专利名称：一种酸性橙Ⅱ快速检测卡的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种酸性橙II快速检测卡，是一种检测酸性橙II的检测器具，属于食品中违法添加非食用物质检测技术领域。
背景技术：
酸性橙II是一种偶氮类酸性工业染料，又名酸性金黄II、金橙II或酸性艳橙GR，俗名金黄粉。溶于水，乙醇。主要用于蚕丝、羊毛的染色，也可染皮革、纸张、锦纶，能印花，还可用作指示剂。拨染性、勻染性好，染色牢度较差，适用于色泽鲜艳度高的绒线染色。染色时遇铜离子趋向红暗，遇铁离子色泽浅暗。偶氮类染料本身无任何直接的致癌作用，但是在体内还原分解，可形成芳香胺化合物，芳香胺在体内经过代谢活动后与靶细胞作用可能使DNA发生变化，成为人体病变的诱发因素，对人体和动物有潜在的致癌性和致突变性。由于其致癌性和致突变性，世界上很多国家对酸性橙II的使用实施了严格的规定。在我国，酸性橙II禁止被用作食品添加剂。酸性橙II属非食用色素，食品中不允许加入。但是由于酸性橙II色泽鲜艳，着色稳定、价廉等特点，一些不法商贩为了牟取暴利将其用于食品生产和加工，我国市售和出口海外的蜜饯、豆制品、卤制品、辣椒面、红壳瓜子等均被检出过含有酸性橙II等类似合成非食用色素，严重危害了消费者身体健康，并且常常导致出口食品被迫就地销毁。所以酸性橙II 检测方法的开发刻不容缓。目前，检测食品中违法添加的酸性橙II的主要方法有高效液相色谱法及液质联用等进行定性和定量的分析。这些方法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此建立一种准确可靠又快速方便的检测食品中违法添加的酸性橙II的分析方法是非常必要的。本实用新型拟发明一种基于小分子物质酸性橙II偶联蛋白质后而具有抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金或乳胶颗粒标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测商制熟食、辣椒面、饮料等样品中的酸性橙 II。根据检测卡样品检测线和质控线的有无显色来判定卤制熟食、辣椒面、饮料等样品中的酸性橙II含量。反应是利用酸性橙II蛋白质偶联物抗原性而建立的一种检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速， 无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在超市、家庭、车间等实地进行测定。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，灵敏度高，准确率大。
发明内容本实用新型的目的在于提供一种能检测酸性橙II的检测器具，直接应用免疫学的方法检测卤制熟食、辣椒面、饮料等样品中酸性橙II的含量，克服现有色谱法检测的操作繁琐等缺点，建立基于免疫学特异性的检测方法。本实用新型的技术方案一种酸性橙II快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4 ；测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜或乳胶颗粒膜7、硝酸纤维素膜6、 和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜 9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜7 ；胶体金膜为含抗酸性橙II抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，或乳胶颗粒膜为含抗酸性橙II抗体乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含酸性橙 II蛋白质偶联物的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。采用上述酸性橙II快速检测卡，检测样品为卤制熟食、辣椒面或饮料等，处理方法如下饮料样品将购买的饮料如橙汁样品用pH为8.0，含0.05%吐温-20，浓度为 0. lmol/L的磷酸盐缓冲液(PBST)按1 1稀释，得到待测样品。卤制熟食、辣椒面样品称取5g样品，研磨粉碎，加入上述pH8. 0、PBST溶液10mL， 振摇30min，膜过滤后用于测定。当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阴性，表示被检测样品中酸性橙II含量未超标。当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中酸性橙II含量超标。当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。本实用新型的有益效果本实用新型的优点是能检测卤制熟食、辣椒面、饮料等样品中含有的酸性橙II，易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

图1酸性橙II快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条，3、 检测窗孔，4、加样孔。图2测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带，11、 质控带。图3酸性橙II快速检测卡的检测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜， 7、胶体金膜或乳胶颗粒膜，8、样品垫，9、吸水膜。
具体实施方式
本实用新型结合具体实施例参见附图进一步说明如下实施例1一种酸性橙II快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm， 厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。[0022]测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2. 5mm。测试条 2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0. 5mm,长60mm，宽4mm ；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0. 5mm,长20_25mm，宽4mm。硝酸纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2，二条显示印迹带中，一条是检测带10，含酸性橙II蛋白质偶联物；另一条是质控带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5 一端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6 —端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部， 两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜7，胶体金膜为含抗酸性橙II抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，或乳胶颗粒膜为含抗酸性橙II抗体乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜。胶体金膜或乳胶颗粒膜7厚0. 5-0. 8mm,长5mm，宽4mm。样品垫8厚0. 5-0. 8mm,长20mm，宽4mm。 吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,长16_20mm，宽4mm。胶体金膜或乳胶颗粒膜7、样品垫8及吸水膜 9与硝酸纤维素膜搭接长度为l_2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。本实用新型酸性橙II检测卡用于检测卤制熟食、辣椒面、饮料等样品中的酸性橙 II的检测。实施例2样品的处理方法如下饮料样品将购买的饮料如橙汁样品用pH为8. 0，含0. 05%吐温-20，浓度为 0. lmol/L的磷酸盐缓冲液(PBST)按1 1稀释，得到待测样品。卤制熟食、辣椒面样品称取5g样品，研磨粉碎，加入上述pH8. 0、PBST溶液10mL， 振摇30min，膜过滤后用于测定。使用酸性橙II快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入酸性橙II快速检测卡的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜或乳胶颗粒膜7所含的抗酸性橙II单克隆抗体胶体金或乳胶颗粒标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结果。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金或乳胶颗粒标记的抗体，在测试带上分别与含酸性橙II蛋白质偶联物，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有待检酸性橙II存在，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会与检测带所含的酸性橙II蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应的结果有以下3种情况1、当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中酸性橙II含量未超标。2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说明被检测样品中酸性橙II含量超标。3、当检测带10和质控带11均不显色，则表明检测试条已失效。
权利要求1. 一种酸性橙II快速检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状的检测卡外壳(1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4);测试条(2)是由支承背板(5) 上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜或乳胶颗粒膜(7)、硝酸纤维素膜(6)、 和吸水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜 (7)；硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含酸性橙II蛋白质偶联物的检测带(10)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(11)，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
专利摘要一种酸性橙Ⅱ快速检测卡，属于食品中违法添加的非食用物质检测技术领域。本酸性橙Ⅱ快速检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜或乳胶颗粒膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗酸性橙Ⅱ抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，或乳胶颗粒膜为含抗酸性橙Ⅱ抗体乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有两条检测带，一条为含酸性橙Ⅱ蛋白质偶联物的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本实用新型优点是应用免疫学的方法直接检测卤制熟食、辣椒面、饮料等样品的酸性橙Ⅱ含量。本酸性橙Ⅱ快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。
文档编号G01N33/558GK202066858SQ20112017569
公开日2011年12月7日 申请日期2011年5月30日 优先权日2011年5月30日
发明者吴文晔, 周坚, 熊晓芳 申请人:无锡安迪生物工程有限公司