lg(精确至O.OOlg) 试样，采用聚乙二醇比浊缓冲液稀释至50 100mL，混匀，备用(待测乳样不 含脂肪成分)；如果待测乳样含有脂肪成分，需先进行溶解、离心、去除脂肪， 接着操作同(1)。
2、 标准曲线的绘制 一
取8个反应管，在各反应管中加入250pL的免疫球蛋白IgG抗体稀释液， 再取lO^iL的免疫球蛋白IgG浓度为0 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3mg/mL、 0.4mg/mL、 0.5mg/mL、 0.6mg/mL、 0.70 mg/mL的标准系列溶液加入各反应管 中，混和均匀后，置于37。C的水浴中反应40分钟，反应结束后，将各管反应 液在生化分析仪上，选择波长为340nm，以聚乙二醇比浊缓冲液进行调零，测定不同标准浓度免疫球蛋白IgG的光密度值，绘制标准曲线。
3、 待检样品的测定-
向各反应管中加入25(VL的免疫球蛋白IgG抗体稀释液，再取10|iL待测 样品加入各反应管中，混和均匀后，置于37X:的水浴中反应40分钟。反应结束 后，将各管反应液在生化分析仪上，选择波长为340nm，测定其光密度值，根 据标准曲线，计算出待测样品中的免疫球蛋白IgG的含量。
4、 空白实验-
与待测样品浓度相同的正常脱脂乳为空白样品，采用完全相同的测定步骤 进行平行操作。
5、 结果计算
j一 cxFxlOO —腦IOOO
式中-
X—待测样品中免疫球蛋白IgG的含量，单位为克每百克(g/100g)或毫 克每百毫升(mg/100mL);
m—待测样品的质量，单位为克(g)或毫升(mL); c一被测液中免疫球蛋白IgG的含量，单位为毫克每毫升(mg/mL); V—待测样品定容的体积，单位为毫升(mL)。 计算结果保留两位有效数字。
权利要求1、一种牛乳免疫球蛋白IgG的免疫比浊定量检测试剂盒，它由免疫球蛋白试剂瓶(1)、免疫球蛋白抗体试剂瓶(2)、磷酸盐缓冲液试剂瓶(3)、聚乙二醇试剂瓶(4)、盒体(5)和固定板(6)组成，其特征在于固定板(6)设置在盒体(5)内，固定板(6)上设有第一瓶孔(6-1)、第二瓶孔(6-2)、第三瓶孔(6-3)和第四瓶孔(6-4)，免疫球蛋白试剂瓶(1)设置在第一瓶孔(6-1)内，免疫球蛋白抗体试剂瓶(2)设置在第二瓶孔(6-2)内，磷酸盐缓冲液试剂瓶(3)设置在第三瓶孔(6-3)内，聚乙二醇试剂瓶(4)设置在第四瓶孔(6-4)内。
专利摘要牛乳免疫球蛋白IgG的免疫比浊定量检测试剂盒，它涉及一种检测试剂盒。本实用新型为解决现有牛乳及其制品中免疫球蛋白IgG含量的检测时间长、精确性差的问题。本实用新型固定板设置在盒体内，固定板上设有第一瓶孔、第二瓶孔、第三瓶孔和第四瓶孔，免疫球蛋白试剂瓶设置在第一瓶孔内，免疫球蛋白抗体试剂瓶设置在第二瓶孔内，磷酸盐缓冲液试剂瓶设置在第三瓶孔内，聚乙二醇试剂瓶设置在第四瓶孔内。本实用新型利用免疫球蛋白试剂瓶、免疫球蛋白抗体试剂瓶、磷酸盐缓冲液试剂瓶和聚乙二醇试剂瓶中的试剂，对牛乳及其制品中免疫球蛋白IgG含量进行快速检测，检测时间短、检测精确，而且操作简便。
文档编号G01N33/536GK201242547SQ200820090698
公开日2009年5月20日 申请日期2008年8月20日 优先权日2008年8月20日
发明者姜瞻梅, 杨丽杰, 波 田 申请人:东北农业大学