专利名称：羟丙基-β-环糊精的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及利用高效液相色谱法对羟丙基-β -环糊精进行质量控制的方法，即测定杂质β-环糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的方法。
背景技术：
羟丙基-β -环糊精(HP- β -⑶)是目前备受瞩目的β _环糊精(β -⑶)衍生物之一，其水溶性高、肾毒性低，不参与生物体内代谢，也不蓄积，基本上没有溶血性和刺激性。 ΗΡ-β -CD可以增加难溶性药物的水溶性、增加药物稳定性和生物利用度、促进药物释放、降低药物毒副作用等。在药物研究领域具有广泛应用。对于ΗΡ-β -CD，目前广泛采用的合成方法是利用β -CD与环氧丙烷反应，产物中的杂质主要是残留的β _⑶和副产物1，2-丙二醇。欧洲药典第6版第1版增补版(ΕΡ6. 1)和美国药典/国家处方集(USP32-NF27) 记载的HP- β -⑶的质量控制方法，采用长度300mm，直径3. 9mm的苯基硅烷键合硅胶柱，流动相为水，示差折光检测器检测。该色谱柱作为一种专用色谱柱，价格昂贵，售价约为5500 元。在35°C条件下以纯水作流动相，在1.5mL/min的流速下，色谱柱的柱效降低较快。柱效过低则无法实现对各组分的有效分离和检测，造成色谱柱寿命缩短，检测成本升高。马学琴等对欧洲药典的方法进行了改进，采用普通的苯基柱(长度250mm，直径 4.6mm)，以甲醇-水(1 10)作流动相，示差折光检测器(马学琴等，羟丙基-β -环糊精的杂质检测，中国医药工业杂志，2006，37(1) :36-38)。由该文献第37页的

图1可以看到， β -CD与1，2-丙二醇的色谱峰的峰型对称性较差，1，2-丙二醇与前面杂质峰不能达到有效分离，且不能同时检测⑶与1，2-丙二醇之间的未知杂质。上述两种色谱方法，检测了 ΗΡ-β-⑶中的两种主要杂质，而在经过合成得到的 HP-β-CD中，还含有其他杂质，ΕΡ6. 1和马学琴的方法均未明确其是何物质，ΕΡ6. 1仅仅是将总杂质的含量限定为1.0%。药物中杂质的存在会影响药品稳定性，增加毒副作用，对人体健康产生不利影响。 对于广泛应用于制药领域的HP-β -CD，对未知杂质的定性有利于更好的控制ΗΡ-β -CD的质量，从而保证在其应用于药品中后获得更加安全有效的产品。

发明内容
本发明的目的是提供一种简便快捷、专属性好、灵敏度高的HP-β -CD的质量控制方法。采用苯基硅烷键合硅胶色谱柱，以乙腈/水为流动相，检测器为示差折光检测器或蒸发光散射检测器。当采用示差折光检测器时(称为方法一)，可以同时检测3种杂质 β -⑶、1，2-丙二醇和1，2_丙二醇聚合物，实现了 3种杂质与HP-β -⑶的有效分离和杂质的同时定量检测。现有技术没有关于1，2-丙二醇聚合物检测方法的任何报道；采用蒸发光散射检测器时(称为方法二)，可以检测β-CD。
方法一HP- β -⑶的质量控制方法，利用高效液相色谱法测定HP- β -⑶中β -⑶、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量，它包括(1)、色谱条件与系统适用性试验用苯基硅烷键合硅胶为填充剂 (4. 6X150-250mm)；流动相乙腈-水体积比0-20 100-80，不包括0 100，优选为
2-7 98-93，更好为4 96 ；示差折光检测器；(2)、对照品溶液的制备精密称取β-⑶和1，2-丙二醇对照品，配成二者浓度分别在0. 06-1. 5和0. 08-2. 5mg/mL的对照品溶液，二者浓度优选为0. 1-1. 5mg/mL和 0. 1-2. 5mg/mL,更好的浓度分别为 0. 3mg/mL 和 0. 5mg/mL ；(3)、供试品溶液的制备精密称取HP-β-⑶，配成浓度为10-300mg/mL的供试品溶液，优选为50-200mg/mL，更好为100mg/mL ；(4)、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-100 μ L，优选为 5-50 μ L，更好为各20 μ L，注入液相色谱仪，测定，按外标法以峰面积计算β -⑶、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量。柱温20-40°C;流速0. 5-2. OmL/min ；各杂质的定性分别配置⑶对照品溶液和1，2_丙二醇对照品溶液，用来确定样品溶液中杂质⑶和1，2_丙二醇的色谱峰的位置，分别见附图1-3。在β-⑶和1， 2_丙二醇的峰之间还存在其他未知杂质峰。采用以下两种方法对未知杂质进行了定性1、利用液相色谱相对保留时间定性色谱条件用苯基硅烷键合硅胶为填充剂 (4. 6 X 250mm)；柱温30°C ；流动相乙腈-水体积比为4 96 ；流速1. OmL/min ；示差折光检测器；分别精密吸取对样品溶液与聚丙二醇200溶液各20μ L注入液相色谱仪。样品中的未知杂质与聚丙二醇200溶液中部分主峰保留时间基本一致。由此确定样品溶液得到的色谱图中，⑶和1，2_丙二醇之间的杂质峰为1，2_丙二醇聚合物。2、利用液相色谱-质谱定性样品中的未知杂质与聚丙二醇200溶液部分主峰保留时间基本一致，提取未知杂质峰保留时间处的质量数信息，与聚丙二醇200溶液中部分主峰的质量数信息一致。结合产品工艺特点，确定色谱图中⑶和1，2_丙二醇之间的未知杂质峰为1，2-丙二醇聚合物。以1，2-丙二醇为对照品，按外标法以峰面积计算1，2-丙二醇聚合物的含量。以下的1-6为方法一的方法学验证试验，色谱条件为苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4. 6X 250mm)；柱温30°C ；流动相乙腈-水体积比为5 95 ；流速lmL/min ；示差折光检测器；进样量为20 μ L。1、专属性试验专属性是指指在样品介质在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下， 采用的方法能正测定出被测物的特性。由附图5可见，样品经强酸、强碱、强氧化剂、高温、光照破坏试验，各杂质峰与
3-^、1，2-丙二醇和1，2-丙二醇聚合物实现了良好的分离，可以满足对三者进行定量检测。2、检测限
5
检测限是指试样中被测物能被检测出的最低量。将对照品溶液稀释，进行检测限的测定，按3倍信噪比计算。β -CD检测限浓度为 20 μ g/mL, 1,2-丙二醇检测限浓度为26 μ g/mL。3、线性线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。取β-⑶与1，2_丙二醇适量，精密称定，分别制成含β-^0.0505、0.2021、
0.3031,0. 5052,0. 7578,1. 5156mg/mL ；含 1，2_ 丙二醇 0. 0498,0. 2989,0. 4981,0. 7471、
1.2452,2. 4905mg/mL的溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ L注入液相色谱仪。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表1-2。表1 β -⑶线性关系考察结果
权利要求
1.一种羟丙基- β _环糊精的质量控制方法，其特征是利用高效液相色谱法测定羟丙基-β -环糊精中β -环糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量，它包括(1)、色谱条件与系统适用性试验用苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6X150-250mm)； 流动相乙腈-水体积比0-20 100-80，不包括0 100，示差折光检测器；(2)、对照品溶液的制备精密称取β-环糊精和1，2-丙二醇对照品，配成二者浓度分别在0. 06-1. 5和0. 08-2. 5mg/ml的对照品溶液；(3)、供试品溶液的制备精密称取羟丙基-β-环糊精，配成浓度10-300mg/ml的供试品溶液；(4)、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-100μ 1，注入液相色谱仪， 测定，按外标法以峰面积计算β-环糊精、1，2_丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量。
2.根据权利要求1所述的羟丙基环糊精的质量控制方法，其特征是(1)中流动相乙腈-水的体积比为2-7 98-93。
3.根据权利要求2所述的羟丙基_β _环糊精的质量控制方法，其特征是流动相乙腈-水的体积比为4 96。
4.根据权利要求1所述的羟丙基环糊精的质量控制方法，其特征是(2)中对照品溶液中β _环糊精、1，2丙二醇的浓度分别为0. 1-1. 5mg/ml,0. 1-2. 5mg/ml。
5.根据权利要求4所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是对照品溶液中 β -环糊精、1，2丙二醇的浓度分别为0. 3mg/ml，0. 5mg/ml。
6.根据权利要求1所述的羟丙基环糊精的质量控制方法，其特征是(3)中供试品溶液浓度为50-200mg/ml。
7.根据权利要求6所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是供试品溶液浓度为 100mg/ml。
8.根据权利要求1所述的羟丙基环糊精的质量控制方法，其特征是(4)中分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-50 μ 1注入液相色谱仪。
9.根据权利要求8所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1注入液相色谱仪。
10.一种羟丙基_ β _环糊精的质量控制方法，其特征是利用高效液相色谱法测定羟丙基-β-环糊精中β-环糊糊的含量，它包括(1)、色谱条件与系统适用性试验用苯基硅烷键合硅胶为填充剂(4X150-250mm)；流动相乙腈-水体积比0-20 100-80，不包括0 100 ；蒸发光散射检测器的漂移管的温度为 85-120°C，气体流量为 1. 5-3. 6L/min ；(2)、对照品溶液的制备精密称取β-环糊精对照品，配成浓度0. 05-2. Omg/ml的对照品溶液；(3)、供试品溶液的制备精密称取羟丙基-β-环糊精，配成浓度10-300mg/ml的供试品溶液；(4)、测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2-100μ1，注入液相色谱仪， 测定，按外标法以峰面积计算环糊精的含量。
11.根据权利要求10所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是(1)中流动相乙腈-水的体积比为2-7 98-93。
12.根据权利要求11所述的羟丙基环糊精的质量控制方法，其特征是流动相乙腈-水的体积比为4 96。
13.根据权利要求10所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是(1)中蒸发光散射检测器漂移管的温度为100-120°C。
14.根据权利要求10所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是(1)中蒸发光散射检测器的气体流量为2-3. 3L/min。
15.根据权利要求14所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是蒸发光散射检测器的气体流量为2. 8L/min。
16.根据权利要求10所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是(2)中对照品溶液中β “环糊精浓度为0. 1-1. 5mg/ml。
17.根据权利要求16所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是对照品溶液中β -环糊精浓度为0. 3mg/ml。
18.根据权利要求10所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是(3)中供试品溶液浓度为20-250mg/ml。
19.根据权利要求18所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是供试品溶液浓度为100mg/ml。
20.根据权利要求10所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是(4)中分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-50 μ 1注入液相色谱仪。
21.根据权利要求20所述的羟丙基-β-环糊精的质量控制方法，其特征是分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1注入液相色谱仪。
全文摘要
本发明提供了高效液相色谱法对羟丙基-β-环糊精进行质量控制的方法，包括对β-环糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量测定。方法简便快捷、专属性好、灵敏度高，不仅实现了对羟丙基-β-环糊精中的两种主要杂质β-环糊精和1，2-丙二醇得含量测定，还明确了另一种杂质-1，2-丙二醇聚合物，实现了3种杂质与羟丙基-β-环糊精的有效分离和杂质的同时定量检测。
文档编号G01N30/02GK102375032SQ201010252278
公开日2012年3月14日 申请日期2010年8月10日 优先权日2010年8月10日
发明者宋倩男, 崔欣艳, 张素娟, 曲刚, 杜艳玲, 梁敏, 王世霞, 申东民 申请人:石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司